深圳市基础研究计划项目(JCYJ20120613115323982)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 基于双向电泳技术的里氏木霉高效组成型启动子筛选被引量：2
- 2014年
- 获得强启动子是建立高效表达系统的基础。通过蛋白质双向电泳技术从蛋白质水平全面筛选里氏木霉的组成型启动子,获得了3个表达效率较高的启动子,分别是葡萄糖/核糖醇脱氢酶基因的启动子(grdh)、微体蛋白基因的启动子(hex1)和FAD相关蛋白基因的启动子(flo)。通过木聚糖酶Ⅱ(XYN2)的高效同源表达对这些启动子的功能进行了验证,为在里氏木霉中进行同源或异源蛋白的组成型表达提供了有效的工具。
- 禹建腾谢钧王绍文王娟刘刚
- 关键词：里氏木霉蛋白质组学二维电泳木聚糖酶
- 锌指蛋白在丝状真菌纤维素酶基因表达调控中的研究进展被引量：5
- 2014年
- 简要介绍了C2H2型、C4型和C6型三类锌指蛋白,分别从三类锌指蛋白总结了其在丝状真菌纤维素酶基因表达调控中发挥的作用,举例分析了锌指蛋白在纤维二糖水解酶Ⅰ和纤维二糖水解酶Ⅱ编码基因上表达调控的过程,结合相关研究总结了锌指蛋白在丝状真菌产纤维素酶中应用,最后指出通过该方面研究将有助于在分子水平上揭示纤维素酶表达调控的机理,为高效率、低成本生产纤维素酶奠定基础。
- 杨帆王娟
- 关键词：丝状真菌锌指蛋白纤维素酶半纤维素酶基因表达调控
- 里氏木霉GH61家族糖苷酶的高效表达及酶学特性研究被引量：4
- 2014年
- 【目的】GH61家族糖苷水解酶具有葡聚糖氧化酶活性,通过对葡聚糖链的随机氧化而破坏木质纤维素的结晶结构,从而使木质纤维素容易被纤维素酶降解。重组表达、纯化获得里氏木霉的GH61家族糖苷水解酶(TrGH61,原名为EGⅣ),并研究其在纤维素酶水解木质纤维素中的作用。【方法】通过Overlap PCR将里氏木霉丙酮酸脱羧酶的启动子、纤维二糖水解酶cbh1的信号肽、EGⅣ基因和PDC终止子依次连接构建了里氏木霉的表达盒,通过该表达盒使TrGH61蛋白基因整合到里氏木霉的基因组DNA上进行同源表达。研究表达产物TrGH61的水解活性、与纤维素酶水解协同效应,以及TrGH61作为金属氧化酶的特性研究。【结果】在PDC启动子的作用下,TrGH61得到高效表达,摇瓶培养的表达量达到2.33 g/L。TrGH61有微弱的内切葡萄糖苷酶活性,比活力为0.02 IU/mg,但能显著提高纤维素酶水解稻草粉的活性,协同度最高可达1.998。低浓度的金属离子Cu2+、Co2+和还原性电子供体还原型谷胱甘肽、L-抗坏血酸、焦性没食子酸均能显著促进其水解效应。TrGH61能够降低稻草粉纤维素聚合度和结晶度。【结论】通过PDC启动子可以实现TrGH61蛋白高效组成型表达,TrGH61作为纤维素酶活性促进因子,通过破坏纤维素结晶结构作用机制协同增强纤维素酶水解木质纤维素。
- 冯飞王绍文王娟刘刚
- 关键词：里氏木霉纤维素酶
- 一株产木聚糖酶嗜热真菌的分子鉴定及酶学性质研究被引量：2
- 2013年
- 从深圳市南山区热电厂热废气排放口分离了12株真菌，经产酶发酵复筛，获得了一株具有较高木聚糖酶酶活的嗜热真菌。根据分子鉴定结果，确定该菌株为篮状菌属的嗜热踝节茵（Talaromyces thermophilus）。经玉米芯粉诱导后该菌株的木聚糖酶酶活可达238．13IU/mL。对其粗酶液酶学性质的研究结果表明，该菌株木聚糖酶的最适温度为80℃，于50℃放置30min后酶活可保持原始酶活的92％，具有很好的耐热性和热稳定性；该酶的最适pH为7，且在较宽的pH范围内（pH3-11）具有优异的pH稳定性。上述性质使其在多种工业过程中具有潜在应用价值。
- 吴亚宁曾艾伦张玉媚王娟
- 关键词：嗜热真菌木聚糖酶酶学性质
- CBHⅡ和EGⅣ的重构基因在里氏木霉中的组成型表达被引量：2
- 2015年
- 重构基因cbh2-linker-CDeg4表达的融合蛋白同时获得具有外切葡聚糖酶CBH II和内切葡聚糖酶EG IV 2种催化活性,在纤维素降解等方面有着重要应用。本研究通过overlap PCR将里氏木霉丙酮酸脱羧酶(PDC)的启动子、纤维二糖水解酶cbh1的信号肽、重构基因cbh2-linker-CDeg4和pdc终止子依次连接,以质粒p PICZαA为基本骨架,构建表达载体p PIC-PCT。采用原生质体转化法将p PIC-PCT和含潮霉素抗性筛选标记的质粒p AN7-1共转里氏木霉。SDS-PAGE分析表明,重构基因cbh2-linker-CDeg4实现了在里氏木霉中的组成型表达,测得重组木霉发酵上清液的CMCNa酶活最高达到4.08 U/m L,是出发菌株的5.55倍,FPA酶活达到0.915 U/m L,较出发菌株提高了43.6%。酶学性质初步研究表明:粗酶液的最适p H为5.0,最适温度为50℃。
- 曾敏邓丽瑜汤新刘刚余少文
