高层次人才科研启动基金(2004-10)
- 作品数：4 被引量：46H指数：4
- 相关作者：陶建平彭金彪许金俊彭浩张艳更多>>
- 相关机构：扬州大学张家港出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：高层次人才科研启动基金江苏省高校自然科学研究项目江苏检验检疫局科研项目更多>>
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- 柔嫩艾美球虫扬州株SO7抗原基因表达条件的研究被引量：6
- 2007年
- 通过RT—PCR扩增柔嫩艾美球虫YZ株折光体SO7抗原基因，并进行克隆和测序。将不舍信号肽编码区片段的S07基因克隆入表达载体pGEX6p-1谷胱甘肽-S-转移酶基因的下游，构建表达质粒pGEX6p-1-SO7，转化宿主菌BL21，获得重组菌。通过建立生长曲线，对诱导条件的摸索，根据SDS—PAGE确定融合蛋白的最佳表达条件。通过融合蛋白切胶免疫小鼠制备超免疫血清，经间接EL-ISA检测其与E。tenella子孢子抗原反应的特异性。结果显示，诱导时机和诱导时间是影响表达的主要因素，诱导温度、1PTG浓度次之；诱导时机以3h为最佳，诱导时间以4．5h为最佳；诱导温度以37℃最佳，0．008～1．000mmol／L的IPTG对表达量的影响不大。在优化的表达条件下，表达产物主要以包涵体存在，表达量占菌体总蛋白的37．5％。间接ELISA结果表明融合蛋白具有一定的免疫原性，保留了天然蛋白的部分抗原性。
- 许金俊彭金彪陶建平王留
- 关键词：柔嫩艾美球虫大肠杆菌
- 柔嫩艾美耳球虫扬州分离株对8种抗球虫药的抗药性被引量：23
- 2008年
- 将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)扬州分离株感染14日龄苏禽黄羽肉鸡,设立8个用药组、1个感染不用药对照组和1个不感染不用药对照组,以相对卵囊产量、病变记分减少率、最适抗球虫百分数和抗球虫指数为指标对该虫株对盐霉素、马杜拉霉素、球痢灵、氯羟吡啶、氨丙啉、尼卡巴嗪、甲基三嗪酮、地克珠利等8种常用抗球虫药的抗药性进行了综合评定,分析了该地区球虫的抗药性及对策。结果表明,该虫株对甲基三嗪酮敏感,对氨丙啉具有中度抗药性,对盐霉素、马杜拉霉素、球痢灵、氯羟吡啶、尼卡巴嗪、地克珠利等其他6种药物具有完全抗药性。提示目前在扬州地区甲基三嗪酮抗球虫疗效最好,氨丙琳效果稍差,应合理使用,盐霉素等其他6种药物应慎用、减少或暂停使用。
- 许金俊陶建平彭金彪彭浩孙文瑶姜慧婕张艳
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫抗球虫药抗药性
- 不同佐剂和免疫途径对柔嫩艾美耳球虫SO7抗原免疫保护效果的影响被引量：11
- 2007年
- 利用PGEX-6P-1融合表达系统将SO7基因在大肠杆菌中进行融合表达,对表达产物进行初步纯化和复性,制备免疫原。分别使用不同剂量的人参总皂甙和重组γ-干扰素以及弗氏完全佐剂作为免疫佐剂,于5日龄、12日龄和19日龄对雏鸡进行3次免疫,同时设立蛋白口服免疫组、蛋白皮下注射免疫组、卵囊口服免疫组、未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,于26日龄用105个柔嫩艾美耳球虫卵囊进行攻毒,8d后扑杀,对各组的存活率、相对增重率、病变减少率、相对卵囊产量和抗球虫指数ACI等指标进行统计分析,比较免疫保护效果。与非免疫攻毒组以及不加佐剂的免疫攻毒组相比,佐剂使用后各组的增重、病变记分、相对卵囊产量、ACI等指标均有一定的改善,对柔嫩艾美耳球虫的人工感染可以提供部分保护。3种佐剂中,γ-干扰素和人参总皂甙能增强重组蛋白的免疫保护效果,且佐剂的剂量对免疫保护的效果有一定的影响,以5000Uγ-干扰素效果最佳,效果与E.tenella活卵囊免疫相当,弗氏完全佐剂的免疫增强效果不明显。单独使用重组蛋白皮下注射或口服免疫,虽有一定的保护作用,但不明显。一定剂量的γ-干扰素对SO7抗原的免疫保护效果起明显的增强作用,是一个具有很好临床应用前景的新型佐剂。
- 许金俊陶建平彭金彪孙文瑶姜慧婕彭浩张艳
- 关键词：佐剂免疫途径
- 伏马菌素B1免疫学检测方法的研究被引量：7
- 2007年
- 目的制备抗伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)单克隆抗体,在此基础上建立一种可用于定量检测玉米中FB1含量的间接竞争ELISA方法。方法人工合成免疫原BSA-FB1和包被抗原OVA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的单抗,并对其特性进行鉴定。以OVA-FB1作为包被抗原,FB1为竞争抗原,两者与一定量的抗FB1单抗竞争反应,建立检测FB1的间接竞争ELISA方法,对玉米样品进行初步检测应用。结果获得了1株稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞(命名为5H12-C6-C2)。对间接竞争ELISA方法进行反应条件优化后,建立了检测FB1的标准曲线,回归方程为y=1.113-0.313x,相关系数R2为-0.990,最适可测范围为10ng/ml^1000ng/ml,灵敏度为90.88ng/nl,最低检测限为7.83ng/ml,方法的批内和批间平均变异系数分别为3.24%和2.45%,样品添加平均回收率为94.32%。结论成功地制备了抗FB1特异性单抗,建立了FB1的间接竞争ELISA检测方法,为进一步研制FB1检测试剂盒奠定了基础。
- 许金俊陈飞秦爱建陶建平彭金彪邵红霞金文杰戴先礼
- 关键词：伏马菌素B1单克隆抗体间接竞争ELISA
