西北工业大学基础研究基金(JC201161)
- 作品数：5 被引量：17H指数：4
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- 相关机构：西北工业大学西安文理学院更多>>
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- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 胱硫醚β-裂解酶的表达纯化及性质研究被引量：5
- 2011年
- 通过PCR从大肠杆菌(E.coliK12)基因组DNA中扩增出胱硫醚β-裂解酶(Cystathionineβ-lyase,CBL)基因,构建了能高效表达CBL的重组菌E.coliBL21(pETDuet-1-CBL)。重组菌在30℃、0.5 mmol.L-1IPTG存在条件下诱导9 h,可溶性CBL的表达量达18 mg.L-1,占到菌体可溶性总蛋白的23%。将重组菌超声破碎后上清液经His-Trap Fast Flow亲和层析一步纯化得到CBL,回收率为71%,纯度达到94%,纯化后的CBL单位酶活为134.6 U.mg-1。为防止CBL溶液冻融后发生聚沉,向纯化后的酶液中加入5%甘油,-20℃保存。重组酶的最适反应温度为35℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃。重组酶的最适反应pH值为8.0,4℃下在pH值8.0的缓冲溶液中保温10 h酶稳定性最高。重组酶的KmL-cystathionine值为3.78 mmol.L-1,VmaxL-cystathionine值为0.928 mmol.L-1.h-1。本研究建立了基于CBL催化反应产物丙酮酸与2,4-二硝基苯肼显色原理测定CBL酶活性的新方法。
- 曹珊珊牛卫宁羊梦林钦传光
- 关键词：大肠杆菌表达纯化酶活性测定同型半胱氨酸
- 壳聚糖固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶被引量：5
- 2013年
- 在大肠杆菌中重组表达了S-腺苷甲硫氨酸合成酶,然后以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,对酶进行固定化研究.结果表明,最佳固定化条件为：壳聚糖质量浓度为2.5g/dL、戊二醛体积分数为0.8％、固定化酶量为6 mg/mL、固定化时间为12 h,该条件下所得固定化酶活性回收率为76％,固定化酶热稳定性较好,在55℃下保温5h仍保留53％的活力,而游离酶在50℃下保温5h则完全失活.固定化酶在碱性溶液环境的稳定性较高,在pH 7.5～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留80％以上.将固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应5批次后,酶活性仍保留64％.在底物三磷酸腺苷（ATP）浓度为30 mmol/L的条件下,固定化酶催化底物ATP的转化率超过95％.
- 尹春丽陶贵荣许乐牛卫宁
- 关键词：S-腺苷甲硫氨酸合成酶壳聚糖固定化酶酶学性质
- 人胱硫醚β合酶I278T突变体的表达、纯化及鉴定
- 2014年
- 目的探讨在大肠埃希菌中重组表达和纯化人胱硫醚β合酶CBS（I278T）突变体。方法采用重叠延伸聚合酶链反应（PCR）定点突变技术构建突变质粒pGEX4T-1-CBS（I278T）,在含有3%乙醇的培养基中诱导表达,亲和层析纯化得到突变CBS（I278T）蛋白,测定纯化蛋白的活性、紫外可见吸收光谱、蛋白粒径及Zeta电位。结果成功构建了质粒pGEX4T-1-CBS（I278T）。CBS（I278T）蛋白产率、比活性及酶活性回收率分别为2.3mg/L、21.4U/mg、22.6%。终浓度为1mmol/L的S-腺苷甲硫氨酸（AdoMet）对突变CBS（I278T）蛋白没有激活作用。紫外可见吸收光谱分析显示纯化的突变CBS（I278T）存在429nm和550nm的血红素结合蛋白特征吸收峰。蛋白平均粒径为7.5～10.1nm,主要以四聚体形式存在,Zeta电位为-16.3mV。结论成功建立了在大肠埃希菌中表达、纯化及鉴定突变CBS（I278T）的方法。
- 牛卫宁许乐羊梦林曹珊珊
- 关键词：胱硫醚Β合酶突变粒径ZETA电位
- 海藻酸钠固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的制备及其性质研究被引量：5
- 2012年
- 研究了以海藻酸钠包埋法制备固定化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶的条件,并考察了固定化酶的酶学性质。结果表明,最适固定化条件为:海藻酸钠质量分数3%、CaCl2质量分数4%、SAM合成酶加量(以每克海藻酸钠计)75mg、固定化时间30min,在此条件下,固定化酶活力回收率达到42%。固定化酶热稳定性较好,在50℃下保温5h仍保留69%的酶活力,而游离酶则完全失活;固定化酶在碱性条件下的稳定性较好,在pH值7.5～9.0的缓冲溶液中4℃下保温10h仍保留84%以上的酶活力;将固定化酶用于SAM的合成,连续反应5批次后,仍保留82%的酶活力。
- 尹春丽曹珊珊牛卫宁
- 关键词：海藻酸钠固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶生物催化
- 海藻酸钠明胶协同固定S-腺苷甲硫氨酸合成酶被引量：5
- 2013年
- 以海藻酸钠和明胶为载体,对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行固定化。再用戊二醛对其进一步交联,增强固定化酶的稳定性。考察了海藻酸钠和明胶质量分数、CaCl2质量分数、酶和载体比例以及交联剂戊二醛体积分数等因素对固定化酶的影响。结果表明,最佳固定化条件为:海藻酸钠质量分数2.0%、明胶质量分数1.0%、CaCl2质量分数4.0%、固定化酶量为2.5 g/L凝胶、戊二醛体积分数0.6%。交联固定化酶热稳定性得到大幅度提高,在50℃下保温5 h仍保留72%的活力,而游离酶则完全失活。交联固定化酶在碱性溶液中的稳定性较高,在pH=8.0～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留87%以上。将交联固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应8批次后酶活性仍保留65%。
- 尹春丽许乐曹珊珊牛卫宁
- 关键词：海藻酸钠明胶固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶生物工程
