四川省青年科技基金(05ZQ026-024)
- 作品数：7 被引量：20H指数：4
- 相关作者：郑玉才金素钰贺庆华洪键赵兴波更多>>
- 相关机构：西南民族大学中国农业大学盐城师范学院更多>>
- 发文基金：四川省青年科技基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牦牛乳酸脱氢酶B基因突变体的克隆鉴定研究被引量：5
- 2008年
- 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析证实牦牛(Bos grunniens)乳酸脱氢酶存在两种类型,根据LDH同工酶谱的特点推测牦牛LDH多态是由B基因变异所致,并由此将凝胶电泳中迁移率快的LDH同工酶谱带称为LDH-Bf类型,迁移率慢的称为LDH-Bs类型.为阐明牦牛LDH变异体的分子机制,实验从牦牛心脏组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法分别克隆了LDH-Bf和LDH-Bs两种类型的B基因cDNA全长序列;序列比对分析发现LDH-Bf和LDH-Bs基因存在4个碱基差异;依据cDNA序列推导的氨基酸序列的比对分析,发现两者之间存在两个氨基酸差异;利用Deepview分子建模软件进行的牦牛H亚基及LDH1突变体的高级结构预测,发现突变的两个氨基酸都能产生新的H键,影响整个蛋白分子的H键网络,并进一步导致蛋白分子空间结构的变化.
- 郑玉才赵兴波周静朴影金素钰贺庆华洪键李宁吴常信
- 关键词：乳酸脱氢酶基因克隆
- 黄牛睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因选择性剪接体的克隆与序列分析被引量：1
- 2009年
- 采用RT-PCR方法从黄牛睾丸组织中克隆睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因的cDNA序列,结果发现2种Ldhc剪接体,根据Ldhc基因在进化上的保守性,参照普通牛Ldhc基因结构分析了黄牛Ldhc基因的选择性剪接体的结构,结果显示,剪接体存在外显子缺失:其中剪接体1缺失第7个外显子,剪接体2缺失第4和第7两个外显子。因为LDH-C4酶的NAD+结合结构域由Ldhc的外显子2-4编码,酶的活性中心由外显子4编码。所以剪接体1包含完整酶的NAD+结合结构域和酶的活性中心,剪接体2失去了大部分NAD+结合结构域和酶的活性中心。对黄牛睾丸组织和精子LDH同工酶的电泳分析未检测到潜在的Ldhc剪接体的表达,推测睾丸组织Ldhc选择性剪接的功能是调控该基因在睾丸中表达的方式之一。
- 洪键郑玉才贺庆华
- 关键词：黄牛睾丸
- 牦牛睾丸特异乳酸脱氢酶-C基因的克隆及其选择性剪接的研究
- 乳酸脱氢酶-C(LDH-C)是睾丸组织和精子特异的乳酸脱氢酶同工酶,在精子发生和获能等过程中发挥重要作用。本研究采用 RT-PCR 方法从牦牛、狗和大鼠睾丸组织中克隆睾丸特异 LDH-C 基因的 cDNA 序列,结果显示...
- 郑玉才洪键贺庆华邝良德杜晞金素钰
- 关键词：牦牛睾丸
- 文献传递
- 藏绵羊肌红蛋白(Mb)基因克隆及肌肉Mb含量的测定被引量：1
- 2008年
- 为探索藏绵羊适应青藏高原缺氧环境的分子机制,克隆了藏绵羊的肌红蛋白(Mb)基因,纯化了心肌Mb,同时比较了心肌和骨骼肌的Mb含量。用RT-PCR克隆了心肌Mb的cDNA,长度为640 bp,编码153个氨基酸。试验采用盐析、CM-Sephadex离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了藏绵羊Mb,SDS-PAGE分析其分子量约为17kD。组织含量测定表明,藏绵羊心肌中Mb含量极显著高于骨骼肌。
- 郑玉才王永邓会平金素钰朴影苏永杰贺庆华
- 关键词：藏绵羊肌红蛋白纯化
- 牦牛乳酸脱氢酶-1两种遗传变异体的纯化及酶学特性比较被引量：6
- 2009年
- 【目的】从乳酸脱氢酶(LDH)水平上探索牦牛(Bos grunniens)低氧适应性分子机制。【方法】利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析牦牛组织中LDH同工酶谱;用比色法测定牦牛、黄牛和水牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力;采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析从牦牛心肌组织中纯化LDH1(由4个H亚基组成)的2种遗传变异体,进行酶学性质的比较。【结果】电泳方法检测发现牦牛LDH1存在2种遗传变异体,根据电泳迁移率分别命名为快型和慢型(LDH1-F和LDH1-S)。获得纯化的牦牛LDH1-F和LDH1-S,比活力分别为21.4U·mg-1蛋白和17.8U·mg-1蛋白,在SDS-PAGE和PAGE上均显示1条区带。2种变异体以NADH为底物的米氏常数(Km)值差异不大,均显著高于普通牛的LDH1;以丙酮酸钠为底物的Km值LDH1-F小于LDH1-S。试验进一步比较了携带不同LDH1变异体的牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力和各种同工酶谱,未见显著差异,而牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力显著或极显著低于黄牛和水牛。【结论】牦牛LDH12种遗传变异体的Km值存在差异,且Km(NADH)高于普通牛;牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力低于普通牛。
- 郑玉才赵兴波周静朴影金素钰贺庆华洪键李宁吴常信
- 关键词：牦牛乳酸脱氢酶
- 牦牛乳酸脱氢酶A的分离纯化、酶学性质及其基因的克隆被引量：5
- 2008年
- 【目的】分离纯化牦牛骨骼肌中的乳酸脱氢酶-A(LDH-A),并克隆其cDNA。通过比较牦牛与普通牛的LDH-A的酶学性质和cDNA序列,为研究牦牛适应高海拔、低氧环境,在分子水平上找到一些线索。【方法】采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析等方法,分别从牦牛和普通牛骨骼肌中纯化LDH-A,并对其酶学性质进行比较;通过RT-PCR方法克隆牦牛LDH-A的cDNA序列,并与GenBank登录的普通牛LDH-A的cDNA序列进行比对。【结果】纯化的牦牛LDH-A比活力为103.9U·mg-1蛋白,纯化倍数为18.2。SDS-PAGE和PAGE分析均显示一条带。酶动力学参数测定显示,牦牛LDH-A的KmNADH为0.097,Km丙酮酸钠为1.897,均不同程度高于普通牛,其中对丙酮酸钠的Km大约是普通牛的2倍。根据牦牛LDH-A的cDNA序列预测的氨基酸序列与普通牛LDH-A的氨基酸序列比较,只有2个氨基酸残基的改变(257Val-Ala和315Tyr-Cys)。【结论】牦牛LDH-A对丙酮酸的高Km可避免骨骼肌中产生过多的乳酸,是适应进化的结果;这种升高可能与其氨基酸序列变化导致的空间结构微小改变有关。
- 郑玉才司晓辉贺庆华金素钰洪键
- 关键词：牦牛乳酸脱氢酶纯化动力学性质基因克隆
- 麦洼牦牛血红蛋白α链基因的克隆测序
- 2007年
- 从麦洼牦牛脊髓中提取总RNA,利用RT-PCR扩增血红蛋白α链基因,获得了532bp的cDNA,连接到PMD-18载体上,然后转化TOP-10感受态细胞进行克隆测序。结果显示,牦牛血红蛋白α链基因与普通牛相比存在2个碱基差异,并导致血红蛋白α链71位的1个氨基酸改变。此外,还用电泳方法研究了血红蛋白在新生犊牦牛中的表达。
- 周静郑玉才金素钰陈炜文勇立苏永杰
- 关键词：牦牛血红蛋白基因克隆测序
