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体内表达谷胱甘肽过氧化物酶-7基因对骨髓抑制的防护作用研究被引量：1: 2008年; 目的探讨体内表达谷胱甘肽过氧化物酶-7基因(Gpx-7)对5-氟尿嘧啶(5-Fu)引发小鼠骨髓抑制的防护作用。方法以尾静脉注射5-Fu(250mg/kg)的方法建立小鼠骨髓抑制和再生模型。5-Fu注射后第1天,通过电穿孔转染法将pcDNA3.1-Gpx7重组质粒50μg注入小鼠胫前肌(实验组),以pcDNA3.1空质粒载体50μg电穿孔转染作为对照组,每组各30只小鼠。5-Fu注射前和注射后3、7、11、14d,2组各断颈处死6只小鼠,计数小鼠外周血白细胞数、血小板数和单条腿骨髓细胞总数;然后分别取5-Fu注射后7、14d断颈处死小鼠各3只进行骨髓细胞集落形成试验;并分别取5-Fu注射前和注射后3、7、11、14d断颈处死的小鼠各1只制备完整大腿骨石蜡组织切片,观察骨髓组织形态学的变化。结果注射5-Fu后11和14d,实验组外周血白细胞数分别为(3917±733)和(6857±1878)/μl,均明显高于同时点对照组[分别为(2683±920)和(4017±1011)/μl,均P<0.05)];注射5-Fu后11d,实验组外周血小板数为(150.8±64.3)万/μl,明显高于同时点对照组[(63.0±60.3)万/μl,P<0.05)];注射5-Fu后不同时间2组间单条腿骨髓细胞总数差异无统计学意义。注射5-Fu后7、14d,2组之间骨髓细胞集落形成数差异无统计学意义。实验组注射5-Fu后11d小鼠的骨髓组织形态恢复程度与对照组注射5-Fu后14d小鼠类似;注射5-Fu后14d小鼠的骨髓组织形态接近注射前。结论体内表达Gpx-7基因可以促进被化疗药物5-Fu抑制的小鼠骨髓再生。; 毛文伟王晓何慧娟沈娟俞眉杜丽娟张忠辉朱顺英吴明媛路慧丽王群韩伟; 关键词：基因表达骨髓谷胱甘肽过氧化酶

酵母双杂交研究小鼠肝脏再生TGF-β调控通路中相关转录因子的相互作用: 2011年; 目的采用酵母双杂交系统研究肝脏再生调控途径转化生长因子β(TGF-β)信号通路中4种转录因子的相互作用。方法经CCl4腹腔注射诱导建立小鼠肝损伤再生模型,提取模型小鼠肝脏组织总RNA作为模板,经RT-PCR获得cDNA。经肝脏再生基因芯片检测显示差异表达且与TGF-β信号通路相关的激活转录因子3(ATF3)、DNA结合抑制因子3(ID3)、DNA损伤诱导的转录因子3(DDIT3)和LIM蛋白家族成员FHL2(FHL2)作为候选基因,进行基因克隆和载体构建,PCR及DNA测序鉴定。采用酵母双杂交系统进行自激活检测实验和酵母双杂交实验,观察ATF3、FHL2、DDIT3和ID3之间的相互作用。结果 PCR及DNA测序鉴定表明,ATF3、FHL2、DDIT3、ID3基因克隆与载体构建成功。自激活检测显示ATF3、FHL2、DDIT3和ID3不存在自激活现象;酵母双杂交实验发现7对蛋白互作,分别为ID3/ATF3、FHL2/ATF3、ATF3/ATF3、FHL2/FHL2、ID3/FHL2、ID3/ID3和ID3/DDIT3。结论 ATF3、FHL2和ID3间的蛋白互作可能对TGF-β信号通路具有调控作用;蛋白互作网络可作为肝损伤再生机制研究的途径之一。; 谢超王方圆袁运生郜尽朱润芝韩伟俞雁; 关键词：肝脏再生转录因子酵母双杂交系统

硫酸酯酶2型基因体内表达促进5-氟脲嘧啶诱发的小鼠骨髓抑制恢复作用研究: 2008年; 采用半定量RT-PCR和重组基因体内表达法观察了硫酸酯酶2基因(Sulfatase 2,Sulf2)在5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)诱发的小鼠骨髓抑制和再生过程中作用。结果表明:Sulf2在小鼠骨髓抑制和再生过程中呈现先上升,后下降的动态表达;电转pcDNA3.1-Sulf2基因实验组外周血白细胞数和血小板数在5-Fu注射后第7天分别为(1216.7±457.9)/μl和(8.1±5.4)万/μl,明显低于对照组[分别为(1691.7±228.9)/μl和(14.7±2.1)万/μl],实验组单条腿骨髓细胞总数在第7天为(94.2±21.1)万,显著低于对照组(173±59.9)万,但在第11天为(585±337.9)万,又显著地高于对照组(255±65.3)万,实验组第7天10000个骨髓细胞总集落形成数为(9±8.4),显著低于对照组(39±12.2),统计均有显著性差异(p<0.05)。这些结果提示Sulf2可能对5-Fu诱发的小鼠骨髓抑制后的再生具有促进作用。; 毛文伟王霞梁迁何慧娟魏兆莲林小娟黄薇薇吴明媛朱顺英路慧丽王群韩伟; 关键词：骨髓 5-氟尿嘧啶基因表达

MAPK信号通路基因在小鼠肝再生中的表达谱变化被引量：6: 2010年; 为了分析丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases,MAPK)信号通路基因在肝再生中的表达图谱,以及探讨MAPK信号通路在肝再生中的作用,文章利用四氯化碳(Carbon Tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝损伤再生模型对MAPK信号通路基因的表达进行检测。首先,采用CCl4腹腔注射的方法建立小鼠肝损伤再生模型,通过肝脏切片HE染色和测定血清中谷丙转氨酶活性确认模型的质量,然后,在注射CCl4后的第0、0.5、1.5、4.5、7d分别采集小鼠肝脏样本,应用Affymetrix公司的小鼠基因表达芯片,检测MAPK信号通路中93个基因的差异表达图谱,并用荧光实时定量PCR法验证芯片检测的结果。结果表明,在芯片检测到的93个MAPK信号通路基因中,有31个在肝再生中有不同程度差异表达,且经荧光实时定量RT-PCR检测的结果与基因芯片的结果相符合。基因表达谱芯片技术可以筛选出肝再生中差异表达的基因,在小鼠肝再生中的第0.5和1.5d,MAPK信号通路中表达水平上调的基因增多,而在第4.5和7d,则表达水平下调的基因明显增多。这一结果表明MAPK信号通路对肝再生不同阶段的双重调控作用。; 赖林泉袁运生郜尽朱润芝俞雁; 关键词：肝脏再生 MAPK信号通路实时定量PCR

小鼠骨髓抑制和再生过程中Sod/Gpx/Cat抗氧化酶基因的动态表达研究被引量：2: 2008年; 目的研究Sod/Gpx/Cat抗氧化酶系列基因在小鼠骨髓抑制和再生过程中的动态表达,了解氧化应激在骨髓再生过程中的作用。方法制备经5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射后的骨髓抑制和再生C57BL/6小鼠模型,分别在5-Fu注射前(第0天)和注射后第3、7、11、14天各断颈处死6只小鼠(分别记为0d组、3d组、7d组、11d组、14d组),收集小鼠骨髓单核细胞。Trizol试剂抽提小鼠骨髓单核细胞总RNA,采用Affymetrix小鼠全基因组cDNA 430A芯片检测小鼠骨髓细胞Sod/Gpx/Cat系列基因的表达,并对检测结果进行半定量RT-PCR鉴定。结果Sod1/Sod2/Gpx1/Gpx3b/Gpx4b/Cat在各组小鼠骨髓细胞中均有较高的表达,Sod3/Gpx2则在7d组开始表达,11d组和14d组表达量持续减少。其中Sod2/Gpx3b/Gpx4b/Cat从0d组到14d组均为表达量先增加后减少;Sod1/Gpx1则为表达量先减少后增加;在各组小鼠骨髓细胞中未检测到Gpx3a/Gpx4a/Gpx5/Gpx6的表达。结论Sod/Gpx/Cat抗氧化酶系列基因在小鼠骨髓抑制和再生过程中呈现特征性的动态变化,这种变化提示了骨髓细胞氧化应激反应过程的组织特异性和调控特定的细胞信号通路的过程。; 毛文伟路慧丽刘芳张晶王方圆杜丽娟张忠辉向砥赵梅吴明媛王群韩伟; 关键词：过氧化氢酶骨髓谷胱甘肽过氧化物酶

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国家高技术研究发展计划(2007AA02Z149)

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