国家自然科学基金(30270700)
- 作品数：20 被引量：109H指数：7
- 相关作者：曾园山李海标郭家松黄文林陈穗君更多>>
- 相关机构：中山大学中国人民解放军第一军医大学昆明医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省社会发展攻关项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同靶细胞在基因治疗中枢神经损伤中的应用
- 2003年
- 近年来基因治疗逐步运用到CNS损伤及再生的研究中 ,获得理想的靶细胞是CNS基因治疗的一个关键问题。一般认为能用于基因修饰并植入CNS内进行基因治疗的理想靶细胞应具备以下几个要素 :容易被修饰、具有表达和分泌转基因产物的能力、具有在体外及移植后在宿主内生存的能力 ,以及基因修饰前已经具有促神经元生长的固有特性等等。目前运用于CNS基因治疗的靶细胞主要是雪旺细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞、神经干细胞和成肌细胞。本文对这些靶细胞本身在中枢神经再生方面的作用。
- 郭家松曾园山李海标
- 关键词：靶细胞基因治疗中枢神经损伤神经再生神经元
- 胶原或明胶吸附施万细胞移植促进全横断脊髓损伤修复的研究被引量：12
- 2003年
- 目的 探讨胶原或明胶吸附施万细胞移植对全横断脊髓结构和功能修复的影响。 方法 将胶原或明胶吸附施万细胞移植到成年大鼠全横断脊髓的损伤处 ,术后 3个月用爬网格方式测试动物后肢自主运动功能恢复情况 ;用荧光金逆行标记法观察大脑感觉运动区和脑干红核的神经元神经纤维再生 ;用免疫组织化学法检测脊髓CGRP和 5 HT能神经纤维再生。 结果 移植施万细胞的大鼠后肢自主运动功能有显著的恢复。大脑感觉运动区和脑干红核均有被荧光金标记的神经元胞体 ,提示两个区域的神经元轴突能在脊髓再生并穿越损伤区到达尾侧脊髓。脊髓损伤处有CGRP和 5 HT阳性神经纤维 ,以及损伤处尾侧有 5 HT阳性神经纤维。对照组大鼠以上结果均为阴性。 结论 施万细胞移植可促进大鼠全横断脊髓结构和功能的恢复。胶原或明胶可作为移植细胞的网架用于细胞治疗。
- 吴立志曾园山李海标蔡道章张燕青郭家松丁英陈穗君
- 关键词：脊髓全横断脊髓损伤明胶海绵I型胶原神经纤维再生
- 人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体的表达和生物学活性检测
- 2006年
- 目的探讨人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体(Adeno-TrkC)在神经干细胞内的表达及其对神经干细胞的生物活性作用。方法用RT-PCR检测Adeno_TrkC感染的293细胞的TrkCmRNA含量。用免疫细胞化学和Westernblotting检测Adeno-TrkC感染的神经干细胞表达TrkC受体蛋白。在体外培养条件下,观察人神经营养素-3(NT-3)对感染了Adeno-TrkC的神经干细胞分化为神经元样细胞和星形胶质样细胞的影响。结果在Adeno-TrkC感染的293细胞和神经干细胞中检测到TrkCmRNA和TrkC受体蛋白,且表达产物和其配体NT-3结合后能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞,分化率达到55.2%,均高于其他对照组。结论Adeno_TrkC能在神经干细胞内表达TrkC受体蛋白,这种TrkC受体蛋白具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞活性的作用,这为进一步应用NT-3和TrkC联合进行基因治疗中枢神经损伤研究奠定了基础。
- 王俊梅曾园山黄文林熊轶王延华
- 关键词：TRKC重组腺病毒WESTERNBLOTTING
- 过表达NT-3 SCs和过表达TrkC NSCs移植减少脊髓损伤处瘢痕形成和促进神经再生被引量：4
- 2011年
- 目的探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)和NT-3受体(TrkC)基因修饰神经干细胞(NSCs)联合移植能否减少大鼠脊髓全横断损伤处的瘢痕组织,并促进下行神经纤维再生。方法用NT-3基因的重组腺病毒(Ad-NT-3)感染培养的SCs(NT-3-SCs),同时用含TrkC基因的重组腺病毒(Ad-TrkC)感染培养的NSCs(TrkC-NSCs)。此外,还将Ad-LacZ分别感染SCs和NSCs。然后建立大鼠脊髓全横断损伤模型,将NT-3-SCs+TrkC-NSCs联合移植到损伤处。所有动物存活60 d后,在脊髓横断处远端3 mm组织内注射荧光金(FG),动物再存活7 d。最后灌注固定动物、取材和切片,并行形态学观察。结果①在移植组中,脊髓横断处头侧端、中脑红核及大脑体感运动区皮质内锥体细胞层有少量FG标记神经元。②在脊髓损伤区内,细胞移植组比对照组的纤维粘连蛋白(FN)阳性细胞减少,S-100阳性细胞增多。③电镜下可见,细胞移植组的脊髓损伤区内成纤维细胞和胶原纤维减少。结论 NT-3基因修饰SCs和TrkC基因修饰NSCs联合移植能够减少大鼠脊髓全横断损伤处的瘢痕组织,促进下行神经纤维的再生。
- 王俊梅曾园山
- 关键词：神经营养素-3TRKC脊髓损伤神经纤维再生
- 督脉电针与神经干细胞移植在脊髓损伤修复中的作用被引量：18
- 2005年
- 曾园山李晓滨郭家松陈雅云丁英陈玉玲
- 关键词：神经干细胞移植督脉电针急性脊髓损伤脊髓损害经济负担
- 人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建
- 2005年
- 【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C,tyrosineproteinkinaseC,TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA中扩增TrkC基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA(Adeno-XviralDNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-TrkC)。【结果】TrkC基因RT-PCR扩增产物为2478bp。Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子。【结论】应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体,这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础。
- 王俊梅曾园山刘然义吴立志薛刚黄嘉凌黄必军黄文林
- 关键词：基因克隆重组腺病毒
- NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞被引量：11
- 2005年
- 目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在体外可分化为神经元样细胞(NF阳性)和神经胶质样细胞(GFAP阳性),与未基因修饰的SCs相比,NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率,而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。
- 郭家松曾园山李海标黄文林刘然义
- 关键词：干细胞神经元样细胞
- 腺病毒介导神经营养素-3基因转染施万细胞被引量：6
- 2004年
- 【目的】构建神经营养素-3(NT-3)基因转染的施万细胞。【方法】NT-3基因重组腺病毒(AdvNT-3)扩增、纯化和测定后,转染体外培养的施万细胞(SCs)。用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测NT-3基因转染SCs的NT-3表达及培养液中NT-3的含量。【结果】实验中获得的AdvNT-3中外源基因序列与大鼠NT-3的DNA序列完全一致,与未基因转染SCs相比,NT-3基因转染SCs的NT-3阳性增强,培养液中NT-3含量增高。【结论】通过腺病毒介导可以获得NT-3过量表达的基因转染SCs。
- 郭家松曾园山黄文林刘然义吴立志胡金家李海标
- 关键词：腺病毒神经营养素-3基因转染施万细胞NT-3SCS
- 施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨移植的施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响。 方法 5 0只成年SD大鼠被分为实验组和对照组。在胸 11脊髓段半横切后立即在损伤处移植入施万细胞。 结果 脊髓半横切后 ,15d和 2 5d对照组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数均比未损伤侧的明显减少。存活的神经元胞体出现明显皱缩 ,有些神经元呈现NADPH d阳性。 15d和 2 5d施万细胞组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数则比同期对照组的明显增加 ,表达NOS的存活神经元数也随之增多。但存活的神经元胞体仍然是皱缩的。 结论 移植的SCs可促进受损伤的背核神经元存活及其表达NOS 。
- 张燕青曾园山吴立志李海标陈穗君
- 关键词：脊髓半横切施万细胞背核神经元存活脊髓外伤
- 施万细胞对培养的神经干细胞存活及其分化的影响被引量：11
- 2003年
- 目的 探讨施万细胞能否在体外促进神经干细胞的存活和分化。 方法 分离和克隆新生大鼠海马组织的神经干细胞 ;同时获取坐骨神经和臂丛神经 ,从中分离和纯化施万细胞。将施万细胞和神经干细胞进行共培养 ,借助免疫细胞化学技术检测培养的神经干细胞巢蛋白 (nestin)的表达及其分化后神经丝蛋白 (NF)和胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。应用扫描电镜观察神经干细胞的形态变化。 结果 与施万细胞一起培养的神经干细胞存活数量增加 ,分化为神经元样细胞的数量也明显增加。这些神经元样细胞的初级突起比对照组的明显增长。施万细胞能使神经干细胞胞体表面不规则的凹凸变得平整。共培养的施万细胞和神经干细胞可以 3种方式接触生长 :1 胞体与胞体接触 ;2 胞体与突起接触 ;3 突起与突起接触。
- 丁英曾园山庄菁罗超权李海标陈穗君
- 关键词：施万细胞神经干细胞扫描电镜神经丝蛋白胶质原纤维酸性蛋白
