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国家高技术研究发展计划(2007AA02Z151)

作品数:6 被引量:1H指数:1
相关作者:周育森童贻刚闾军李军锋杨硕更多>>
相关机构:军事医学科学院首都医科大学附属北京佑安医院安徽医科大学更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项北京市优秀人才培养资助更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 4篇细胞
  • 3篇基因
  • 3篇肝炎
  • 3篇肝炎病毒
  • 3篇丙型
  • 3篇丙型肝炎
  • 3篇丙型肝炎病毒
  • 3篇病毒
  • 2篇细胞模型
  • 2篇小鼠
  • 2篇HCV
  • 2篇HUH7细胞
  • 1篇血清
  • 1篇血清学
  • 1篇血清学检测
  • 1篇血清学试验
  • 1篇药物
  • 1篇药物评价
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达

机构

  • 5篇军事医学科学...
  • 3篇首都医科大学...
  • 1篇安徽医科大学
  • 1篇北京军区总医...
  • 1篇温州医科大学

作者

  • 5篇周育森
  • 4篇童贻刚
  • 3篇闾军
  • 2篇张宝中
  • 2篇娄金丽
  • 2篇孙世惠
  • 2篇于虹
  • 2篇杨硕
  • 2篇李军锋
  • 2篇安小平
  • 1篇吴小红
  • 1篇郭燕菊
  • 1篇徐珩
  • 1篇郭彦
  • 1篇高基民
  • 1篇刘大斌
  • 1篇陈士华
  • 1篇周小军
  • 1篇王盛
  • 1篇冯丹丹

传媒

  • 2篇生物技术通讯
  • 1篇北京医学
  • 1篇解放军医学杂...
  • 1篇中国病理生理...
  • 1篇中华肝脏病杂...

年份

  • 1篇2015
  • 4篇2010
  • 1篇2009
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
高表达CD81的Huh7细胞株对提高HCV病毒感染效率的研究被引量:1
2010年
目的建立具有高感染性的丙型肝炎病毒(HCV)的体外细胞株。方法构建高表达CD81的Huh7细胞株。将HCV质粒(JFH-1,2a)体外转录成RNA,电转染到Huh7和CD81-Huh7细胞中,实时定量PCR法检测两组细胞和培养上清液中病毒载量,间接免疫荧光法检测细胞中HCV核心蛋白表达。收集电转后细胞上清液重新感染两组细胞,检测细胞中病毒RNA表达。结果 CD81-Huh7电转后,细胞和上清液中病毒RNA水平均明显高于Huh71-2log。其被感染的效率也高于Huh7。结论成功建立一株能够高表达感染性HCV病毒颗粒的细胞株CD81-Huh7。
杨硕徐珩顾娜冯丹丹李宁李军锋童贻刚周育森娄金丽闾军
关键词:丙型肝炎病毒CD81HUH7细胞
HCV细胞模型及三氧化二砷抗HCV作用的实验研究进展
2010年
Hepatitis C virus(HCV)is a human pathogen responsible for liver diseases including acute and chronic hepatitis and hepatocellular carcinoma.However,the high prevalence,the absence of antiviral drugs and vaccines for prevention and treatment are the difficult medical problems.Lacking appropriate culture method and small animal model have severely limited investigation of the HCV infection mechanism and the development of the therapeutic strategy.Recently,the in vitro culture system develops rapidly,and provides a powerful tool for HCV related research.Despite the well known toxicity of the chemical,arsenic trioxide(As2O3)is effective for treating the patients with refractory or relapsed acute promyelocytic leukemia and many other cancers.Interestingly,As2O3 shows the ability of inhibiting HCV RNA replication and infection.This review describes the different types of in vitro HCV models developed,and many studies of the potent effect of As2O3 against HCV and its associated molecular mechanisms.
娄金丽杨硕闾军
关键词:细胞培养三氧化二砷
可调控小鼠尿激酶原激活剂真核表达载体的构建及其在Huh7细胞中的表达
2009年
目的:建立基于Tet-on系统的可调控真核细胞表达小鼠尿激酶原激活剂(uPA)的诱导表达系统。方法:提取C57小鼠肾组织总RNA,RT-PCR扩增uPAcDNA序列;提取基因组DNA,扩增uPA编码区后最后一个外显子序列,构建pTRE2-uPAcDNA-700载体,将其与pTet-on瞬时共转染Huh7细胞系,24h后用强力霉素诱导表达,诱导后36h分别收集细胞和培养上清(诱导组),提取细胞总RNA并进行细胞uPA转录水平的检测;采用溶圈法对细胞分泌至培养上清中uPA的生物活性进行检测,同时以转染但未诱导Hun7(未诱导组)和正常培养Huh7(正常对照组)细胞及培养上清作为对照。结果:与未诱导组和正常对照组相比较,仅诱导组在转录水平上扩增出目的条带;溶圈法证实转染的细胞不仅表达uPA,而且表达的蛋白具有一定的生物活性。结论:构建了可调控的uPA真核诱导表达系统,为进一步制备可调控肝细胞表达uPA转基因小鼠及进一步揭示uPA肝损伤机理奠定了基础。
孙世惠郭燕菊李军锋周小军于虹童贻刚周育森
关键词:真核表达系统
可调控肝脏特异性表达HCV全基因转基因小鼠模型的建立
2015年
目的:构建一种可调控肝细胞特异性表达丙型肝炎病毒(HCV)全基因的小动物模型。方法:将9.6 kb的HCV全长基因JFH1插入Tet-on系统效应表达载体p TRE2中,并在HCV全基因3'端插入丁型肝炎病毒(HDV)核酶序列,从而构建转基因载体p TRE2-JFH1(HCV);将该转基因载体线性化后显微注射获得整合有HCV全基因的TRE2-HCV首建鼠;将该阳性鼠与本室保存的Alb-rt TA转基因小鼠杂交,获得肝细胞白蛋白启动子调控HCV全基因表达的Tet-on-Alb-HCV双转基因小鼠;在强力霉素(Dox)诱导后通过PCR、Western印迹、免疫组化等方法鉴定转基因小鼠HCV基因整合及HCV蛋白在肝组织中的表达;实时定量PCR检测小鼠血清及肝组织中的HCV滴度;用HCV反义小分子药物anti-mi R122评价该模型在药物评价中的应用。结果:获得了整合rt TA基因和HCV全长基因的双转基因小鼠;Dox诱导下,该转基因小鼠可在肝组织长期特异性表达HCV全长基因,小鼠血清中可检测到HCV的RNA;分子药物anti-mi R122可降低血清中的HCV滴度。结论:构建了可调控肝组织特异性表达HCV全基因的转基因小鼠模型,该小鼠模型可应用于HCV药物筛选和评价研究。
高同同刘晨风姜玉庭王友亮吴小红曾扬赵亚光郭彦于虹赵光宇高基民孙世惠周育森
关键词:丙型肝炎病毒转基因小鼠药物评价
基于核酶自剪切机制稳定分泌丙型肝炎病毒的细胞模型
2010年
目的 利用核酶自剪切机制建立稳定分泌HCV的细胞膜型.方法 以HCV感染性克隆的全基因组cDNA重组质粒为基础,在基因组两侧引入核酶序列,构建重组质粒pJFH1-核酶,并转染入HepG2细胞,加入G418溶液筛选整合有该质粒的细胞克隆.用荧光定量PCR、免疫荧光、Westrn blot、透射电镜等技术挑选稳定分泌HCV的单细胞克隆.结果 成功筛选到稳定分泌HCV的单细胞克隆,该细胞克隆能够有效产生HCV相关蛋白,上清液中HCV滴度达到1×107拷贝/ml,电子显微镜观察HCV直径为55 nm,上清液中病毒滴度随干扰素α浓度的升高而降低. 结论 利用核酶自剪切机制可建立稳定分泌HCV的细胞模型,该模型可用于抗HCV药物的筛选.
王盛安小平米志强刘大斌张宝中闾军周育森童贻刚
关键词:基因转染
乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用
2010年
目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。
范公忍陈士华安小平张宝中张昕周育森姚鹏童贻刚
关键词:血清学试验酶联免疫吸附测定
共1页<1>
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