国家自然科学基金(30270684)
- 作品数：21 被引量：75H指数：5
- 相关作者：唐圣松张晓红罗红梅龙治峰刘月顺更多>>
- 相关机构：南华大学湖南师范大学中国人民解放军总后勤部卫生部更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- M-CSF核内稳定表达细胞系的构建和鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立M-CSF核内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的核内作用奠定基础。方法:采用PCR扩增人M-CSF活性片段,将M-CSF片段插入真核表达载体pCMV/myc/nuc,强制性把M-CSF引入细胞核内,通过PCR、测序鉴定筛选阳性重组体pCMV/M-CSF,脂质体介导转染HeLa细胞,经G418筛选后,用RT-PCR、间接免疫荧光鉴定其在HeLa细胞中的表达及定位分布。结果:琼脂糖电泳结果显示插入片段为1400bp左右,与预期M-CSF分子大小相当;DNA测序分析表明插入质粒的M-CSF无读码框移位,并与来源序列一致。RT-PCR和间接免疫荧光检测表明,转染pCMV/M-CSF的HeLa细胞能稳定表达M-CSFmRNA与M-CSF蛋白,且表达的M-CSF定位于HeLa细胞的细胞核。结论:成功构建了真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立了M-CSF核内稳定表达细胞系。
- 涂剑滕淑静张晓红赵雪琴唐圣松
- 关键词：巨噬细胞集落刺激因子HELA细胞
- Caveolin-1基因转染对人胃腺癌细胞生长的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨外源性Caveolin-1基因在人胃腺癌细胞中的表达作用。方法将pcl-neo-caveolin-1人全长质粒转染入MGC803细胞中,用G418筛选得到细胞克隆并扩大培养,获得稳定表达caveolin-1的细胞系,通过Western-blot、细胞计数及流式细胞术等方法检测基因表达、细胞增殖分化等情况。结果与对照组和pcl-neo空质粒转染组相比,转染caveolin-1基因后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显增高,而P-ERK1/2的表达却明显下降;细胞的群体倍增时间明显延长:由46.67或47.32小时延长至65.46小时,差异有显著性(P<0.01);细胞周期分布发生明显变化:G0/G1期细胞比例由35.02%增加到51.98%,S期比例由56.97%下降至39.80%,G2、M期无明显变化。结论Caveolin-1通过抑制MGC803细胞的增殖而导致其发生G0/G1期阻滞,可为肿瘤基因治疗提供实验依据。
- 罗红梅唐圣松廖端芳严鹏科张晓红汪煜华朱炳阳龙治峰刘月顺
- 关键词：CAVEOLIN-1胃腺癌基因转染基因治疗
- M-CSF上调cyclinD1/D3和CDK2/6的表达促进HeLa细胞增殖被引量：1
- 2009年
- 非分泌型巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的表达在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,为探讨胞质M-CSF对细胞增殖的影响,采用基因重组技术构建胞内稳定表达M-CSF的HeLa细胞系,以空载体(pCMV/myc/cyto)转染HeLa细胞和未转染HeLa细胞作为对照,MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响,并计算细胞倍增时间,RT-PCR观察胞内M-CSF对G1期细胞周期相关蛋白的影响.结果显示,与对照组比较,转染M-CSF的HeLa细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的HeLa细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强,转染M-CSF的HeLa细胞的cyclinD1/D3和CDK2/6 mRNA表达显著升高(P<0.05).提示:M-CSF可上调cyclinD1/D3和CDK2/6的mRNA表达,促进HeLa细胞的增殖.
- 涂剑吴海燕张蒙夏张晓红罗红梅龙治峰汪煜华雷小勇唐圣松
- 关键词：巨噬细胞集落刺激因子HELA细胞细胞增殖细胞周期相关蛋白
- 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)融合EGFP真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2005年
- 目的构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并鉴定其在小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞能否正确表达。方法PCR扩增M-CSF基因,定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体,构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,脂质体介导将pEGFP-M-CSF转染入NIH3T3细胞,以一步法RT-PCR检测其在NIH3T3细胞中的表达情况。结果双酶切及测序鉴定证明成功构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并在NIH3T3细胞中成功地表达了融合荧光蛋白,RT-PCR检测结果显示RT-PCR扩增产物与M-CSF目的基因片段大小相符,确实源于重组质粒转录后的mR-NA。结论真核表达重组体pEGFP-M-CSF的成功构建及在体外真核细胞中有效表达,为进一步研究M-CSF在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础。
- 张晓红唐圣松李剑敏龙治锋
- 关键词：基因表达
- CD81与免疫信号复合物
- 2007年
- CD81是人B细胞上抗增值抗体识别的靶点,是四跨膜蛋白超家族的成员之一,CD81在体内外免疫细胞上广泛表达并参与多种生理反应。CD81存在于除红细胞和血小板之外的几乎所有组织,CD81在不同的细胞的细胞膜上和不同的蛋白相关联,在B细胞上和CD19、CD21、MHCⅡ类分子相关,在T细胞上和CD4、CD8分子相关。本文主要就CD81在免疫信号复合物中的功能作一综述。
- 田志臻唐圣松
- 关键词：CD81B细胞
- 肝癌细胞增殖受M-CSF胞内和胞外自分泌的双重调控被引量：1
- 2005年
- 目的:研究胞内M-CSF及其受体在肝癌SMMC 7721细胞的表达与性质,探讨胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。方法:以高表达M-CSF的人肝癌细胞系(SMMC 7721细胞)为模型,以免疫组化、流式细胞计数、反义技术与蛋白印迹等方法观测胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。结果:M-CSF 及其受体主要在SMMC 7721细胞的胞质、胞核中表达,胞内的M-CSF 的相对分子量为20 000,M-CSFR的相对分子量为120 000;免疫共沉淀分析证明M-CSF在细胞内与M-CSFR以复合物的形式存在;M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸能抑制SMMC 7721细胞的增殖、下调CYCLIND1/E的表达和上调P16的表达,且M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸的联合使用能进一步加强对SMMC 7721细胞抑制作用和增加下调CYCLIND1／E和上调P16的表达幅度。结论:SMMC 7721细胞受M-CSF胞外自分泌和胞内自分泌的双重调控。
- 张蒙夏罗红梅唐圣松雷小勇龙治锋张晓红汪煜华
- 关键词：SMMC肝肿瘤
- 人类心发育候选基因ZNF569融合EGFP真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的：构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569，并鉴定其在哺乳动物COS-7细胞系能否正确表达。方法：把ZNF569基因ORF定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体，构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569，脂质体介导将pEGFP-ZNF569转染入哺乳动物COS-7细胞，以一步法RT-PCR检测其在哺乳动物COS-7细胞中的表达情况。结果：双酶切及测序鉴定表明成功构建真核表达重组体pEGFP—ZNF569，并在COS-7细胞中成功地表达了融合荧光蛋白。RT-PCR检测显示RT—PCR扩增产物与ZNF569目的基因片段大小相符，确实源于重组质粒转录后的mRNA。结论：真核表达重组体pEGFP-ZNF569的成功构建及在体外真核细胞中有效表达，为进一步研究ZNF569在心发育过程中的信号调控奠定了一定的实验基础。
- 黄欣琼唐显庆石金凤吴秀山龙治锋
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白真核表达载体基因表达
- Caveolin-1表达及其与胃癌生物学行为关系的研究被引量：18
- 2004年
- 目的 :探讨候选抑癌基因Caveolin 1在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法 :应用免疫组织化学SABC法对 43例胃癌存档蜡块组织及 15例胃炎活检标本进行Caveolin 1蛋白检测 ,采用 χ2 检验进行统计学分析。结果 :Caveolin 1在胃癌的阳性表达率为 3 0 2 % ( 13 / 43 ) ,明显低于胃炎组 10 0 % ( 15 / 15 ) ,P <0 0 1;其中高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌中的阳性率分别为 6/ 6、3 / 5、17 4% ( 4 / 2 3 ) ,而印戒细胞癌及黏液腺癌中无阳性表达 ,五者之间差异有统计学意义 ,P <0 0 1;浸润至浆膜或超过浆膜组的Caveolin 1表达阳性率13 8% ( 4 / 2 9)明显低于未达浆膜组 64 3 %( 9/ 14 ) ,两组之间差异有统计学意义 ,P <0 0 1;淋巴结转移组Caveolin 1阳性率 7 7%( 1/ 13 )明显低于无淋巴结转移组 40 0 %( 12 / 3 0 ) ,两组之间差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :候选抑癌基因Caveolin 1的表达与胃癌细胞的分化、浸润和转移密切相关 。
- 罗红梅张蒙夏唐圣松谭军刘月顺龙治峰
- 关键词：免疫组织化学预后
- 核内M-CSF对NIH3T3细胞内微丝的影响
- 2007年
- 目的建立M-CSF核内稳定表达的NIH3T3细胞系,探讨核内M-CSF对细胞骨架的影响。方法经脂质体介导核内定位表达重组体pCMV/M-CSF转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用Rt-PCR、免疫细胞化学鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用考马斯亮蓝染色细胞微丝测定M-CSF进入细胞核后对细胞骨架的影响。结果RT-PCR结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSFmRNA;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。考马斯亮蓝染色结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。结论核内M-CSF可引起NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。
- 张晓红唐圣松赵飞骏刘月顺龙治锋
- 关键词：NIH3T3细胞微丝
- 过表达外源M-CSF促进MCF7细胞增殖被引量：2
- 2009年
- 为探讨过表达外源巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对细胞增殖的影响,将重组载体pCMV/cyto/myc-M-CSF转染MCF7细胞、G418筛选,RT-PCR、Western印迹和免疫荧光鉴定M-CSF的mRNA表达、蛋白表达及定位,通过计算细胞倍增时间、MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响.结果表明,转染M-CSF的MCF7细胞过表达M-CSF mRNA及蛋白,并且定位表达于细胞质;与转染空载体及未转染M-CSF组细胞比较,转染M-CSF的MCF7细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的MCF7细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强;以上结果提示,胞质过表达M-CSF可促进MCF7细胞的增殖.
- 涂剑姚志红龙治峰朱炳阳唐圣松
- 关键词：巨噬细胞集落刺激因子胞质细胞增殖
