国家自然科学基金(30210103151)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 相关作者：朱宏亮李胜利闫利英张少强王晓侠更多>>
- 相关机构：西安交通大学西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 年龄相关听力损失小鼠耳蜗毛细胞的凋亡抑制剂治疗研究
- 2011年
- 目的:观察年龄相关听力损失耳蜗毛细胞的死亡方式,探讨防治老年性耳聋的分子机制。方法:将NMF308nmf/nmf小鼠做为年龄相关听力损失动物模型,每组随机选择7只28d,30d和60d的NMF308nmf/nmf小鼠,用ABR和DPOAE测定听觉功能,用免疫荧光染色组织化学技术TUNEL,Caspase-3和PI(碘化丙啶)染色标记耳蜗毛细胞。结果:NMF308nmf/nmf小鼠从1月龄开始发生听力减退和毛细胞功能改变,到2月龄时出现明显的TUNEL阳性标记,是毛细胞凋亡的最早表现;Caspase-3激活表达的毛细胞凋亡现象稍晚出现;PI标记可见毛细胞细胞核固缩和碎片出现的时间从2月龄开始;到3月龄时该种小鼠听力基本丧失,耳蜗毛细胞严重缺失。结论:在老年性耳聋早期,首先出现DNA单链断裂,随后有Caspase-3信号途径的激活,导致耳蜗毛细胞凋亡是老年性耳聋的主要分子机制。
- 张正民李胜利
- 关键词：年龄因素毛细胞耳蜗小鼠
- Toll样受体2和4在小鼠肺炎链球菌中耳急性感染中的作用被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨Toll样受体2（Toll-like receptor 2,TLR2）和Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）在小鼠肺炎链球菌中耳感染中的作用.方法 野生型（wild type,WT）C57BL/6J小鼠、TLR2缺陷（TLR2-/-）和TLR4缺陷（TLR4-/-）小鼠分别通过中耳鼓膜接种肺炎链球菌悬液[1×106菌落形成单位（colony forming unit,CFU）].在细菌接种前、接种后第3天和第7天分别进行听性脑干反应（ABR）和鼓室声导抗测试,血液及中耳积液中细菌滴度测定,颞骨病理切片形态学观察,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同基因型小鼠炎性细胞因子IκB激酶β（IκB kinase β,IKKβ）、核因子κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、巨噬细胞炎性蛋白1α（MIP-1α）、黏蛋白/黏液素5AC和5B（MUC5AC和MUC5B）mRNA的表达.结果 中耳接种肺炎链球菌3d后,TLR2-/-小鼠死亡率为58.8％（40/68）,TLR4-/-小鼠死亡率为35.6％（21/59）,而WT小鼠的死亡率仅为17.3％（9/52）.接种7d后,TUR2-/-小鼠死亡率为82.4％（54/68）,TLR4-/-小鼠死亡率为54.2％（32/59）,而WT小鼠的死亡率仅为23％（12/52）,三组之间差异具有统计学意义（P＜0.01）.ABR测试结果显示,接种后存活3d及7d的TLR2-/-和TLR4-/-小鼠ABR阈值高于WT小鼠,三组之间的差异具有统计学意义（P＜0.01）.颞骨病理发现,TLR2-/-和TLR4-/-小鼠接种肺炎链球菌后第3天中耳出现积液和组织破坏,接种后第7天感染极为严重.TLR2-/-鼠出现严重的耳蜗炎性细胞浸润,内外毛细胞破坏、盖膜肿大和血管纹退变,以及螺旋神经节细胞的损伤；TLR4-/-鼠可见耳蜗内外毛细胞和螺旋神经节细胞的损伤；而WT鼠的耳蜗未见炎性细胞浸润和组织破坏,内外毛细胞基本正常.在接种细菌3d和7d的TLR2-/-鼠中耳黏膜未发现肥大细胞,但在TLR4-/-和WT鼠中耳黏膜发现较多的肥大细胞并有脱颗粒现象.接种肺炎链球菌后3d和7
- 李胜利张敏燕李白芽郑庆印朱宏亮
- 关键词：TOLL样受体2TOLL样受体4细胞因子类小鼠
- 蹄蝠听性脑干诱发电位特点分析被引量：5
- 2009年
- 目的对野生蹄蝠进行短纯音(Tone Burst)和短声(Click)诱导听性脑干反应(ABR)分析,对其ABR特点与已有的研究进行比较,分析其中差异,加深我们对回声定位蝙蝠听觉功能的认识。方法捕捉并饲养野生蹄蝠,运用美国TDT公司(Tucker-Davis Technologies)TDT System Ⅲ诱发电位仪对蝙蝠进行短声和短纯音的听阈测定,分析其波形变化规律,确定其短纯音听阈阈值,分析听力图的特点。结果(1)蹄蝠听阈呈"W"形分布,经统计学分析各听阈区段有统计学意义(P<0.05)。存在2个听敏区:28kHz处为最敏感的第一听敏区,阈值最低可达15dB SPL,平均29.1dB SPL;40kHz附近出现第二个听敏区,阈值最低25dB SPL,平均35.9dB SPL;在12kHz～64kHz听阈不超过55.9dB SPL。(2)短声引出的蹄蝠ABR可见4个相对稳定的波峰:波Ⅰ的潜伏期为1.26ms;波Ⅱ较高且尖,潜伏期为1.94ms;波Ⅲ相对稳定,潜伏期为2.47ms;波Ⅴ潜伏期为3.40ms。随着短声强度的上升,在20～80dB SPL声强范围,各个波振幅逐渐增大、潜伏期缓慢缩短。(3)短纯音引出的蹄蝠ABR各波随刺激频率的提高而潜伏期缓慢地缩短,在64kHz以上潜伏期又逐渐延长;在28kHz、80dB SPL条件下,各波潜伏期分别为Ⅰ波1.74ms,Ⅱ波2.72ms,Ⅲ波3.60ms,Ⅳ波4.58ms,Ⅴ波5.76ms。频率28kHz、声强在45～100dB SPL范围内上升时,主波振幅逐渐增大;但在部分蝙蝠出现主波振幅在达到最大后,随着声强的上升,振幅逐渐减小。(4)在高声强诱发下,短纯音和短声诱发的ABR均可见Ⅰ波分化为2个波峰,Ⅰa和Ⅰb波。(5)越接近敏感频率,ABR波形就越典型,振幅越大。结论(1)蹄蝠听阈呈"W"形分布,类似我们已知的其他回声定位蝙蝠,存在2个听敏区:28kHz处达到最敏感的第一听敏区,40kHz附近出现第二个听敏区,在12kHz～64kHz听阈不超过55.9dB SPL。(2)从蹄蝠主波与声强、频率的关系可以看出,蝙蝠主波振幅与声强存在一定的正相关,随着接近其敏感听觉�
- 赵谦李胜利闫利英张少强刘思伟
- 关键词：回声定位
- 年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的凋亡机制被引量：3
- 2010年
- 目的观察年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的死亡方式,探讨老年性聋的分子机制。方法随机选用5～7只28、30和60天龄的NMF308nmf/nmf小鼠,应用ABR和DPOAE检测听功能,用免疫荧光染色组织化学技术TUNEL、Caspase-3和碘化丙啶(PI)染色标记并观察耳蜗毛细胞。结果NMF308nmf/nmf小鼠从1月龄开始发生听功能减退和毛细胞改变,到2月龄时出现明显的TUNEL阳性标记,是毛细胞凋亡的最早表现;Caspase-3阳性表达的毛细胞凋亡现象稍晚出现;PI标记可见2～3月龄开始出现毛细胞细胞核固缩和碎片;到3月龄时听功能基本丧失,耳蜗毛细胞严重缺失。结论老年性聋的早期首先出现耳蜗毛细胞出现DNA单链断裂,随后Caspase-3信号途径激活,导致耳蜗毛细胞凋亡。
- 张少强李胜利闫利英李随勤李白芽朱宏亮郑庆印
- 关键词：老年性聋外毛细胞凋亡耳蜗
- Bmi-1基因过度表达与喉癌的分化、转移及预后的关系被引量：4
- 2011年
- 目的探讨喉癌组织中Bmi-1基因mRNA的表达与喉癌的分化、转移及临床预后的关系。方法收集我们医院2008年5月~2008年11月共52例行喉癌手术切除的标本,提取肿瘤组织及癌旁组织配对标本的总RNA,采用RT-PCR方法测定Bmi-1基因mRNA的表达,Western blot法分析Bmi-1蛋白的表达水平,并结合临床资料对Bmi-1基因差异表达与喉癌患者的临床表现进行相关性分析。结果 52例配对标本分别进行Bmi-1mRNA荧光检测比较,39例标本的肿瘤组织中Bmi-1基因mRNA的表达明显高于癌旁正常喉组织;32例标本的肿瘤组织中Bmi-1蛋白表达明显高于癌旁正常喉组织;Bmi-1mRNA的表达与喉癌淋巴结转移和浸润深度密切相关（P〈0.05）,而与患者的性别、年龄、吸烟及肿瘤分化程度等无关（P〉0.05）。结论 Bmi-1基因在喉癌组织中的表达状态与喉癌的生长和浸润转移关系密切;Bmi-1基因mRNA可望作为喉癌病情发展及指导临床治疗的标记物之一;Bmi-1mRNA的测定有助于判断肿瘤预后。
- 姚小宝王晓侠张少强闫利英朱宏亮
- 关键词：喉癌BMI-1肿瘤转移预后
- COX-2反义核酸对喉癌恶性生物学行为的抑制作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨环氧合酶-2(COX-2)反义核酸对喉癌细胞恶性表型的抑制作用。方法采用脂质体介导方法,分别构建转染COX-2反义真核表达载体和空载体的喉癌细胞系Hep-2-AS和Hep-2-P细胞。RT-PCR及Western blot分析转染细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平;MTT比色实验、Boyden侵袭小室法和裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞的体外增殖速度、体外侵袭力和体内成瘤性。结果RT-PCR结果显示,Hep-2-AS细胞COX-2/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA比值(0.65)明显低于Hep-2(0.92)和Hep-2-P细胞(0.90);Western blot结果提示Hep-2-AS细胞COX-2/-βactin比值(0.29)明显低于Hep-2细胞(0.46)和Hep-2-P细胞(0.44);MTT比色实验显示Hep-2-AS细胞较Hep-2-P、Hep-2细胞生长速度减慢,三者倍增时间分别为3.6 d、2.9 d和2.9 d;体外侵袭实验结果表明,Hep-2-AS侵袭细胞数(18.20±5.97)显著低于Hep-2细胞(45.40±8.12)及Hep-2-P细胞(44.10±6.47)(P<0.01)。裸鼠成瘤实验中,Hep-2-P、Hep-2细胞接种裸鼠后第5天肿瘤长出,而Hep-2-AS细胞第7天肿瘤长出;28 d后Hep-2-AS细胞接种组瘤体体积[(764.85±129.61)mm3]低于Hep-2细胞[(1 181.73±360.83)mm3]和Hep-2-P细胞接种组[(1 065.21±237.46)mm3],有显著性差异(P<0.01)。结论喉癌细胞中COX-2过表达与细胞的恶性表型相关,反义核酸技术抑制COX-2表达可以逆转喉癌细胞的恶性表型。
- 姚小宝王晓侠张少强闫利英朱宏亮
- 关键词：喉癌核酸环氧合酶-2
- NMF308^(nmf/nmf)小鼠耳蜗毛细胞凋亡方式及z-VAD-FMK对毛细胞的保护作用
- 2015年
- 目的了解年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的凋亡方式,探讨半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂z-VAD-FMK[z-Val-Ala-Asp(Ome)-fluoromethylketone]防治老年性聋的效果。方法选用新生NMF308nmf/nmf小鼠14只和成年同窝NMF308nmf/nmf小鼠32只,分为新生小鼠腹腔注射组(14只)、成年小鼠腹腔注射组(14只)和成年小鼠圆窗膜注射组(18只),各组又分为治疗组(注射z-VAD-FMK)和对照组[注射二甲基亚枫(dimethylsulfoxide,DMSO)],采用圆窗膜局部和腹腔注射两种方法给药,给药前后行ABR检测,用免疫荧光染色化学技术TUNEL、caspase-3和PI(碘化丙啶)染色标记耳蜗毛细胞,观察各组耳蜗毛细胞的凋亡和存活状况。结果NMF308nmf/nmf小鼠从1月龄开始发生听力减退和毛细胞功能改变,到2月龄时,caspase-3激活表达的毛细胞凋亡现象是毛细胞凋亡出现的最早表现;TUNEL阳性标记特征稍晚出现;PI标记可见毛细胞细胞核固缩和碎片出现的时间从2月龄开始;到3月龄时该种小鼠听力基本丧失,耳蜗毛细胞严重缺失;而应用z-VAD-FMK治疗后,各治疗组小鼠ABR反应阈明显好于对照组;耳蜗毛细胞凋亡数目较对照组减少,存活数明显较对照组多,尤以圆窗膜注射组明显。结论 NMF308nmf/nmf小鼠耳蜗毛细胞的死亡方式以caspase-3凋亡途径为主,应用caspase-3抑制剂zVAD-FMK定向内耳给药,可以阻断caspase-3信号途径激活所导致的毛细胞凋亡,从而有效防治老年性聋。
- 李胜利王玉虎张敏燕李白芽郑庆印朱雯瑾朱宏亮
- 关键词：老年性聋外毛细胞凋亡
