国家自然科学基金(31170574)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：陆海张蕾刘蕾李丽红曹山更多>>
- 相关机构：北京林业大学中国农业科学院农产品加工研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及表达分析被引量：5
- 2014年
- 利用同源克隆技术得到1个毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因,命名为PcAPX。该基因编码249个氨基酸残基,预测分子量为33.01kD。采用原核表达技术在大肠杆菌中表达并纯化该蛋白并进行酶活性分析,结果表明:重组PcAPX蛋白对抗坏血酸(AsA)和过氧化氢(H2O2)有很高的活性,其对抗坏血酸的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为(0.71±0.03)mmol·L-1和(0.41±0.02)mmol·L-1·min-1·mg-1;对过氧化氢的Km和Vmax分别为(0.60±0.21)mmol·L-1和(0.35±0.12)mmol·L-1·min-1·mg-1,表明PcAPX对AsA和H2O2拥有较高的催化底物的能力和催化效率。利用实时定量RT-PCR分析毛白杨PcAPX基因的表达模式,结果表明其在老叶中表达量高于新叶、韧皮部、形成层和根部。该研究结果将进一步促进毛白杨APX基因家族成员参与植物生长调控的研究。
- 张蕾王昱堃刘蕾尹玢曹山陆海
- 关键词：毛白杨克隆原核表达酶学分析
- 毛白杨抗坏血酸过氧化物酶基因PtAPX2的克隆表达及分析被引量：3
- 2013年
- 以毛白杨总RNA为模板反转录得到cDNA,克隆获得抗坏血酸过氧化物酶基因家族中的一个成员PtAPX2 864bp的编码序列。该基因编码的蛋白包含287个氨基酸,理论分子质量为31.78ku,C末端包含锚定于过氧化物酶体跨膜结构域,推断其为过氧化物酶体定位蛋白。构建了PtAPX2原核表达载体,在大肠杆菌中表达获得了纯化的重组蛋白,并对其进行了酶学性质分析。PtAPX2对抗坏血酸的Km值为(1.37±0.22)mmol/L,Vmax值为(3.95±0.46)mmol/(L·min·mg);对H2O2的Km值为(0.026±0.003)mmol/L,Vmax值为(1.27±0.03)mmol/(L·min·mg);该酶在28℃,pH7.0～7.4时活性最高。实时荧光定量PCR分析表明,PtAPX2在杨树老叶叶肉中表达量最高。对PtAPX2亚细胞定位、底物结合特征、酶学性质及组织特异性表达的分析加深了对木本植物抗氧化机理的认识。
- 潘翔李娜李印军魏弘宜张蕾陆海
- 关键词：毛白杨抗坏血酸过氧化物酶克隆酶学性质
- 单、重瓣玉簪花器官分化和花形态学比较研究被引量：4
- 2014年
- 以单瓣和重瓣玉簪为试验材料,采用石蜡切片法和显微技术研究了其花器官分化和花形态发育过程的差异,为进一步研究单、重瓣玉簪形成的分子机制奠定形态学基础。结果表明:(1)单瓣花和重瓣花的花芽分化过程均可分形态分化前期、被片原基分化期、雄蕊原基分化期、雌蕊原基分化期4个时期,各轮花器官按照向心顺序发育。(2)单瓣花包含6枚呈两轮排列的花被片、6枚雄蕊和1枚雌蕊,而重瓣花包含6枚呈两轮排列的花被片,6枚由雄蕊同源转化成的被片,中央心皮愈合不完整。
- 张丹丹王莹荀志丽李丽红陆海刘頔
- 关键词：玉簪花器官花芽分化
- 毛白杨酵母单杂交体系的建立被引量：2
- 2015年
- 【目的】通过建立酵母单杂交文库筛选出与毛白杨特异性调控元件结合的候选蛋白,为研究毛白杨木材合成相关基因奠定基础。【方法】采用模板基因PCR方法,分别将ABRE-box、AC-box及-317-Box三次重复序列连接至p Ab Ai诱饵质粒上,再将诱饵载体转入酵母中;使用磁珠法获得m RNA,采用SMART技术合成c DNA,以c DNA为模板进行LD-PCR并将产物纯化后与p GADT7-Rec载体共转化诱饵酵母,同时进行文库的构建与筛选。【结果】以p BI121质粒为模板扩增获得的ABRE/AC/-317-GUS片段约为650 bp。以KpnⅠ对重组质粒p Ab Ai-ABRE/AC/-317-GUS进行单酶切,获得约5000 bp的大片段与650 bp的小片段;测序结果表明,插入序列与ABRE/AC/-317序列一致且方向正确。在SD/Ura培养基中,当Ab A为100 ng/m L时,酵母菌落数为0,建库时Ab A为100 ng/m L。c DNA与p GADT7载体共转化的酵母Y1HGold(p AC-Ab Ai)细胞稀释100倍后,在SD/-Leu培养基上长出89个克隆,含AC-box的诱饵酵母所建库容量为1.3×106,且无r RNA污染。酵母转化产物在SD/-Leu/Ab A(100 ng/m L)培养基上长出18个克隆,大于250 bp的有13个克隆;测序和同源分析结果表明,成功筛选到5个候选蛋白,主要是蛋白激酶、核小体蛋白及功能未知蛋白,这些蛋白可作为与AC元件结合的候选蛋白。【结论】建立的毛白杨酵母单杂体系可用于进一步筛选与木材合成相关的基因。
- 刘蕾胡旭东张强蒋璐瑶李丽红要笑云陆海
- 关键词：毛白杨文库构建
- 毛白杨4CL-like基因的克隆与原核表达分析被引量：1
- 2013年
- 为得到毛白杨4CL-like基因并对其原核表达特性进行分析,利用毛白杨叶片的总RNA反转录得到的总cDNA为模板,利用PCR技术克隆得到毛白杨4CL-like基因(登录号:XP_002315339.1)。利用MEGA软件对4CL-like基因及其他9个来自不同物种的4CL基因进行进化树分析。最后通过构建pET30-4CL-like原核表达载体对该基因进行原核表达分析。结果显示,克隆得到的4CL-like基因CDS区全长为1 758 bp,编码585个氨基酸。系统进化分析表明,该基因与葡萄中的4CL-like5有很高的同源性。另外,SDS-PAGE分析表明,4CL-like基因在大肠杆菌BL21中成功表达,所表达融合蛋白的分子量约为60 ku。
- 曹山饶国栋魏弘宜蒋湘宁陆海
- 关键词：毛白杨克隆原核表达
