国家自然科学基金(81202373)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：陕西省人民医院西安医学院福建医科大学更多>>
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- 噬菌体文库与计算机模拟筛选H1N1流感病毒血凝素结合位点的比较被引量：1
- 2018年
- 目的:对H1N1流感病毒血凝素HA的抗原表位初步筛选。方法:用噬菌体展示文库对2株抗体的结合位点进行筛选,将筛选的抗原位点结合HA序列进行多肽合成,免疫小鼠制备单克隆抗体,通过分子生物学手段对4株抗体的轻链和重链可变区基因进行调取,通过计算机模拟抗体序列结合的抗原的结构域,推测抗体结合的氨基酸位点。结果:噬菌体文库筛选得出抗体的结合序列富含组氨酸和精氨酸,将针对多肽的单克隆抗体的序列和前期获得的2株抗HA单克隆抗体的序列比对分析,发现A1-8和anti-14p结合的HA抗原序列相一致,H1-13和anti-11p结合的HA抗原序列相一致。结论:通过将噬菌体展示文库技术和计算机模拟预测抗原抗体结合,可以有效筛选抗原表位,为流感病毒HA抗原表位预测方法的完善提供理论基础。
- 李慧瑾连媛媛孙丽君孙晶莹李元胡军曹慧玲
- 关键词：H1N1流感病毒血凝素
- 甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析
- 2013年
- 目的:采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法:设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序,与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果:巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因,并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论:建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法,为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础,并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。
- 李慧瑾李研孙晶莹高锦伟赵向绒封青谭天天胡巧侠李元胡军
- 关键词：甲型H1N1流感病毒可变区巢式PCR
- 病毒感染与1型糖尿病被引量：5
- 2016年
- 1型糖尿病(T1DM)大多被认为是一种自身免疫相关性疾病,发病因素复杂,与遗传、环境和免疫因素有关。早就有报道认为,感染因素是导致1型糖尿病发生的重要的环境因素之一。本文将就1型糖尿病发病概况、与1型糖尿病相关的病毒及证据、病毒可能参与的1型糖尿病发生的致病机理等方面的相关文献做一综述。
- 齐宗利张瑜庆胡军
- 关键词：1型糖尿病病毒感染肠病毒流感病毒
- H1N1流感病毒血凝素对人肺细胞的损伤作用及机制研究被引量：2
- 2018年
- 目的:研究H1N1流感病毒血凝素HA对人胚肺成纤维细胞的损伤作用并初步探讨其机理。方法:合成2009 H1N1的HA基因全长,分别将HA的PCR产物和pEGFP-N1质粒经Hind Ⅲ和EcoRI酶切电泳、纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α,构建真核表达质粒pEGFP-N1/HA。质粒转染293细胞,检测其转染效率,并收获细胞总蛋白进行Western blotting检测。将阳性质粒转染MRC-5细胞,CCK-8检测HA的表达对细胞增殖活性,线粒体膜电位检测试剂盒检测其对细胞的早期凋亡的影响,ATP检测试剂盒检测HA的表达对ATP水平的改变。结果:PCR电泳检测获得分子量为1700 bp左右的目的条带,菌落PCR鉴定HA片段成功插入pEGFP-N1载体。荧光显微镜下检测pEGFP-N1/HA转染293细胞有明显荧光,Western blotting结果显示pEGFP-N1/HA转染细胞有单一的目的蛋白表达。HA的表达可明显抑制MRC-5细胞活力,HA的高表达降低MRC-5细胞的线粒体膜电位及ATP水平。结论:H1N1流感病毒HA对人肺细胞的损伤作用可能与影响肺细胞的线粒体功能有关。
- 李慧瑾李慧瑾连媛媛贺春霞秦魏孙丽君孙丽君孙晶莹曹慧玲
- 关键词：H1N1流感病毒血凝素人胚肺成纤维细胞
- 三株交叉反应性的流感病毒HA抗体与H1N1流感病毒的致病机制分析
- 2019年
- 目的:结合临床甲型流感病例分析流感病毒可能的致病机理。方法:收集87份陕西省2009年甲型H1N1流感重症,危重症及死亡病例的血常规参数,对其淋巴细胞、红细胞和血小板三个指标分析。制备针对甲型H1N1的单克隆抗体,采用抗体亚类鉴定试剂盒分析其抗体轻链和重链的亚型,通过血凝活性实验检测三株抗体的血凝抑制活性,通过ELISA检测三株抗体与人和小鼠的血红蛋白、红细胞、白细胞膜和血小板膜的反应,通过免疫组化分析三株流感病毒抗体与正常小鼠肺组织的结合。结果:流感病毒感染后的死亡病例中淋巴细胞、红细胞和血小板均明显降低。三株抗体与人和小鼠的淋巴细胞、红细胞和血小板均有不同程度的交叉反应;免疫组化结果同时也证实三株HA抗体与小鼠的肺组织有不同的结合力。结论:流感病毒致病的原因可能与流感病毒感染机体后产生的抗体可与血液和组织中的成分结合有关。
- 李慧瑾李慧瑾孙丽君孙晶莹赵向绒梁导艳李元
- 关键词：H1N1流感病毒血凝素
