国家高技术研究发展计划(2001AA214011)
- 作品数：15 被引量：91H指数：6
- 相关作者：张杰宋福平黄大昉刘天明喻子牛更多>>
- 相关机构：中国农业科学院植物保护研究所中国农业科学院生物技术研究所山东轻工业学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 苏云金芽孢杆菌菌株B-Pr-88的生物学特性被引量：2
- 2004年
- 就自行分离的、对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88的生物学特性进行了系统研究。B-Pr-88可形成菱形、球形和不规则形等多种形态的晶体,主要由130kDa和60kDa两种蛋白组成;酯酶型与标准菌株蜡螟亚种和库斯塔克亚种一致,同属于galleriae型;10项生理生化反应结果表明,B-Pr-88与标准菌株蜡螟亚种反应一致;B-Pr-88菌株至少含有3种大小不同的质粒,经PCR-RFLP鉴定该菌株至少包括cry2Ab、cry9Ba和多种cry1(包括crylCb、cry1Db、cry1Fb和cry1Gb)等6种不同的杀虫晶体蛋白基因。
- 李长友张杰宋福平李国勋黄大昉
- 关键词：生物学特性杀虫晶体蛋白CRY基因微生物杀虫剂
- 苏云金芽孢杆菌vip3A基因的检测及保守性分析被引量：9
- 2003年
- Vip3A蛋白是苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)在营养期分泌的一类新型杀虫蛋白。用PCR方法从 114个Bt菌株和 4 1个Bt标准菌株中筛选到 39株即约 2 5 %的菌株含有vip3A基因。利用所制备的Vip3A蛋白的多克隆抗体对以上含有vip3A基因的Bt菌株进行Western印迹分析 ,发现多数PCR反应为阳性的菌株都产生 89kD大小的蛋白 ,其中有 4株没有Vip3A蛋白的表达。从以上菌株中挑选 2个对夜蛾科害虫具有较高和较低毒力的菌株 ,即S10 1和 6 11,并分别进行vip3A基因的克隆和测序 ,再与GenBank上所登录的其它 6个全长vip3A基因和 2个已报道的但未登录GenBank的vip3A基因进行核苷酸和氨基酸序列比较 ,结果表明 ,vip3A是一个极其保守的基因。将以上所克隆的 2个vip3A基因即vip3A S10 1和vip3A 6 11分别插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP S10 1和pOTP 6 11,转化到大肠杆菌M15 ,经 1mmol LIPTG诱导后均表达 89kD大小的Vip3A蛋白。蛋白可溶性试验表明 ,Vip3A S10 1和Vip3A 6 11分别有 4 8%和 35 %的蛋白是可溶的。将Vip3A S10 1和Vip3A 6 11蛋白和已报道的Vip3A S184蛋白对初孵斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,3个Vip3A蛋白对斜纹夜蛾幼虫毒力没有显著性差异 ,这说明了Vip3A个别氨基酸的?
- 陈建武唐丽霞宋少云袁美妗庞义
- 关键词：苏云金芽孢杆菌VIP3A基因保守性克隆
- 苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响被引量：5
- 2003年
- 苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C 半端缺少了一段含 4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定 ,报道苏云金杆菌辅助蛋白P2 0帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT310 1构建 3个表达质粒 ,即pT1B、pP1B和pDP1B ,3个质粒都含有cry1Ab基因 ,不同在于pT1B没有p2 0基因 ,pP1B含有p2 0全基因 ,而pDP1B不仅含有p2 0全基因 ,且在p2 0基因前插入cry1A(c)启动子。分别将这 3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中 ,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Westernblot表明cry1Ab基因在这 3株菌中均表达了 130kD的蛋白 ,部分降解为大约 6 0kD的蛋白。蛋白定量分析显示 ,3株菌 130kD蛋白量的比为 1∶1.4∶1 5 ,降解后的 6 0kD蛋白量的比为 1∶1.1∶1.6 ,Cry1Ab蛋白总量的比为 1∶1∶2∶1 6。镜检发现 ,Cry1Ab在 3株菌中都形成典型的菱形晶体 ,其晶体大小为T1B
- 汤慕瑾袁美妗陈建武师永霞曾少灵余健秀庞义
- 关键词：苏云金杆菌辅助蛋白杀虫晶体蛋白CRYLAB生物杀虫剂
- 甘肃产地葡萄酒的酿造研究被引量：6
- 2008年
- 用分离的3株天然葡萄酒酵母菌株GS13F、GS38A、HYHP3C和商品酵母RC212组合发酵生产原产地干红葡萄酒,葡萄原料赤霞珠和蛇龙珠采自武威。酒样理化指标及香气成分的GC-MS分析结果表明,以天然酵母菌株发酵的酒样,理化指标均符合葡萄酒国标要求,菌株GS38A发酵酒的酒度(7.2%)与RC212(8.0%)接近,而菌株GS13F的发酵香种类多、比例协调,主要有乙酸异戊酯(27.54%)、乙酸苯乙酯(15.67%)和2-苯乙醇(9.85%)。菌株配伍发酵后GS13F产香特性与GS38A、RC212高酒度特性优势互补,且发酵香种类和含量均增加,酒体骨架更为丰厚协调,可用于甘肃产地葡萄酒的生产。
- 郭志刚刘天明赵长增
- 关键词：配伍酿造
- 不同产区葡萄及葡萄酒香气成分比较研究被引量：21
- 2008年
- 以采自甘肃武威和山东烟台的赤霞珠葡萄为原料,用2株分离自甘肃的天然葡萄酒酵母菌株GS13F和GS38A发酵酿造干红葡萄酒,分别对葡萄汁和酒样进行香气成分的GC-MS分析。结果表明,2产区葡萄的香气成分均检出8种,但其种类和含量有显著差异。采自武威的主要是邻苯二甲酸二甲酯(68.48%)和邻苯二甲酸二乙酯(10.05%);而采自烟台的主要是邻苯二甲酸二甲酯(46.62%)和2苯-乙醇(7.69%)。
- 郭志刚刘天明赵长增张敏芳王慧
- 关键词：赤霞珠酵母菌株葡萄酒香气成分气相色谱-质谱分析
- 青海东部土壤中酵母物种多样性研究被引量：6
- 2009年
- 从青海的互助、民和、门源等10个州县收集土样分离得到98株酵母菌,利用26S rDNA D1/D2区域序列分析并结合形态学和生理生化特性对这些菌株进行了分类学研究,探讨了青海东部土壤中酵母的物种多样性及其分布。共鉴定出10属13种(其中有两个疑似新种),其中Ga-lactomyces geotrichum和Rhodotorula mucilaginosa为该地的优势种。
- 徐美鑫刘天明相茂功刘波尹雪利曾阳
- 关键词：酵母菌RDNA物种多样性
- 利用S-层蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面展示多聚组氨酸肽(简报)被引量：5
- 2003年
- S层(Slayer)是由单一的蛋白或糖蛋白组成的薄层晶状结构，它广泛存在于古细菌和真细菌细胞的最外表面，可包裹整个细胞。S层在结构化学、形态学、遗传学以及物理化学等方面具有独特的性质，使之在生物技术、分子纳米技术和仿生学等领域蕴藏着广泛的应用潜力。近年来。
- 王莉孙明喻子牛
- 关键词：S-层蛋白苏云金芽胞杆菌细胞
- 苏云金芽孢杆菌cry基因在大肠杆菌中表达产物和生物活性被引量：5
- 2002年
- 研究了几种Btcry基因于大肠杆菌 (Escherichiacoli)中表达产物在pH 10 0的 5 0mmol/L碳酸钠和 2 0mmol/L乙醇胺溶解液中的溶解性 ,发现同样的Cry蛋白在碳酸钠中的溶解度大于乙醇胺。通过胰蛋白酶消化 ,明确Cry1Ca7、Cry1Ia8酶解产物为 38kD多肽 ;Cry1Ie1、Cry1Cb2、Cry2Ab4酶解产物为 4 1kD多肽 ;Cry1Ac酶解产物为 6 0kD多肽。采用FPLC层析方法对 6种原毒素及其酶解后得到的毒素多肽进行了分离纯化 ,比较了原毒素和毒素的杀虫活性的差异。其结果表明 ,Cry1Ac的原毒素和毒素对棉铃虫初孵幼虫的校正死亡率均为 10 0 % ,Cry2Ab4的原毒素的毒力高于其酶解毒素。
- 韩岚岚宋福平李长友张杰赵奎军黄大昉
- 关键词：生物活性苏云金芽孢杆菌CRY基因原毒素毒素微生物杀虫剂
- 苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因特性分析被引量：11
- 2004年
- 营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率为 5 6 5 % (13 2 3) .同时对随机选择的 3个不同亚种菌株进行基因克隆和序列分析 ,表明其基因具有相当高的同源性 .运用生物信息技术 ,对营养期杀虫蛋白多肽进行了功能结构域比对分析 ,发现这 789多肽蛋白的N端 31至 15 0残基之间存在一种趋化信号传导因子相似序列 ,C端 5 36至 6 6 6残基之间则存在着纤维素结合结构域相似肽 .上述结果提示 ,营养期杀虫蛋白基因在苏云金芽胞杆菌天然菌株中高度保守并较为广泛分布 ,其编码蛋白的特殊结构提示了营养期杀虫蛋白潜在的功能特性 ,为进一步研究营养期杀虫蛋白奠定了基础 .
- 蔡启良刘子铎喻子牛
- 关键词：苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因克隆与序列分析
- PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究被引量：11
- 2003年
- Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。
- 陈中义吴限张杰宋福平管宇黄大昉
- 关键词：苏云金芽孢杆菌微生物杀虫剂DNA文库CRY基因PCR-RFLP基因分离
