国家自然科学基金(30270672)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：杨宗城罗向东苏踊跃唐红英孙荣距更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小干扰RNA表达载体介导的EOLA1基因表达抑制研究被引量：1
- 2005年
- 目的 设计和构建EOLA1基因特异性的小干扰RNA质粒 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 将靶点特异性的寡核苷酸连接到经ApaⅠ EcoRⅠ酶切线性化的pBS/U6质粒 ,测序验证 ,阳性重组质粒转染ECV3 0 4细胞 ,半定量RT PCR方法检测靶基因的表达 ,阳性重组质粒与pEGFP EOLA1共转染 ,观察外源报告基因绿色荧光蛋白的表达。结果 构建的阳性重组质粒转染能够抑制靶基因EOLA1mRNA的表达 ,并能够显著抑制EOLA1 EGFP融合蛋白的表达。结论 成功构建了针对EOLA1基因的siRNA质粒 ,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。
- 苏踊跃梁光萍罗向东刘月明陈渝陈建杨宗城
- 关键词：RNA干扰ECV304EOLA1
- 构建创伤修复相关基因p21表达载体被引量：1
- 2005年
- 目的:构建创伤修复相关基因p21启动子驱动的荧光素酶报告基因表达载体,并评估其稳定性和可靠性。方法:实验于2004-06/08在第三军医大学西南医院烧伤研究所内皮细胞室完成。野生型p21基因启动子全序列经酶切亚克隆入pGL3-basic荧光素酶报告基因载体,重组载体pGL3-p21p转染ECV304细胞,并应用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性,排除转染过程误差。结果:①目的片段克隆载体与p21基因启动子cDNA序列高度同源。②转染重组载体pGL3-p21p和E47+IPTG诱导细胞荧光素酶活性明显增强,而空载体pGL3-basic的荧光素酶表达处于基础水平,两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:构建的野生型p21基因启动子驱动的荧光素酶报告基因载体,转染ECV304细胞后能够表达荧光素酶蛋白,具有稳定和可靠性能。
- 孙荣距杨宗城苏踊跃蔡震唐红英罗向东
- 关键词：基因转染
