家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金(SKLVEB2009KFKT012)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：罗鹏吴润管宏伟刁小龙何轶群更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金国家自然科学基金甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 禽白血病病毒多重PCR检测法的建立及初步应用被引量：3
- 2012年
- 根据GenBank中登录的禽白血病病毒A、B、J亚群的核苷酸序列设计合成了3对引物,各对引物可分别扩增出大小约为195、260、924bp的核苷酸片段;经优化建立禽白血病病毒多重PCR检测法,并进行其敏感性试验及对马立克病病毒(MDV)、火鸡疱疹病毒(HVT)、新城疫病毒(NDV)、传染性囊病病毒(IBDV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和DF-1细胞基因组的特异性试验;应用该方法对1 294份临床样品进行禽白血病病毒检测,对阳性检出样品抽样进行测序鉴定.结果表明:该方法的最小检出拷贝数为103,特异性试验均为阴性,检出临床样品中的核苷酸片段与参考毒株核苷酸序列的同源性达98%以上,符合率100%,具有良好的特异性、敏感性和符合率,可为禽白血病病毒感染的临床诊断及流行病学调查研究提供有效借鉴.
- 管宏伟吴润赵春林刁小龙罗鹏何轶群
- 关键词：禽白血病病毒多重PCR检测核苷酸
- 兰州市及周边地区禽白血病病毒的分子流行病学调查被引量：6
- 2012年
- 为了解兰州市及周边地区禽白血病的流行情况及流行毒株的分子特征,从该地区11个鸡场和2个屠宰场采集抗凝鸡血1 294份,应用自建的禽白血病病毒(ALV)A、B、J亚群多重PCR诊断方法检测了A、B、J亚群的感染率与分布,进行了各亚群流行毒株gp85基因的序列分析。从1 294份样品中,共检出外源性ALV 486份,平均检出率为37.56%。其中检出ALV-A亚群16份,感染率为1.24%;ALV-J亚群383份,感染率为29.60%;ALV-A/J亚群68份,感染率为5.26%;ALV-B/J亚群19份,感染率为1.47%。序列分析表明,J亚群流行株gp85基因的核苷酸序列的同源性介于98%～100%,与J亚群英国毒株HPRS-103、美国毒株ADOL-7501、国内分离株SD9902、本实验室保存毒株(JX1、JX2、AH2和GZ1)间的同源性分别为97%～98%、86%～88%、96%～97%、98%～100%。在J亚群流行株中,发现gp85基因有13个核苷酸突变型,在共104个碱基置换中71个为异义突变、33个为同义突变,可区分为8个氨基酸突变型,突变位点主要集中在第200～400bp、第500～600bp范围的核苷酸之内和第120～240aa内。gp85基因进化关系分析表明,本地区J亚群流行株的8个氨基酸突变型均与英国毒株HPRS-103及国内分离株JX1、JX2、AH1和GZ1处于同一进化树分支。调查结果表明,兰州市及周边地区外源性禽白血病病毒感染现象较为严重且以J亚群为主,部分鸡场也可同时检出A、B亚群。
- 管宏伟吴润刁小龙罗鹏张莉何轶群艾文娜
- 关键词：禽白血病病毒多重PCR分子流行病学
- 鸡朊蛋白的原核表达及其抗血清的制备
- 2012年
- 运用分子生物学方法分别构建了pGEX-4T-ChPrP1、pGEX-4T-ChPrP2、pGEX-4T-ChPrP3重组表达载体,经转化大肠杆菌BL21(DE3)和IPTG诱导表达,并对融合蛋白诱导表达时间、IPTG浓度进行优化,诱导表达的GST-ChPrP(25～247)融合蛋白经GST-trap FF柱亲和层析纯化,用纯化后的GST-ChPrP(25～247)融合蛋白免疫新西兰雄兔,以探究鸡朊蛋白的结构与功能。结果表明,本试验成功构建了pGEX-4T-ChPrP1、pGEX-4T-ChPrP2、pGEX-4T-ChPrP3重组表达菌,SDS-PAGE分析结果显示,得到大小为50、42和32ku左右的融合蛋白GST-ChPrP(25～247)、GST-ChPrP(96～247)、GST-ChPrP(174～247),与预期结果基本相符,在最适条件下每升pGEX-4T-ChPrP1菌液通过GST-trap FF层析柱获得的GST-ChPrP(25～247)融合蛋白达10mg,制备的抗血清经琼脂糖凝胶扩散试验检测到较高的多克隆抗体效价(1∶32);Western-blot分析结果显示,融合蛋白GST-ChPrP(25～247)、GST-ChPrP(96～247)和GST-ChPrP(174～247)及鸡脑组织蛋白均可与该抗血清发生特异性免疫反应。证实,鸡重组朊蛋白具有良好的抗原性,与鸡脑组织朊蛋白具有相同的抗原成分。
- 罗鹏吴润刁小龙管宏伟张莉
- 关键词：朊蛋白原核表达抗血清抗原性
