天津市科技发展战略研究计划项目(043113511)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 相关作者：杨东靖李力陈锦英苏旭丁建清更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津市卫生防病中心天津市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：天津市科技发展战略研究计划项目天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 S基因片段克隆和序列分析被引量：5
- 2005年
- 目的了解天津地区汉坦病毒分离株TJJ16S基因的分子特征。方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒,命名为TJJ16,提取TJJ16感染VeroE6细胞的总RNA,经逆转录扩增病毒cDNA,继而进行PCR扩增S基因片段,纯化后克隆于pMD18T载体,测定核苷酸序列并进行分析。结果天津地区首次从社鼠中分离出汉坦病毒TJJ16,其S基因片段全序列长为1701nt。只有1个编码N蛋白的开放读码框架(ORF),起始密码子为第37nt,终止于1326nt,推导其编码的蛋白长为429个氨基酸。经核苷酸系统发生树分析,TJJ16株应归属为汉坦病毒的汉滩型(HTN型)毒株,与HTN型新亚型A16株同属一个亚型。结论TJJ16病毒株的分离与S基因片段序列分析,证实在天津市鼠间存在HTN型汉坦病毒感染,对临床和流行病学的研究具有重要意义。
- 李力杨东靖陈锦英丁建清苏旭田永琴魏骏飞
- 关键词：汉坦病毒病毒分离株汉坦病毒感染VERO-E6细胞克隆开放读码框架
- 汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中的克隆及表达被引量：4
- 2006年
- 目的:在大肠埃希菌中克隆和表达汉坦病毒SEO型及HTN型S基因。方法:PCR扩增汉坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因读码区,前者经EcoRI及XhoI双酶切,后者经SacI及XhoI双酶切,将两者定向克隆入pET32a(+),转入感受态E.coliTop10。获取重组质粒,经PCR、双酶切及序列分析鉴定后,转入E.coliBL21感受态,经IPTG诱导表达,其产物经SDS-PAGE和Western-blot检测。结果:SEO型L99株及HTN型Z10株S基因正确克隆于pET32a(+),目的蛋白的分子质量约为67.1ku,表达量占菌体总蛋白的40%以上,Western-blot有特异性条带。结论:SEO型及HTN型汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中获得表达,为其后的应用奠定了基础。
- 徐昭陈锦英李力杨东靖
- 关键词：汉坦病毒大肠杆菌克隆基因表达
- 汉坦病毒重组核蛋白抗体用于鼠肺组织病毒抗原的检测被引量：3
- 2008年
- 目的纯化汉坦病毒(HV)SEO型L99株重组核蛋白(rNP),制备抗体用于鼠肺组织HV抗原的检测。方法重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET32a-L99S经IPTG诱导表达rNP,采用Ni亲和层析方法纯化,纯化蛋白免疫日本大耳白兔,获取抗血清用于间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺组织的HV抗原;并与病人混合血清作为一抗的IFA结果进行比较,部分标本进一步用RT-PCR法进行验证。结果rNP表达量占菌体总蛋白的52.2%,纯化蛋白的总回收率为22.9%;纯化蛋白Western blot分析为单带,纯度达95%以上,用其制备多克隆抗体滴度达1∶512000。IFA检测59份鼠肺标本,用兔rNP抗体和病人混合血清作为一抗其阳性率分别为23.7%和16.9%;两者结果不一致的6份鼠肺经RT-PCR检测HV核酸,均与兔rNP抗体的IFA结果相一致。结论采用rNP抗体进行IFA检测,可显著地提高鼠类HV感染监测的准确性,值得推广使用。
- 赵凤玲陈锦英吕莉琨杨东靖李力
- 关键词：汉坦病毒鼠肺间接免疫荧光
- 天津地区鼠间感染汉坦病毒S基因片段的分型研究被引量：2
- 2006年
- 目的:了解天津地区宿主鼠间感染的汉坦病毒的基因分型。方法:提取经免疫荧光检测证实为汉坦病毒抗原阳性的鼠肺组织的总RNA,经RT-PCR扩增汉坦病毒S基因片段,其产物纯化后与T载体连接并进行序列分析。结果:6份鼠肺标本RT-PCR产物均为阳性,序列分析表明J16为HTN型,B11、BC3、D17、H4、J37均为SEO型,且属于同一亚型。结论:天津地区鼠中存在汉坦病毒主要为HTN型和SEO型。
- 苏旭李力杨东靖王志锐吕杰陈锦英
- 关键词：汉坦病毒基因扩增鼠科
- 天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 M基因片段克隆和序列分析被引量：1
- 2008年
- 目的分析天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 M基因的分子特征。方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒TJJ16,提取TJJ16感染Vero-E6细胞的总RN A,经逆转录扩增病毒cDNA,继而进行PCR分别扩增M1和M2基因片段,克隆于T载体并测序拼接,对其进行序列分析和生物信息学分析。结果汉坦病毒TJJ16株的M基因片段全序列长为3616nt,仅有1个开放读码框架(ORF),编码1 136个氨基酸,序列分析表明其为汉滩型(HTN型)汉坦病毒,与HTN型Q32株同属1个亚型。结论TJJ16病毒株M基因片段的克隆和序列分析证实其为HTN型,系天津地区的首次报道。
- 杨东靖陈锦英李力苏旭丁建清
- 关键词：汉坦病毒
- 鼠肺组织直接用于汉坦病毒S基因序列分析被引量：1
- 2005年
- 目的:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、核苷酸序列分析等技术,尝试建立一种可直接从鼠肺标本中进行汉坦病毒基因分析的方法。方法:提取经免疫荧光法检测汉坦病毒抗原阳性的鼠肺细胞总RNA,经逆转录获取病毒cDNA,纯化,克隆于pMD-18T载体,测定S基因片段核苷酸序列。结果:采用RT-PCRT/A克隆技术成功地从鼠肺组织中扩增出汉坦病毒S基因全序列,序列长为1701nt。只有一个编码N蛋白的开放读码框架(ORF),起始密码子为第37nt,终止于1326nt,推导其编码的蛋白长为429个氨基酸。与该标本分离株(简称TJJ16毒株)S基因的全序列相一致。结论:该方法可对汉坦病毒抗原检测阳性而病毒分离阴性的鼠肺标本进行分子生物学特征性分析,从而建立一种对汉坦病毒在宿主间的流行情况分析的方法。
- 李力杨东靖苏旭王志锐丁建清陈锦英王撷秀
- 关键词：汉坦病毒基因序列分析逆转录-聚合酶链反应核苷酸序列分析病毒抗原检测
- 汉坦病毒S基因毕赤酵母表达系统的构建被引量：2
- 2006年
- 目的构建汉坦病毒HTN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统。方法应用RT-PCR法扩增汉坦病毒Z10株和L99株编码核蛋白的S基因,将扩增产物分别与pGEM-T-Easy载体连接,经序列分析后双酶切,分别定向克隆入载体pPICZαΑ和pPICZαC,继而将重组质粒以SacⅠ线性化并电转化入毕赤酵母X33感受态细胞,用Zeocin筛选高拷贝转化子进行鉴定。结果PCR扩增产物约为1290bp,与T载体相连测序结果与Genbank相应序列比较,核苷酸序列同源性分别为99.84%和99.92%,其编码蛋白质二级结构均无改变。定向克隆获得pPICZα-ΑZ10S和pPICZ-αL99S,分别电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株PpX33-Z10S和PpX33-L99S,提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符。结论成功构建汉坦病毒HIN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统,为进一步研究奠定基础。
- 魏骏飞徐昭李力王志锐杨东靖陈锦英
- 关键词：汉坦病毒S基因毕赤酵母
- 肾综合征出血热早期实验室诊断被引量：6
- 2007年
- 目的:探讨肾综合征出血热(HFRS)患者的早期实验室诊断。方法:分别利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测HFRS患者抗体IgM,免疫荧光法(IFA)检测患者抗体IgG,套式RT-PCR法检测患者血清中的病毒RNA,同时对PCR产物M基因部分片段进行序列分析。结果:16例发病1周以内的患者的血清样本中,IgM阳性比例为9/16,IgG阳性比例为9/16,2者均阳性者为7例,IgM或IgG最早出现在发病后第4天。16例患者中RT-PCR阳性表达有11例,其中在发病≤5d的患者样本中,RT-PCR阳性比例达到11/12,基因分型均为SEO型。结论:相对于血清学检测,利用RT-PCR进行HFRS患者的病毒核酸检测更有利于早期诊断及分子流行病学调查。
- 杨东靖李力陈锦英盛淑琴李宝泉
- 关键词：肾综合征出血热汉坦病毒逆转录聚合酶链反应基因抗体
