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艾滋病诊断治疗和预防产品的评价关键技术建立与推广应用被引量：1: 2019年; 由中国食品药品检定研究院和中国科学院昆明动物研究所共同完成的'艾滋病诊断、治疗和预防产品的评价关键技术建立与推广应用'项目,于2017年获得国家科学技术进步奖二等奖,主要完成人:王佑春、郑永唐、黄维金、杨柳萌、许四宏、王睿睿、聂建辉、刘强、罗荣华、宋爱京等人。; 黄维金杨柳萌郑永唐王佑春; 关键词：临床前国家参考品耐药性突变不同基因型推广应用

痘苗病毒滴度测定用国家标准品的制备被引量：4: 2012年; 目的制备病毒载体疫苗滴度测定用国家标准品。方法以鸡胚成纤维细胞制备痘苗病毒,经密度梯度超速离心纯化后,加入天花疫苗保护剂,分装冻存,分发至我国4个不同实验室,按照统一的结晶紫染色蚀斑法实验方案进行协作标定,每次实验稀释后取2个稀释度,每个稀释度设5个平行孔,计算各实验室检测结果的几何均数,对标准品中痘苗病毒滴度进行赋值。检测病毒标准品于不同温度下保存不同时间的稳定性,并对病毒标准品的各项质量指标进行检定。结果 4个实验室共测定44次,4个实验室间的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),各实验室检测结果的几何平均数为3.05×106PFU/ml,95%CI为2.00×106～4.65×106PFU/ml,标准差为0.09,总变异系数1.41%。制备的痘苗病毒标准品于4℃可稳定放置10 d,37℃放置稳定性较差。制备的痘苗病毒标准品装量检查合格(1 ml/支);pH值为6.9;无菌试验合格;分装重量精密性为0.95%。结论制备的痘苗病毒标准品可作为痘病毒载体疫苗滴度测定用标准品。; 黄维金朱蓉赵晨燕徐静万延民齐影刘强王文波温智恒周艳孟淑芳俞永新王佑春; 关键词：痘苗病毒标准品

我国不同艾滋病候选疫苗小鼠细胞免疫应答评价: 2010年; 目的比较我国不同艾滋病（AIDS）候选疫苗小鼠细胞免疫应答水平.方法将我国6种艾滋病候选疫苗按其各自免疫程序,免疫BALB/c小鼠,分离脾细胞,利用酶联免疫斑点法（ELISPOT）与胞内因子染色法（ICS）检测其对HIV特异多肽的细胞免疫应答水平.结果 6种艾滋病候选疫苗利用潜在T细胞表位（PTE）Gag、Env和Pol肽库和ELISPOT法检测IFN-γ的分泌情况,结果各疫苗的小鼠细胞免疫阳转率为70%～100%,各疫苗引起特异细胞免疫应答的反应肽库不同,强度亦不相同.1#和2#疫苗利用ELISPOT检测分泌Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2的小鼠脾细胞数量,两疫苗的IFN-γ和IL-2检测结果均呈中度相关性（r1=0.62,P1＜0.01;r2=0.79,P2＜0.01）.ELISPOT和ICS检测1#疫苗免疫后分泌IFN-γ的小鼠脾细胞数,结果两种方法的小鼠阳转率均为66.7%（10/15）,ELISPOT阳性细胞数与ICS阳性细胞比例呈中度相关（r=0.55,P＜0.05）.结论我国不同AIDS候选疫苗引起的小鼠细胞免疫应答在广度和强度上存在差别.ELISPOT或ICS检测IFN-γ等Th1类细胞因子可作为疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的评价指标.; 黄维金张春涛赵晨燕聂建辉宋爱京鲁凤民王佑春; 关键词：艾滋病疫苗细胞免疫应答

我国不同艾滋病候选疫苗小鼠细胞免疫应答评价: 目的比较我国不同艾滋病(AIDS)候选疫苗小鼠细胞免疫应答水平。方法将我国6种艾滋病候选疫苗按其各自免疫程序,免疫BALB/c小鼠,分离脾细胞,利用酶联免疫斑点法(ELISPOT)与胞内因子染色法(ICS)检测其对HIV...; 黄维金张春涛赵晨燕聂建辉宋爱京王佑春; 关键词：艾滋病疫苗细胞免疫应答; 文献传递

痘苗病毒弱毒株广9株对动物的致病力研究被引量：6: 2011年; 目的了解经痘苗病毒天坛株(VTT)3次挑斑纯化筛选出的痘苗病毒减毒株广9株(VG9)的神经毒性和致病性。方法对痘苗病毒VG9和其亲代病毒VTT进行小鼠和乳鼠及家兔脑内毒力测定、裸鼠腹腔毒力测定及家兔皮内反应性实验,并观察实验动物的发病率和死亡率及皮肤坏死情况。结果两株病毒对小鼠和乳鼠的脑内毒力(icLD50)值显示,VTT株较VG9株分别强约100倍和18倍;对家兔脑内的毒力虽然icLD50值显示两株病毒相同,但VTT致家兔发病的数量较VG9多,其50%发病剂量较VG9多32倍。家兔皮内接种病毒后,较低病毒滴度(6.63 lg PFU)的VTT接种点出现严重的皮肤坏死,而VG9仅在较高滴度(7.54 lg PFU)接种点皮肤出现轻微坏死。结论通过不同途径接种几种实验动物均显示VG9的毒力较其母株VTT明显减弱。可以预测VG9痘苗在人体可能产生的不良反应较VTT痘苗低,并且有可能比VTT更适合作为痘苗病毒载体应用于新的重组疫苗(如HIV疫苗)的研发。; 朱蓉黄维金严子林温智恒王文波周艳王佑春俞永新; 关键词：痘苗病毒毒力

痘苗病毒滴度测定国家标准品的研制: 目的研制病毒载体疫苗滴度测定用痘苗病毒滴度国家标准品。方法制备一份痘病毒母液,加入保护剂,分装冻存,分发至我国5个不同实验室,按照统一的结晶紫染色蚀斑法实验方案进行协作标定,每次实验稀释后取2个稀释度,每个稀释度平行5孔...; 黄维金朱蓉赵晨燕李媛媛万延民齐影刘强王文波温智恒周艳孟淑芳王佑春俞永新; 关键词：重组痘苗病毒标准品; 文献传递

痘苗病毒弱毒株广9株的免疫原性分析: 目的了解痘苗病毒减毒株广9株(VG9)对BALB/c小鼠的免疫原性。方法痘苗病毒VG9和其亲代病毒天坛株(VTT)调整到同一病毒滴度后皮内途径接种小鼠一次,每周采血检测,持续4周。ELISA检测血清中抗痘苗病毒特异性抗体...; 朱蓉黄维金王佑春俞永新; 关键词：痘苗病毒免疫原性免疫血清; 文献传递

痘苗病毒弱毒株广9株的免疫原性分析被引量：3: 2011年; 目的分析痘苗病毒弱毒株广9株(Vaccinia virus Guang 9 strain,VG9)对BALB/c小鼠的免疫原性。方法用鸡胚成纤维细胞培养痘苗病毒VG9株和天坛株(Vaccinia virus Tian Tan strain,VTT),离心纯化病毒,经小鼠背部皮内免疫后,每周采血,共4次,采用ELISA法检测小鼠血清中抗痘苗病毒特异性抗体效价;中和试验检测免疫后3周和4周小鼠血清中和抗体效价。结果两株痘苗病毒免疫后1周,小鼠血清中即产生抗痘苗病毒特异性抗体,效价均达1∶4 050;至第3周,抗体效价上升至1∶12 150;第4周时,VG9株抗体效价维持在1∶12 150,而VTT株效价可达1∶36 450。两株病毒诱导的中和抗体水平均在免疫后3周达峰值,且具有交叉中和作用,均对VTT株中和效果更好,VG9株诱导产生中和抗体的能力较VTT株略低。结论痘苗病毒VG9株与VTT株一样,具有良好的免疫原性,皮内免疫均能刺激小鼠产生良好的抗痘菌病毒特异性抗体和中和抗体。; 朱蓉黄维金王佑春俞永新; 关键词：痘苗病毒免疫原性酶联免疫吸附测定

HIV疫苗小鼠免疫原性检测方法的初步建立被引量：2: 2010年; 目的初步建立HIV疫苗小鼠免疫原性检测方法,并对HIV疫苗进行免疫原性评价。方法选择一种HIVDNA疫苗(D)、2种重组痘苗载体HIV疫苗(M和R),分别免疫BALB/c小鼠,6周后分离血清和脾淋巴细胞,采用ELISOPT和胞内因子染色法检测细胞因子分泌情况,MTS法检测淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测血清中抗-HIVIgG和IgA抗体水平。结果D、M和R疫苗均可诱导小鼠产生广泛的免疫应答,ELISPOT法可检出脾细胞分泌IFNγ、IL-2、IL-4和IL-6;胞内因子染色可检出IFNγ、IL-2和IL-4的分泌;D和M组脾淋巴细胞增殖试验阳性数高于R组;D、M和R组血清抗-HIVIgG抗体分别有0/5、1/5和5/5小鼠阳转,各组均未检出血清抗-HIVIgA。结论已初步建立了HIV疫苗小鼠免疫原性检测方法。; 黄维金张春涛赵晨燕王佑春; 关键词：HIV 疫苗免疫原性

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国家科技重大专项(2009ZX10004-801)

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