国家自然科学基金(30572037)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 相关作者：杨秋波杨圣辉余飞燕耿效宇林梅更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京口腔医院首都医科大学首都医科大学附属北京朝阳医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 牙龈卟啉单胞菌对铁和亚铁血红素的摄取机制被引量：2
- 2007年
- 牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)是慢性牙周病重要病原菌之一。作为绝对需铁菌,牙龈卟啉单胞菌不能产生铁载体。所以在人体中,牙龈卟啉单胞菌主要利用外源的铁/亚铁血红素,通过特异性外膜受体结合含铁蛋白中的铁/亚铁血红素,并将其转运至细胞内。铁/亚铁血红素对于牙龈卟啉单胞菌的生长和毒性都起着重要作用。本文主要介绍牙龈卟啉单胞菌对铁和亚铁血红素的摄取机制。
- 林梅杨秋波杨圣辉
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌受体结合病原菌铁载体细胞内
- 牙龈卟啉单胞菌血凝素2与氯化血红素结合多肽的序列分析被引量：5
- 2009年
- 目的明确牙龈卟啉单胞菌血凝素2（Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2，PgHA-2）与氯化血红素结合的多肽片段氨基酸序列，为牙周病保护性抗体的制备奠定基础。方法提取Pg ATCC33277基因组DNA，原核克隆重组表达HA-2，质粒测序，蛋白质印迹法及质谱分析法鉴定重组HA-2（recombinant HA-2，rHA-2）。利用氯化血红素琼脂糖珠验证rHA-2的氯化血红素结合功能。利用多肽内切酶水解与氯化血红素结合的rHA-2，获得与氯化血红素结合的多肽片段，质谱分析多肽片段的氨基酸序列。结果PCR鉴定、质粒测序、蛋白质印迹法及质谱分析结果均证实原核表达蛋白为Pg的HA-2。氯化血红素结合实验明确了rHA-2具有与氯化血红素结合的功能。质谱分析与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列为DHYAVMISKTGTNAG。结论成功基因克隆重组与原核表达了具有与氯化血红素结合功能的PgHA-2，明确了与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列，为针对Pg的牙周病免疫预防和治疗药物的开发奠定了基础。
- 杨秋波余飞燕杨圣辉
- 关键词：紫单胞菌血凝素类
- 多肽内切酶鉴定牙龈卟啉单胞菌血凝素2结合位点被引量：5
- 2010年
- 目的利用多肽内切酶分析牙龈卟啉单胞菌凝血素2(Porphyromonas gingivalishemagglutinin-2,PgHA-2)与氯化血红素结合位点的氨基酸序列。方法Endoproteinase Lys-C多肽内切酶水解获得与氯化血红素结合的功能性的多肽片段,质谱技术鉴定多肽片段的氨基酸序列。结果质谱鉴定与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列为YAVNDGFPGDHYAVMISK。结论进一步明确了HA-2与氯化血红素结合位点的氨基酸序列,为牙周病的预防和治疗方法的改进奠定基础。
- 余飞燕杨秋波杨圣辉
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌血凝素氨基酸序列分析
- 牙龈卟啉单胞菌血凝素2基因缺陷型突变株的构建被引量：1
- 2009年
- 目的构建牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）血凝素2（hemagglutinin—adhesin2，HA-2）基因缺陷型突变株，为研究HA-2基因功能奠定基础。方法PCR扩增PgHA-2基因两翼片段HAu、HAl，将抗性基因ermF—ermAM连接到两者之间构建打靶载体HA—ermF—ermAM。将HA—ermF—ermAM电转化PgATCC33277，基因同源重组整合进入PgATCC33277染色体，用选择性培养基筛选获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。进行PgATCC33277HA．2基因缺陷型突变株与其野生株凝血功能试验，比较二者的凝血功能差异。结果PCR、酶切和测序鉴定结果表明，打靶载体HA—ermF—ermAM成功构建。经PCR鉴定，打靶载体HA—ermF—ermAM通过同源重组整合进入PgATCC33277染色体，成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。凝血实验结果表明，PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株与野生株相比凝血能力明显减弱。结论成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株，为进一步研究HA-2的生物学性质奠定了基础。
- 林梅杨秋波杨圣辉
- 关键词：紫单胞菌血凝素类基因打靶血液凝固
- 乳牙急性根尖周脓肿细菌的DGGE分析被引量：3
- 2009年
- 目的用PCR-DGGE方法分析乳牙急性根尖周脓肿细菌,以期进一步阐明乳牙急性根尖周脓肿细菌病因学特点。方法采取乳牙急性根尖周脓肿脓液,提取细菌总DNA,采用通用引物对细菌16S rRNA基因的V2-V3区进行扩增,PCR产物进行变性梯度凝胶电泳,切取电泳的条带进行DNA回收,PCR再次扩增后进行克隆测序,鉴定细菌,分析细菌组成。结果乳牙急性根尖周脓肿优势菌的检出从高到低依次是普雷沃菌90.9%,梭杆菌81.8%,消化链球菌63.6%,卟啉单胞菌45.5%,链球菌45.5%,真杆菌45.5%,乳酸杆菌27.3%,弯曲菌27.3%,密螺旋体27.3%,布雷德菌27.3%。结论乳牙急性根尖周脓肿细菌存在个体差异,某些特定细菌以较高频率存在。细菌16S rRNA基因PCR-DGGE,切胶,克隆测序方法除检测出培养法检出的细菌外,还检出难培养的和未预料到的细菌。
- 杨秋波樊鲁娜时清
- 关键词：细菌变性梯度凝胶电泳
- 牙龈卟啉单胞菌血凝素2氯化血红素结合位点多肽对牙龈卟啉单胞菌生长抑制作用被引量：4
- 2014年
- 目的探讨牙龈卟啉单胞菌血凝素2(Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2,Pg HA-2)的氯化血红素结合位点多肽对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)摄取氯化血红素生长的影响。方法合成多肽DHYAVMISK(肽1),DEYAVMISK(肽2,肽1中第2位氨基酸突变为谷氨酸),ALHPDHYLI(肽3,HA-2结合位点不相关多肽)。将肽1、肽2、肽3分别与氯化血红素琼脂糖珠预孵育,加入Pg重组血凝素2(Porphyromonas gingivalis recombinant HA-2,Pg rHA-2),收集与氯化血红素结合的Pg rHA-2,SDSPAGE电泳,分析多肽对Pg rHA-2与氯化血红素结合的抑制作用。肽1、肽2、肽3与氯化血红素预孵育后,加入到CDC液体培养基中培养Pg,测定菌液A600值,分析多肽对Pg生长的抑制作用。结果肽1浓度依赖性抑制Pg rHA-2与氯化血红素结合,而肽2和肽3对Pg rHA-2与氯化血红素的结合无抑制作用。在24、48和72 h时间点,肽1组的A600值较肽2、肽3和PBS组明显降低(P<0.05)。结论本研究表明Pg HA-2氯化血红素结合位点多肽DHYAVMISK与Pg竞争结合氯化血红素,抑制Pg的生长,为开发新的牙周病防治方法奠定基础。
- 刘瑞杰耿效宇刘颖李金陆杨秋波
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌
- 牙龈卟啉单胞菌血凝素2与氯化血红素结合位点分析被引量：1
- 2013年
- 目的通过竞争性ELISA方法明确牙龈卟啉单胞菌血凝素2(Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2,Pg HA-2)与氯化血红素结合的多肽位点,为牙周病保护性抗体的制备奠定基础。方法人工合成疑为Pg HA-2氯化血红素结合位点的多肽片段,制备抗Pg HA-2单克隆抗体(MAb QB),通过间接竞争性ELISA,进一步分析血红素特异性结合位点。结果 Pg HA-2氯化血红素结合位点的氨基酸序列为DGFPGDHYAVMISK。MAb QB可以抑制Pg HA-2与氯化血红素结合。结论明确了Pg HA-2氯化血红素结合位点的氨基酸序列,确定了Pg HA-2氯化血红素结合位点的位置。为今后Pg HA-2氯化血红素结合位点的鉴定、功能结构区分析和多肽疫苗的制备奠定基础。
- 耿效宇孙璐杨秋波
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌单克隆抗体
