广东省自然科学基金(5001785)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- siRNA电转化幽门螺杆菌抑制空泡毒素基因mRNA表达
- 2007年
- 目的:利用RNA干扰(RNAi)技术原理,优化小分子干扰RNA(siRNA)电转化幽门螺杆菌(Hp)的条件,并观察电转化后空泡毒素基因(VacA)的mRNA表达是否受到抑制。方法:合成5对特异siRNA为实验组:S1、S2、S3、S4、S5,1对非特异siRNA为对照组:S6。设定不同的电场强度及脉冲时间,探索电转化Hp的最佳条件,并观察转化效率和电转化后Hp存活率。在最佳电转化条件下将上述6对siRNA转化Hp,在不同时点通过RT-PCR方法检测VacA mRNA的抑制率。结果:电场强度和脉冲时间是影响电转化效率的2个关键因素,在25kV/cm电场强度下脉冲6ms时,电转化效率最高达91%,S2、S4组在转化后VacA mRNA抑制率分别为65%和77%。结论:适当的场强和脉冲时间的组合可使转化效率达到最大值。靶向siRNA可以抑制HpVacA的mRNA表达。
- 赵刚严燕国马晋平彭俊生董文广蔡世荣何裕隆詹文华
- 关键词：电转化螺杆菌VACA
- CagA对幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平的影响被引量：5
- 2006年
- 目的:利用小分子干扰RNA(siRNA)探讨CagA在幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8中的作用。方法:设计5条siRNA,采用电穿孔法转入CagA+幽门螺杆菌NCTC11637,与胃黏膜上皮细胞共培养后测定IL-8水平,并以RT-PCR、Western blotting法检测穿孔前、后不同时点细菌的CagA表达。采用CagA-株NCTC11639作对照。结果:CagA+NCTC11637诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平明显高于CagA-NCTC11639[(1200·00±32·51)ng/Lvs(100·00±8·58)ng/L](P<0·01)。siRNAⅢ转化的幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平显著低于转化前[(400·00±17·35)ng/Lvs(1200·00±32·51)ng/L](P<0·05);siRNAⅢ转化的幽门螺杆菌CagA mRNA水平显著低于转化前,穿孔后6h mRNA水平最低为31·3%(0·270/0·861),抑制率为68·7%。Western blotting显示siRNAⅢ组CagA蛋白水平低于穿孔前(P<0·01);其余4条siRNA未见显著变化。结论:CagA在幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8中起重要作用,小分子干扰RNA可能通过抑制CagA基因表达而减少幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞IL-8的分泌。
- 严燕国詹文华赵刚马晋平蔡世荣
- 关键词：胃粘膜白细胞介素8
