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牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体的制备: 2015年; 目的制备牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)单克隆抗体(m Ab),并对其特异性进行初步鉴定。方法构建含PEPCK基因的重组质粒,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达,对表达产物PEPCK重组蛋白进行纯化,以PEPCK重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞,用间接ELISA筛选阳性克隆,获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的细胞株,并用Western blot法,免疫组织化学染色和免疫沉淀鉴定其特异性。结果成功获得稳定分泌抗牛PEPCK m Ab的杂交瘤细胞株。Western blot法、免疫组织化学和免疫沉淀结果表明,该抗体能与牛PEPCK蛋白特异性结合。结论成功获得抗牛PEPCK m Ab。; 盛美蕾张晓张纬张燕飞王盈戴一凡; 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体杂交瘤

PEPCK-C^(mus)转基因小鼠的表型鉴定被引量：1: 2012年; 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)是催化糖异生的限速酶,其在骨骼肌中表达量很低,作用尚不明确。本研究构建了在骨骼肌中特异表达PEPCK-C的转基因小鼠(PEPCK-Cmus小鼠),探讨PEPCK-C在小鼠骨骼肌中特异性表达后对运动和能量代谢的影响。结果显示,与同龄的野生型小鼠比较,PEPCK-Cmus转基因小鼠运动能力更强,胰岛素敏感性更高,血脂水平较低;骨骼肌中有明显脂肪堆积,但空腹血糖、体重、腹部脂肪体积没有差异。结果表明,PEPCK-C基因在小鼠骨骼肌中的特异性表达,提高了小鼠的运动耐力和糖平衡能力,并使血脂维持在较低水平,提示PEPCK-C基因在骨骼肌中的表达对机体的能量代谢有重要作用。; 冯玮任媛媛刘乃丰任子健于明程俊霖王盈朱洁金丹杨海元郜倩倩李倩坤戴一凡; 关键词：胰岛素敏感性糖代谢

二十二碳六烯酸促进无葡萄糖条件下乳腺癌细胞MDA-MB-231死亡被引量：1: 2014年; 为了探究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)抗乳腺癌的机制,采用流式细胞术分析细胞死亡率,H2DCFDA探针流式细胞术测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blotting方法检测细胞内剪切型Caspase-3的变化。结果发现在无葡萄糖条件下,DHA以浓度依赖性方式促进乳腺癌细胞MDA-MB-231死亡。在这个过程中,DHA促使细胞内ROS水平明显升高,然而,当DHA和抗氧化剂N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-L-cystein,NAC)共处理细胞时,细胞死亡率和细胞内ROS水平均明显降低。Western blotting检测结果表明DHA可以引起Caspase-3的切割,同时,这种变化可以被NAC抑制。结果表明在无葡萄糖条件下,DHA可以通过增加细胞内ROS的水平,激活Caspase凋亡通路,进而促进乳腺癌细胞MDA-MB-231死亡。; 万振昆任子健郜倩倩王盈戴一凡; 关键词：二十二碳六烯酸 MDA-MB-231细胞肿瘤细胞死亡

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国家重点基础研究发展计划(2009CB918904)