国家自然科学基金(39370701)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
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- 用ELISA鉴定原核细胞中IL-2-PE40的表达产物
- 1998年
- 外源基因在原核细胞中表达产物的鉴定,是衡量重组DNA技术构建表达是否成功的重要标志之一。目前最常用的是Western blot门技术,此法可以分离出蛋白质特异性条带,但需经电泳转移和固相免疫检测等步骤,比较繁琐,耗费大。我们在进行IL-2-PE40融合蛋白表达效率的研究时,摸索了用ELISA来鉴定原核表达产物(包涵体或可溶性蛋白)的技术条件,取得较好效果,现介绍如下;
- 毕美霞韩玲杨渝珍
- 关键词：原核细胞ELISA
- IL-2重组毒素的克隆、表达及对IL-2R^+淋巴细胞的特异性细胞毒效应被引量：5
- 2000年
- 目的 :为了探讨肿瘤细胞的靶向性杀伤途径。方法 :采用PCR Cloning技术和DNA重组技术 ,构建了 2类IL 2 PE40’嵌合基因的表达载体 ,分别由IPTG和温度 (42℃ )诱导表达 ,并对表达产物进行了酶切片段大小、电泳迁移率、分子量、IL 2和PE40’组分抗原性及细胞学效应的检测。结果 :发现重组毒素对表面表达IL 2受体的活化T淋巴细胞具有明显杀伤效应 ,并有抑制混合淋巴细胞反应的作用。结论 :该IL 2 PE40’融合蛋白确实具有明显的特异性免疫抑制效应。
- 毕美霞杨渝珍舒平韩玲
- 关键词：重组毒素绿脓杆菌外毒素免疫抑制IL-2
- 一种快速筛选和鉴定重组体的方法——改良菌落PCR被引量：8
- 1998年
- 在对DNA片段进行亚克隆的实验中,阳性重组子的筛选是鉴定外源DNA是否插入载体的重要步骤。常用的方法有两种:一是在含抗生素的平皿上挑取转化生长的单菌落,经液体培养基扩大培养后,提取质粒,再经酶切或PCR扩增鉴定;另外,还可以用菌落原位杂交的方法进行初筛。这两种方法虽然可靠,但是步骤复杂繁琐,而且后一种方法还存在污染问题。我们在构建重组毒素表达载体时,摸索出了一种改良的菌落PCR扩增筛选法,既准确又简易,现介绍如下。
- 毕美霞韩玲杨渝珍
- 关键词：PCR扩增分子克隆重组子
