博士科研启动基金(L2009B13)
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 相关作者：鞠建松徐书景张彩凤赵宝华何广正更多>>
- 相关机构：河北师范大学大连工业大学邢台医学高等专科学校更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 嗜酸热脂环酸杆菌中甘露聚糖酶活性位点的确立被引量：4
- 2011年
- 【目的】通过定点突变确定嗜酸热脂环酸杆菌中甘露聚糖酶的活性催化位点。【方法】根据序列比对和GH53家族的结构信息选择可能的催化活性位点,利用重叠PCR法构建定点突变体,采用薄层层析(TLC)法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法检测各酶蛋白活性。【结果】通过重叠PCR法成功构建了7个位点的突变体,其中第150和159位的氨基酸突变对活性改变甚少或几乎没有,而第151和231位谷氨酸的羧基基团的改变以及双位点突变体E2Q则导致其对各种底物催化活性的丧失,说明位于β4和β7折叠的C末端的E151和E231的羧基基团作为功能基团参与了催化反应。【结论】E151和E231分别是新型甘露聚糖酶AaManA的酸碱催化位点和亲核催化位点。
- 徐书景张彩凤薛张伟何广正鞠建松赵宝华
- 关键词：甘露聚糖酶定点突变活性位点
- 热激后冰浴时间与复苏时间对化学转化法转化效率的影响被引量：2
- 2011年
- [目的]研究化学转化过程中热激后冰浴时间和复苏时间对转化效率的影响,确定简便快速的转化方法。[方法]采用2种缓冲溶液制备感受态,以热激后冰浴时间或复苏时间为变量,研究这2个因素与转化效率的关系。[结果]冰浴2 min,复苏30或40 min达到最佳转化效率;冰浴和复苏时间为0 min时仍能获得相当数量的转化子。[结论]热激后冰浴和复苏时间对转化效率有一定影响,但不是决定性因素。因此,在一般性转化试验中可以省略这2个步骤以节省时间。
- 郭姣洁薛永常徐书景马书娜鞠建松
- 关键词：感受态细胞
- D-氨基酸氧化酶研究进展被引量：5
- 2010年
- D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase:oxidoreductase,DAAO,EC1.4.3.3)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型黄素蛋白酶类,可氧化D-氨基酸的氨基生成相应的酮酸和氨。在体内D-氨基酸的代谢中起着重要作用。主要介绍了D-氨基酸氧化酶的生理功能和应用、表达条件优化及通过定点突变对酶学性质的研究。
- 郭姣洁薛永常徐书景张彩凤何广正鞠建松
- 关键词：D-氨基酸氧化酶生理功能定点突变
- 假坚强芽胞杆菌中乙醇降解相关酶的克隆、表达及酶学特性被引量：4
- 2013年
- 【目的】研究假坚强芽胞杆菌OF4中乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶学特性。【方法】通过引物设计,采用PCR技术从嗜碱芽胞杆菌OF4的基因组DNA中扩增获得乙醇脱氢酶(adh)基因和乙醛脱氢酶(aldh)基因,构建表达载体,通过异源原核表达,Ni-NTA柱层析纯化酶蛋白,分析其酶学特性。【结果】乙醛脱氢酶的最适反应温度为35℃,最适反应pH值为8.0,酶蛋白的活力为979.6 U/mg,其稳定性在25℃和35℃下比45℃稍好;尽管由于乙醇脱氢酶的表达量低而未能纯化获得酶蛋白,但通过双基因共表达及乙醇耐受性实验发现乙醇脱氢酶也具备较高的催化活性。【结论】成功地从假坚强芽胞杆菌OF4中克隆获得了乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶基因,二者共同作用能够较大提高宿主对乙醇的耐受性。
- 鞠建松马宁赵冉冉刘景伟徐书景赵宝华
- 关键词：乙醛脱氢酶乙醇脱氢酶乙醇耐受性共表达
- 丙氨酸消旋酶的研究进展被引量：3
- 2011年
- 简要介绍了丙氨酸消旋酶的分类、结构特征和催化机制。
- 张彩凤徐书景李艳红薛张伟马宁赵宝华鞠建松
- D-氨基酸检测方法研究进展被引量：1
- 2013年
- 自然界中存在20种基本氨基酸,除甘氨酸外都有两种互成镜像的对映体D-型和L-型。长期以来,人们认为D-氨基酸仅存在于微生物中,参与构成细胞壁肽聚糖层。但随着分析方法的发展,人们相继在多种生物体中(包括人体)发现了多种D-氨基酸,D-氨基酸才引起人们的高度重视,并意识到它们在医药、农药和食品等的组成中起着重要作用。D-氨基酸检测方法还需要不断发展与完善,以便更好地分析和认识D-氨基酸的重要作用。主要介绍酶法、气相层析法、高效液相法及生物传感器等检测方法。
- 李辉欣鞠建松张琳琳徐书景
- 关键词：高效液相生物传感器
- 丙氨酸脱氢酶研究概况被引量：1
- 2011年
- 丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase,ALD,EC 1.4.1.1)是一种以烟酰胺腺嘌呤(NAD)为辅酶的氨基酸脱氢酶。丙氨酸脱氢酶可逆催化丙氨酸氧化脱氨生成丙酮酸、氨及NADH。丙氨酸脱氢酶也是调节氨基酸代谢和糖代谢的重要酶类,其催化反应的产物丙酮酸广泛应用于医药、农药和食品等领域,具有良好的发展前景。主要介绍丙氨酸脱氢酶的纯化及活力检测、酶空间结构(底物结合位点),以及催化反应机理等方面的研究。
- 何广正徐书景马宁刘东鞠建松
- 关键词：丙氨酸脱氢酶丙酮酸脱氢酶
