重庆市自然科学基金(CSTC2005BB5273)
- 作品数：5 被引量：11H指数：3
- 相关作者：叶剑陈春林尹小磊陈小璠更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siNgR重组质粒载体构建及效应检测被引量：3
- 2008年
- 目的构建具有特异阻断大鼠NgR基因功能的siRNA表达系统，为视神经损伤基因治疗提供新的方法。方法实验研究。根据Genbank提供的NgR基因mRNA序列，应用设计软件设计特异性的短链寡核苷酸，化学合成2对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列，退火、克隆到经BglⅡ、HindⅢ酶切处理的pSUPER—EGFP质粒，获得重组siNgR质粒，用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和序列测定对重组体进行鉴定，最后将构建的表达载体转染Wistar大鼠体内视网膜神经节细胞，免疫印迹法观察对NgR蛋白表达的影响。结果重组siNgR表达载体的酶切鉴定结果和测序结果表明重组载体构建成功。视网膜冰冻切片后，经荧光显微镜观察，视网膜神经节细胞层和视神经纤维可见绿色荧光蛋白表达。免疫印迹法分析表明，siNgR-1和siNgR-2可抑制RGCs NgR蛋白的表达，而siNgR-C和pSUPER—EGFP对照对NgR蛋白的表达无明显影响。结论成功构建了siRNA表达载体，此载体具有阻断NgR基因的表达的功能，为进一步研究视神经损伤基因治疗打下基础。
- 陈春林陈小皤尹小磊叶剑
- 关键词：髓磷脂蛋白质类重组蛋白质类视网膜神经节细胞神经再生质粒
- 阳离子聚合物介导的质粒EGFP基因逆行转染视网膜神经节细胞被引量：1
- 2007年
- 目的研究上丘和外侧膝状体注射阳离子聚合体/质粒复合物转染视网膜神经节细胞(RGCs)的有效性。方法将表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒和阳离子聚合物的混合溶液分别注射于Wistar大鼠双侧上丘和外侧膝状体,注射后10d灌注固定大鼠,取视网膜和视神经行冰冻切片,荧光显微镜下观察。结果荧光显微镜下见视网膜内层和视神经轴突纤维中有绿色荧光表达。结论上丘和外侧膝状体注射阳离子复合物包装的质粒可将外源性基因相对高效地转入RGCs。
- 陈春林叶剑尹小磊陈小璠
- 关键词：视网膜神经节细胞基因转染增强型绿色荧光蛋白阳离子聚合物
- 活化的巨噬细胞对钳夹伤大鼠视神经生长相关蛋白-43表达的影响被引量：5
- 2007年
- 目的观察钳夹伤大鼠眼内注射酵母多糖后对视神经生长相关蛋白(gowth-associated protein-43,GAP-43)表达的影响,并探讨巨噬细胞所起的作用。方法大鼠视神经钳夹伤后,于左眼玻璃体腔注射酵母多糖5μL,右眼注射磷酸盐缓冲液5μL,分别于7d、14d和21d提取视神经蛋白行免疫印迹分析。结果酵母多糖处理眼中,GAP-43蛋白的表达显著增加,7d即升高,14d时明显增强,直到21d时仍保持较高水平,各时间点相对磷酸盐缓冲液处理眼均有显著性差异(P<0.05)。结论酵母多糖玻璃体腔注射后,能诱导眼内巨噬细胞活化,活化的巨噬细胞能增强钳夹伤大鼠视神经GAP-43蛋白的表达,对视神经的再生修复可能有一定的促进作用。
- 陈春林叶剑尹小磊陈小璠
- 关键词：酵母多糖巨噬细胞视神经生长相关蛋白神经再生
- 玻璃体内注射酵母多糖对视神经夹伤大鼠RGCs的保护作用被引量：2
- 2008年
- 目的观察眼内注射酵母多糖对视神经夹伤大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用。方法SD大鼠45只,随机分为3组,以荧光金逆行标记RGCs 1周后,行左眼视神经钳夹伤,右眼为假手术对照。3d后分别于各对应组大鼠左眼玻璃体腔注射PBS或酵母多糖5μL,所有大鼠存活21d处死,每组各取5只大鼠行视网膜冰冻切片,余做视网膜铺片,计算RGCs标识率(左眼RGCs数/右眼RGCs数)×100%,并行统计学分析。结果酵母多糖组、PBS组和单纯钳夹组中RGCs标识率分别为:(19.22±2.51)%、(1.86±3.09)%和(1.78±2.61)%,酵母多糖组中存活RGCs较单纯钳夹组和PBS组差异有统计学意义(P=0.000),单纯钳夹组和PBS组差异无统计学意义(P=0.925)。结论酵母多糖玻璃体腔注射后,能诱导眼内炎症反应,从而对视神经夹伤大鼠RGCs的存活具有一定的保护作用。
- 陈春林叶剑尹小磊
- 关键词：酵母多糖巨噬细胞炎症视网膜神经节细胞
- RNA干扰技术及其在眼科疾病中的应用被引量：3
- 2008年
- RNA干扰技术为研究各种基因在眼科疾病中的作用提供了一种有效工具。我们对RNA干扰技术在探究眼科疾病的发病机制和治疗眼部疾病的潜在应用进展进行综述。
- 陈春林叶剑
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA眼科学
