湖南省自然科学基金(02JJY4011)
- 作品数：11 被引量：43H指数：4
- 相关作者：杨向东屈顺林郭芳刘俊文王仁更多>>
- 相关机构：南华大学北京医院中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金湖南省教育厅优秀青年基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位分析及抗体制备被引量：2
- 2005年
- 目的:分析一个新的人突触相关蛋白(FRG4)抗原表位并制备其多克隆抗体。方法:从人胎肝文库PCR扩增获得FRG4基因全长cDNA序列;通过生物信息学分析,预测FRG4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域,并进行了多序列比对;采用固相多肽合成法合成了FRG4抗原多肽,并免疫家兔;用免疫组化检测蛋白在人肝癌细胞HepG2细胞中的表达。结果:通过生物信息学分析选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY,制备兔抗人FRG4多克隆抗体。高效液相色谱检测显示抗体纯度达82.79%,抗体滴度为1∶16000,Westernblot证实该抗体具有较好的反应性和特异性,免疫组化证实其主要在HepG2细胞胞浆中表达。结论:成功制备了新的人突触相关蛋白(FRG4)多克隆抗体。
- 王仁杨向东屈顺林刘俊文闾宏伟姬志娟盛树力
- 关键词：巨噬细胞动脉粥样硬化多肽合成抗体
- 蛋白酶体抑制剂MG132诱导人巨噬细胞THP-1凋亡被引量：4
- 2004年
- 泛素-蛋白酶体途径是生物体内进行蛋白质选择性降解的重要途径之一,广泛参与细胞周期调控、DNA修复、细胞信号转导、细胞凋亡等多种生理过程。为了研究调控泛素-蛋白酶体途径表达对巨噬细胞THP-1凋亡和细胞内载脂蛋白B的蓄积的影响,本实验采用蛋白酶体抑制剂MG132(5μmol/L)处理THP-1细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内载脂蛋白B含量,用半定量逆转录-聚合酶链反应检测细胞内UPP途径相关基因的表达。结果发现:MG132可以诱导THP-1细胞凋亡;实验组细胞内载脂蛋白B蓄积增加;实验组细胞内泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素-蛋白连接酶mRNA表达均降低,而26S蛋白酶体mRNA无显著改变。结果提示,蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导THP-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径中泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素-蛋白连接酶活性,使细胞内栽脂蛋白B经泛素-蛋白酶体途径降解减少,在细胞内蓄积而使细胞凋亡率增加。
- 刘俊文杨向东王仁屈顺林杨永宗
- 关键词：病理学与病理生理学蛋白酶体抑制剂巨噬细胞凋亡
- 泛素-蛋白酶体通路在动脉粥样硬化中的作用被引量：2
- 2005年
- 泛素-蛋白酶体通路是体内的重要调节通路,降解短命或异常的蛋白质,与多种疾病的病理过程相关。近年来发现泛素-蛋白酶体通路参与了多种病因学说导致的动脉粥样硬化发病过程,干扰泛素-蛋白酶体通路可能成为防治动脉粥样硬化的重要靶标。
- 丁莉屈顺林杨向东
- MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对caspase-3表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV -304)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响。方法 采用两个浓度(2, 5μmol·L-1 )的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV -304细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;RT -PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase -3的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果 对照组ECV -304细胞凋亡率低于5%,在2μmol·L-1MG132作用下,凋亡率为11. 3%,MG132浓度升至5μmol·L-1,细胞凋亡率增致44 .5%,MG132诱导ECV 304细胞凋亡具有量-效关系;RT -PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase 3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase- 3蛋白表达水平升高。结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,促进caspase- 3基因转录,使细胞内caspase -3增加而促进细胞凋亡。
- 郭芳汤劲松孙文清王蕾杨向东
- 关键词：泛素-蛋白酶体途径蛋白酶体抑制剂CASPASE-3
- 氯沙坦调节高血压大鼠血管重塑及其对p38MAPK信号蛋白表达的影响被引量：4
- 2004年
- 目的研究血管紧张素Ⅱ受体-1阻断剂氯沙坦对肾性高血压大鼠血管重塑及其分裂原激活的蛋白激酶p38MAPK表达的影响。方法两肾一夹法复制肾血管性高血压大鼠(2K1C-RHR)模型;采用尾动脉套管法和颈动脉插管法测量大鼠血压,大血管(胸主动脉)苏木素-伊红(HE)染色进行形态学观察;治疗组采用氯沙坦灌胃治疗;反转录-聚合酶链反应和免疫印迹方法检测主动脉血管p38MAPK的表达。结果实验组大鼠和对照组(假手术组)普通饲料饲养6周,模型组血压为(158±7)mmHg,对照组血压为(104±11)mmHg;两组间差异有显著性(P<0.05);模型组大鼠胸主动脉内径增大,中层厚度增大,细胞层数略微增加。经氯沙坦治疗后,血压降为(132±9)mmHg,血管重塑现象氯沙坦治疗组较实验组明显改善;免疫印迹方法检测,重塑血管主动脉血管p38MAPK的表达增高,氯沙坦干预可以抑制其表达。结论氯沙坦可明显改善肾血管性高血压大鼠血管重塑,这种调节可能是通过阻断血管紧张素Ⅱ受体信号途径或调节p38MAPK表达而发挥作用。
- 郭芳杨向东万载阳刘俊文屈顺林秦旭平徐立朋廖端芳
- 关键词：氯沙坦高血压血管重塑蛋白表达
- 胆固醇损伤内皮细胞差异表达基因的生物信息学分析被引量：3
- 2005年
- 目的利用差异表达基因克隆方法(抑制消减杂交)获得大量的动脉粥样硬化相关候选基因和表达序列标签后,探讨如何进行后续基因表达及功能的研究。方法利用Internet网络上的数据库及生物学分析软件对胆固醇损伤内皮细胞后获得的差异表达基因进行核酸序列和蛋白质序列分析,探索差异表达基因克隆后的研究方法和思路。结果通过电子延伸得到一个684bp的全长cDNA序列;通过核酸序列分析,该序列定位在线粒体基因组的7587位～8270位,含有一个完整的开放阅读框,编码与氧化磷酸化相关的9个亚基。对其中一个亚基细胞色素氧化酶Ⅱ(COX2)分析得知,细胞色素氧化酶Ⅱ基因编码一段25.6kDa的弱酸性的信号锚蛋白,细胞色素氧化酶Ⅱ蛋白的三维结构是一个典型的椅式结构,它含有一段疏水区域,一个跨膜结构域和一个胞质结构域。运用蛋白的进化分析,得知细胞色素氧化酶Ⅱ蛋白胞质结构域的氨基酸序列在进化过程中高度保守。结论生物信息学技术是一种高效的获取疾病相关基因信息的方法,利用生物信息学方法对细胞色素氧化酶Ⅱ基因进行分析,获得了基因及其编码蛋白的相关信息,该蛋白参与电子传递,可能与细胞的氧化应激有关。
- 彭瑾瑜朱勋唐蔚青王抒黎健王仁郭芳刘俊文杨向东
- 关键词：病理学与病理生理学生物信息学分析动脉粥样硬化内皮细胞胆固醇
- 泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体的制备
- 2005年
- 目的探讨制备泡沫细胞相关基因4多克隆抗体的方法。方法将从人胎肝文库经聚合酶链反应扩增获得的泡沫细胞相关基因4基因全长cDNA序列,通过生物信息学分析,预测泡沫细胞相关基因4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域,并进行了多序列比对,并根据蛋白质的亲疏水性、二级结构、偶联难度及实验难度等,确定泡沫细胞相关基因4抗原13肽PKLVKEEVFWRNY,采用固相多肽合成法合成该抗原片段,偶联后经过基础免疫,6次加强免疫,经追踪检测,于第四次免疫后10～14天颈动脉放血,分离血清,冷冻抽干,-20℃保存而制备了泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体。结果用固相多肽合成法成功制备了泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体,该抗体经间接酶联免疫吸附测定法检测其效价为1∶16000,Westernblot检测可见40kDa处有目的带,用免疫组织化学方法从HepG2细胞中检测到泡沫细胞相关基因4蛋白表达,证实该抗体具有较好的反应性和特异性。结论固相多肽合成法省时、省力、制备的抗体效价高;泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体的制备,为进一步研究泡沫细胞相关基因4蛋白在动脉粥样硬化中的功能作用奠定了基础。
- 冯大明王仁孙文清郭芳屈顺林杨向东
- 关键词：病理学与病理生理学多肽合成多克隆抗体
- 复方丹参滴丸对冠心病患者纤溶系统t-PA、PAI-1含量与活性的调控被引量：6
- 2008年
- 目的观察复方丹参滴丸对冠心病患者内源性纤溶活性及血管内皮功能的影响,探讨其作用机制。方法冠心病患者78例,随机分为对照组和复方丹参滴丸组。对照组采用常规治疗;复方丹参滴丸组在常规治疗基础上加用复方丹参滴丸每次10粒,每日3次。两组用药时间均为4周。比较治疗前后血浆组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)活性及浓度。结果复方丹参滴丸治疗4周后,患者血浆PAI-1活性及浓度下降(P<0.05),t-PA活性及浓度含量升高(P<0.05),与治疗前比较差异有统计学意义;常规治疗组治疗前后t-PA和PAI-1活性差异无统计学意义。结论复方丹参滴丸可有效地调控改善冠心病患者内源性纤溶活性及血管内皮功能。
- 唐湘宇李柏完王岳林颜亚平朱雯霞杨许平胡双武杨向东
- 关键词：复方丹参滴丸组织型纤溶酶原激活物纤溶酶原灭活剂
- 外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中CD36表达的影响被引量：2
- 2003年
- 为研究抑癌基因Rb基因在U937细胞泡沫化过程中的表达 ,应用重组腺病毒载体导入外源性Rb基因 ,采用逆转录聚合酶链反应和流式细胞术检测氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中清道夫受体CD36和Rb基因的表达和外源性Rb基因导入U937细胞后CD36和Rb基因的表达。结果发现 ,氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中 ,RbmRNA和蛋白的表达随作用时间延长呈下调趋势 ,CD36mRNA和蛋白的表达则呈上调趋势 ;随着外源性Rb导入U937细胞并表达 ,CD36表达呈下调趋势。结果提示 ,外源性Rb基因的导入可以下调清道夫受体CD36的表达。
- 何淑雅闾宏伟杨向东陈淑华杨永宗李红霞满永黎健
- 关键词：病理生理学氧化型低密度脂蛋白流式细胞术清道夫受体U937细胞
- 番茄红素对高脂兔血管脂质过氧化损伤的影响及机制探讨被引量：17
- 2006年
- 目的:观察番茄红素对高脂喂饲所致家兔主动脉脂质过氧化损伤的影响。方法:采用高脂喂饲模型,将30只新西兰家兔随机分为3组:对照组、高脂模型组和番茄红素组,分别给予普通饲料和高脂饲料喂养,番茄红素组另加用番茄红素;于实验开始前1 d和开始后第24、、6、8周末取空腹血测定血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、血清超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、血清一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性。实验结束后,苏丹Ⅳ染色和HE染色观察主动脉血管病理变化。结果:与高脂模型组相比,番茄红素组血清甘油三酯含量减低;血清超氧化物歧化酶活性明显增加;血清丙二醛的含量减少;一氧化氮含量增加;主动脉脂质斑块面积减少。结论:番茄红素对兔主动脉脂质过氧化损伤具有较好的保护作用,能减轻高脂兔动脉粥样硬化病变形成。降甘油三酯,抗脂质过氧化损伤及保护血管内皮功能可能是番茄红素产生抗动脉粥样硬化作用的重要机制。
- 唐湘宇孙文清王蕾郭芳何慧丁莉屈顺林肖纯杨向东
- 关键词：番茄红素脂质过氧化丙二醛一氧化氮合酶一氧化氮
