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葡萄糖氧化酶的有机相共价固定化被引量：6: 2012年; 将葡萄糖氧化酶(GOD)在最适pH条件下冻干后,以戊二醛活化的壳聚糖为载体,分别在传统水相和1,4-二氧六环、乙醚、乙醇三种不同的有机相中进行共价固定化。通过比较水相固定化酶和有机相固定化酶的酶比活力、酶学性质及酶动力学参数,考察酶在有机相中的刚性特质对酶在共价固定化过程中保持酶活力的影响。结果表明,戊二醛浓度为0.1%、加酶量为80 mg/1 g载体、含水1.6%的1,4-二氧六环有机相固定化GOD与水相共价固定化GOD相比,酶比活力提高2.9倍,有效酶活回收率提高3倍;在连续使用7次后,1,4-二氧六环有机相固定化GOD的酶活力仍为相应水相固定化酶的3倍。在酶动力学参数方面,不论是表观米氏常数,最大反应速度还是转换数,1,4-二氧六环有机相固定化的GOD(Kmapp=5.63 mmol/L,Vmax=1.70μmol/(min.mgGOD),Kcat=0.304 s-1)都优于水相共价固定化GOD(Kmapp=7.33 mmol/L,Vmax=1.02μmol/(min.mg GOD),Kcat=0.221 s-1)。因此,相比于传统水相,GOD在合适的有机相中进行共价固定化可以获得具有更高酶活力和更优催化性质的固定化酶。该发现可能为酶蛋白在共价固定化时因构象改变而丢失生物活性的问题提供解决途径。; 周涛朱雄军苏建华姚冬生刘大岭; 关键词：葡萄糖氧化酶有机介质

利用电化学方法对ADTZ催化底物及催化性质的研究: 黄曲霉毒素B(AFB)是一种具有强致癌性、致畸性和遗传毒性的物质,本研究所已经分离出一种产黄曲霉素解毒酶(ADTZ)的真菌E20,并对其进行基因克隆和重组表达,得到了重组黄曲霉毒素解毒酶(rADTZ)。前期的研究工作推断...; 谭翠萍李世川刘大岭谢春芳姚冬生; 文献传递

基于固定化酶-MWNT修饰铂电极检测黄曲霉毒素传感器的制作及其条件优化: 黄曲霉毒素(AFB)是一种强致癌致畸的真菌毒素。目前国内外已有多种AFB的检测方法的报道。其中基于黄曲霉毒素解毒酶(ADTZ)对黄曲霉毒素B和黄曲霉毒素B结构类似物杂色曲霉素(ST)的酶生物传感器检测,是本研究所新近报告...; 李世川谭翠萍刘大岭谢春芳姚冬生; 文献传递

有机相中的共价固定化方法对酶蛋白构象影响的研究: ＜正＞酶作为一种高效的生物催化剂,在工业应用及商业生产上受到限制的最主要原因就是酶的不稳定性问题。共价固定化方法在提高酶稳定性的研究中占据着重要地位,由于该法主要利用的是酶和载体之间的共价作用,所得到的固定化酶与载体连接...; 王旭曼朱雄军姚冬生谢春芳刘大岭; 关键词：有机相; 文献传递

用有机相提高共价固定化胰蛋白酶活力被引量：1: 2012年; 蛋白质共价固定时,容易发生由于共价化学反应而引起蛋白质构象的不可逆变化而造成蛋白活性丧失的现象,该问题在诸如药物修饰、蛋白质芯片、酶生物电极等制备中十分重要.本研究以壳聚糖为载体,以胰蛋白酶为研究对象,比较了水相与多种有机相条件下的共价固定化酶的动力学特性.结果发现,固定化酶特征常数Km值:所有的有机相条件下共价固定的胰蛋白酶均优于传统的水相中共价固定的该酶,且更接近于游离酶的Km值(水相中固定的胰蛋白酶其Km是1,4-二氧六环中固定的胰蛋白酶的3.69倍),提示有机相中固定的胰蛋白酶比水相中固定的该酶更接近于酶的天然构象;与水相中共价固定的胰蛋白酶相比,所有有机相中共价固定的胰蛋白酶均获得了更高的转换数Kcat(乙酸乙酯中固定的胰蛋白酶其转换数Kcat是水相中固定的该酶的58.64倍),即有机相中共价固定的胰蛋白酶均显示出比传统的水相中共价固定的该酶更高的催化效率.本研究表明,利用酶蛋白在有机相中变得刚硬的特性,在有机相中对某些酶进行共价固定化修饰有利于维持酶蛋白天然构象,一定程度上能够克服传统水相中进行共价固定化过程中造成的酶变性失活现象.; 王旭曼苏建华朱雄军谢春芳刘大岭; 关键词：有机相

黄曲霉毒素氧化酶/壳聚糖-单壁碳纳米管/聚邻苯二胺修饰电极对杂色曲霉素的检测被引量：4: 2009年; 将黄曲霉毒素氧化酶(AFO)固定在壳聚糖(CS)-单壁碳纳米管(SWCNTs)杂交膜中,组装在聚邻苯二胺(POPD)修饰的金电极(Au)表面,制备了对杂色曲霉素(ST)敏感的生物传感器(AFO/CS-SWCNTs/POPD/Au)。运用原子力显微镜(AFM)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)和交流阻抗技术(EIS)对电极组装过程进行了表征。循环伏安法研究表明,AFO在修饰电极上发生了准可逆的氧化还原反应,是表面控制过程,其式量电位为-0.436V(vs.Ag/AgCl),说明包埋在CS-SWCNTs中的AFO和电极之间发生了直接电子传递。AFO修饰电极对ST具有明显的电催化作用,其表观米氏常数appKM为7.13μmol/L,催化电流与ST浓度在10～310ng/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.997,检出限为3ng/mL(S/N=3),响应时间小于10s。组装的生物传感器具有较好的稳定性与重现性,连续检测20ng/mL的ST标准溶液11次,电流值RSD为3.9%;放置一个月后,其电流响应值仍为初始值的85.6%。该方法具有较高的选择性和灵敏度,应用于实际样品检测时,其回收率在87.6%～105.5%之间。建立的ST含量的电化学测定方法简便快捷,测定结果令人满意。; 陈俊华李世川姚冬生刘大岭; 关键词：杂色曲霉素单壁碳纳米管聚邻苯二胺生物传感器

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广东省科技攻关计划(2005B20401004)