重庆市自然科学基金(CSTC2010BB5098)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆市第三人民医院重庆市第五人民医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- rAQP4-M1真核表达载体的构建及在CHO细胞中的表达
- 2010年
- 目的构建rAQP4-M1基因真核表达载体,建立稳定转染AQP4-M1的CHO细胞系。方法应用RT-PCR从大鼠脑组织中扩增rAQP4-M1,并将PCR产物双酶切后插入到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,经过菌落PCR、双酶切及测序验证的pcDNA3.1(+)/rAQP4-M1质粒通过脂质体转染CHO细胞。G418筛选建立稳定转染rAQP4-M1的CHO细胞系。采用细胞免疫荧光和免疫印迹技术检测rAQP4-M1在该细胞系中的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/rAQP4-M1表达质粒,建立了稳定转染的CHO细胞系。免疫荧光检测结果显示,rAQP4-M1在CHO细胞膜上稳定表达;免疫印迹检测可见34×103处的阳性条带,表明rAQP4-M1在该细胞系中成功表达。蓝绿温和胶电泳技术证实了rAQP4-M23而不是rAQP4-M1参与了正交排列颗粒(orthogonalarraysofparticles,OAPs)的形成。结论 rAQP4-M1在CHO细胞系中稳定表达成功,rAQP4-M1未参与OAPs的形成。
- 冉建华唐玲汪克建李小松孙善全
- 关键词：稳定转染真核表达载体
- 急性高眼压大鼠视网膜胶质细胞水通道蛋白-4的内化被引量：1
- 2013年
- 目的：观察急性高眼压时大鼠视网膜胶质细胞水通道蛋白-4（AQP4）内化的时空变化及其规律,并探讨其与视网膜水肿的关系.方法：建模并分组；应用免疫荧光双标鉴定视网膜AQP4阳性细胞；观察AQP4与早期内涵体抗原1（EEA1）及晚期内涵体标记物甘露糖-6-磷酸受体（MPR）的共表达规律.结果：在正常视网膜内,表达AQP4的星形胶质细胞胞体位于节细胞层,Müller细胞的胞体位于内核层.正常及假手术组未见AQP4与EEA-1、MPR的共表达；高眼压作用不同时间,AQP4与EEA1共表达细胞的分布部位及其占AQP4阳性细胞比例都有改变,在高眼压作用60 min,AQP4与EEA1共表达细胞的比例达到最高值,AQP4与MPR共表达细胞分布的部位也有变化.结论：高眼压可诱导视网膜胶质细胞AQP4的内化,即AQP4经过内吞进入早期内涵体,再转运至晚期内涵体.AQP4的内化可能对肿胀的胶质细胞起保护作用.
- 甘胜伟孙善全冉建华陈海樊萍朱淑娟黄娟陈臻
- 关键词：水通道蛋白-4胶质细胞急性高眼压内化
