国家高技术研究发展计划(2001AA214171)
- 作品数：12 被引量：154H指数：9
- 相关作者：韦宇拓江正强汪嵘黄日波李里特更多>>
- 相关机构：广西大学中国农业大学北京工商大学更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 耐放射异常球菌海藻糖合成酶基因的克隆及功能鉴定被引量：10
- 2004年
- 利用生物信息学手段 ,在GenBank中进行氨基酸序列的同源性比较分析 ,检索到来自于耐放射异常球菌(Deinococcusradiodurans)基因组序列中一功能未确定的开放阅读框 (ORF) ,其氨基酸序列和已报道的海藻糖合成酶的氨基酸序列有约 6 0 %的同源性 .将这段ORF克隆到大肠杆菌进行表达 ,并进行功能鉴定 .实验表明这段ORF序列所编码的是一种海藻糖合成酶 ,它能将麦芽糖分子转化成海藻糖分子 ,以 30 %的麦芽糖为底物时能将约 6 5 %的麦芽糖转化成海藻糖 .重组酶性质初步研究表明 ,在 pH 7 0 ,最佳温度 30℃转化麦芽糖效率 最高 .
- 韦宇拓朱绮霞罗兆飞陈发忠李桂媛黄鲲黄日波
- 关键词：海藻糖合成酶基因克隆
- 高密度培养基因工程菌的条件优化被引量：19
- 2002年
- 高密度发酵是发酵工业的发展趋势之一。然而 ,随着发酵规模的扩大 ,诸多因素影响着基因工程菌的表达和产物形成量的高低。本文分析和介绍了宿主、营养、p H、温度、溶氧。
- 汪嵘赵颖怡张云开韦宇拓林莹
- 关键词：基因工程菌高密度发酵高密度发酵
- 谷氨酸棒杆菌海藻糖合成酶基因的克隆及功能鉴定被引量：2
- 2005年
- 利用生物信息学手段,在GenBank数据库进行氨基酸的同源性检索分析,发现来自谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)一功能未确定的ORF序列被注释为假设的海藻糖酶(putative trehalose synthase),它与已报道的海藻糖合成酶的氨基酸序列有60%以上的同源性.本研究把这段ORF克隆到大肠杆菌进行表达及进行功能鉴定.实验表明这段ORF序列为一新的海藻糖合成酶基因,其表达产物能将麦芽糖分子转化成海藻糖分子.重组酶性质的初步研究表明重组酶在pH 7.0～7.5,30℃转化麦芽糖效率最高.
- 韦宇拓朱绮霞罗兆飞陈发忠汪嵘黄日波
- 关键词：谷氨酸棒杆菌海藻糖合成酶基因克隆海藻糖
- 极端耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的高效表达被引量：16
- 2005年
- 以海栖热袍菌 (Thermotogamaritima)MSB8菌株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增出木聚糖酶 (XylanaseB)基因 ,将此基因克隆至大肠杆菌表达载体pET_2 8a(+)和毕赤酵母表达载体pPIC9K ,并分别转化大肠杆菌BL2 1和毕赤酵母GS115。该木聚糖酶在大肠杆菌细胞中表达量高 ,但不能分泌 ;而在毕赤酵母细胞的表达产物可分泌至胞外。酶学性质分析表明 ,此酶分子量约为 4 0kD ,其最适反应温度为 90℃ ,最适反应pH值为 6 6 5 ,且在碱性条件下稳定 ,具有重要的工业应用前景。
- 杨梦华李颖关国华江正强
- 关键词：大肠杆菌巴斯德毕赤酵母重组蛋白异源表达
- 烷基木糖苷的酶法合成及其纯化被引量：8
- 2004年
- 用海栖热袍菌的极耐高温木聚糖酶B(XynB)水解木聚糖,通过转糖苷化反应合成了β-(1,4)烷基木单苷和木二苷.XynB能够水解对硝基木单苷(p-nitrophenyl-β-D-xylopyranoside, pNP-X)和对硝基木二苷(p-nitrophenyl-β-D-xylobioside, pNP-X2),同时以不同长度碳链(C1-C4)的醇及其异构醇和二级结构醇作为转糖苷化反应的受体,生成烷基木单苷和木二苷.另外XynB还可以水解天然木聚糖,同时合成产量很高的烷基木单苷和烷基木二苷.反应生成物采用活性碳层析柱进行分离纯化,用40-的乙醇梯度洗脱,洗脱液流速为1.5 mL/min,得到纯的β-(1,4)烷基木单苷和木二苷.
- 朱运平江正强李里特李道义沈颖桀
- 关键词：酶法合成海栖热袍菌
- 巴斯德毕赤酵母新型分泌表达载体构建被引量：10
- 2003年
- 巴斯德毕赤酵母分泌表达载体 p PICINU是利用来源于克鲁维酵母 ( Kluyveromycesmarxianus)的菊粉酶基因信号肽 DNA序列 ( ISP)构建的。表达实验结果表明 ,带有分泌表达载体 p PICINU的β-1 ,3 -1 ,4葡聚糖酶基因重组菌 ,具有与带有表达载体 p PIC 9K (带有α因子信号肽 )的β-1 ,3 -1 。
- 韦宇拓甘凤琼苏华波赵颖怡汪嵘黄日波
- 关键词：巴斯德毕赤酵母分泌表达
- 人血清白蛋白的研究进展被引量：20
- 2002年
- 人血清白蛋白作为血浆容量扩充剂用途广泛 ,是当前的研究热点之一。本文综述了其结构组成、功能和表达现状。用基因工程大幅度提高 r
- 赵颖怡汪嵘韦宇拓董燕甘凤琼
- 关键词：人血清白蛋白基因工程
- 运用SVMs原理预测蛋白质二级结构研究
- 本文主要探讨支持向量机(SVMs)进行蛋白质二级结构模式识别的主要过程,并依据该方法对进行了蛋白质的α—螺旋转β—折叠进行了二元预测,每个子序列的预测正确率为83.5%。
- 孙向东黄日波
- 关键词：统计学习理论结构风险最小化原则支持向量机最优分类超平面
- 文献传递
- 海栖热袍菌极耐高温木聚糖酶B的化学修饰和活性中心被引量：9
- 2004年
- 分别用NBS、DTNB、Phenylgloxal、PMSF、WRK等对海栖热袍菌极耐高温木聚糖酶B进行化学修饰 .结果表明 ,酶蛋白分子上的色氨酸和谷氨酸 (或天冬氨酸 )残基是维持酶活性的必需基团 .半胱氨酸、精氨酸、丝氨酸及组氨酸残基均不处于酶活性中心 .而修饰酶热稳定性测定结果是 ,羧基对稳定性起重要作用 .通过测定修饰酶的假一级常数 ,得到一个色氨酸残基和一个谷氨酸 (或天冬氨酸 )残基为极耐高温木聚糖酶B所必需 .在加入少量底物后 ,极耐高温木聚糖酶B的最大荧光发射峰从天然状态下的 336nm处红移至 345nm ,且峰强度下降 .这表明色氨酸残基位于酶蛋白表面 .图 7表 2参
- 余小红李里特江正强李秀婷
- 关键词：海栖热袍菌化学修饰活性中心
- 合成耐高温α-淀粉酶基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达被引量：13
- 2005年
- PFA是来源于Pyrococcus furious的一种耐高温α-淀粉酶,为了使PFA能够在巴斯德毕赤酵母中高效表达,根据巴斯德毕赤酵母密码子的偏好性对PFA的基因序列进行密码子优化,人工合成耐高温淀粉酶PFA基因pfa,并连接到巴斯德毕赤酵母中表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-pfa。重组质粒线性化后转化到巴斯德毕赤酵母菌株GS115中,重组菌株在摇瓶中用甲醇诱导表达,分泌表达酶活最高为220 U／L。
- 韦宇拓汪嵘杜丽琴陆坚黄鲲黄日波
- 关键词：耐高温性能Α-淀粉酶巴斯德毕赤酵母基因表达
