国家自然科学基金(81000272)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- RGS22抑制裸鼠中人胃癌SGC-7901细胞转移的研究
- 2012年
- 目的探讨RGS22对人胃癌SGC-7901细胞在裸鼠体内转移的影响。方法将人RGS22基因克隆到逆转录病毒表达质粒LZRsPBMN中,构建重组质粒LZR-RGS22。以GFP为对照构建LZR-GFP。转染人胃癌SGC-7901细胞,Western blot法检测不同细胞中RGS22的表达。设计不同针对RGS22的RNAi片段和对照RNAi,将其构建入pSilenc-er2.1-U6 neo siRNA载体中,转染SGC-7901-LZR-RGS22细胞。RT-PCR法检测不同细胞中RGS22的表达。将不同组细胞注射于裸鼠腹腔内,观察不同肿瘤细胞的转移情况。结果 SGC-7901-LZR-RGS22细胞中146、112和76 ku片段RGS22蛋白表达较对照SGC-7901-LZR-GFP细胞表达均明显提高。RNAi 484片段和3313片段对RGS22的表达均有抑制作用。在裸鼠肿瘤转移实验中,RGS22能抑制SGC-7901肿瘤细胞向远处器官的转移,当其表达下调后,这种抑制效应又变弱。结论 RGS22能够抑制人胃癌SGC-7901在裸鼠中的转移。
- 胡艳秋郑英
- 关键词：SGC-7901细胞裸鼠肿瘤转移
- 人RGS22蛋白表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2011年
- 目的:构建人RGS22真核表达载体,表达人RGS22蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生和肿瘤转移中的作用。方法:以cDNA文库为模板,用PCR法扩增人的RGS22基因。将其克隆到原核表达质粒PET22b中,构建重组质粒PET22b-RGS22。将该重组质粒依次进行PCR、酶切鉴定及测序后,转化BL21菌,以IPTG诱导表达。表达产物用质谱鉴定。纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,ELISA测定滴度。结果:用PCR法扩增出3 800 bp的RGS22基因编码框,测序证实为人RGS22基因,并在BL21菌中表达RGS22重组蛋白,用亲和层析N i柱进行纯化得到人RGS22蛋白。质谱分析其肽混合物的肽质量指纹谱,数据库检索证实为RGS22蛋白。用纯化的RGS22重组蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度均能达到1/10万。结论:制备了RGS22的多克隆抗体,为进一步研究RGS22在精子发生中的作用创造了有利条件。
- 胡艳秋
- 关键词：蛋白表达抗体制备
- PIAS-NY稳定转染小鼠精母细胞株的构建与鉴定
- 2013年
- 目的:构建PIAS-NY基因慢病毒质粒,并将包装所得慢病毒感染小鼠精母细胞,获得稳定过表达PIAS-NY的细胞株。方法:应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,对阳性克隆进行PCR筛选及测序鉴定。将重组质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,获得含慢病毒颗粒的细胞上清,用慢病毒感染小鼠精母细胞,并用Western印迹方法检测细胞中PIAS-NY蛋白的表达。结果:成功构建了pGC-FU-PIAS-NY慢病毒表达质粒,获得了稳定过表达PIAS-NY的小鼠精母细胞株。结论:PIAS-NY过表达慢病毒质粒及稳定转染小鼠精母细胞株的构建,为进一步体外研究PIAS-NY基因在精子发生中的功能奠定了基础。
- 郑英王海燕张露萍孙红亚梁虹贾筱琴胡艳秋朱永泽
- 关键词：慢病毒载体
- 冷冻胚胎解冻后单胚胎移植的可行性探讨
- 2013年
- 目的探讨冷冻卵裂期胚胎解冻(FET)后单胚胎移植的可行性。方法选取我院收治的不孕患者249例,按照胚胎移植数量分为单胚胎移植组(60例)、双胚胎移植组(168例)、三胚胎移植组(21例),观察胚胎移植情况及临床妊娠情况;双胚胎移植组按胚胎优劣分为双优质胚胎移植组(103例)、单优质胚胎搭配非优质胚胎移植组(50例)、无优质胚胎移植组(15例),观察胚胎移植情况、临床妊娠情况及多胎发生情况。结果单胚胎移植组、双胚胎移植组、三胚胎移植组胚胎种植成功分别为18个(30%)、97个(28.87%)、13个(20.63%),三组比较P均>0.05;临床妊娠分别为18例(30%)、77例(45.83%)、7例(33.33%),单胚胎移植组与双胚胎移植组比较P<0.05。双优质胚胎移植组、单优质胚胎搭配非优质胚胎移植组、无优质胚胎组胚胎种植成功分别为65个(31.55%)、26个(26%)、6个(20%),两两比较P均>0.05;临床妊娠分别为47例(45.63%)、25例(50%)、5例(33.33%),两两比较P均>0.05;多胎发生分别为18例(38.30%)、1例(4%)、1例(20%),双优质胚胎移植组与单优质胚胎搭配非优质胚胎移植组比较P均<0.01。结论 FET后单胚胎移植可行,选择优质胚胎进行单胚胎移植能够获得满意的胚胎种植和临床妊娠结果。
- 佘宏胡艳秋李晓聪
- 关键词：冷冻胚胎胚胎移植单胚胎移植
