河南省科技攻关计划(072102310054)
- 作品数：6 被引量：31H指数：3
- 相关作者：樊青霞李克王留兴何炜王峰更多>>
- 相关机构：郑州大学第一附属医院郑州大学郑州大学第二附属医院更多>>
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- 神经型钙粘素在食管鳞癌组织中的表达及RNAi沉默该基因对EC9706细胞体外侵袭能力的影响被引量：10
- 2009年
- 背景与目的:上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin)和神经性钙粘附蛋白(N-cadherin)在细胞的迁徙和肿瘤浸润转移方面有着重要的作用。许多研究表明,E-cadherin是作为一种抑癌基因发挥作用的,与之相反,N-cadherin在促进肿瘤的浸润转移方面具有重要作用。本研究探讨N-cadherin在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义,以及RNA干扰(RNAi)沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706细胞体外侵袭能力的影响。方法:采用免疫组织化学PV法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管粘膜组织中E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达。通过逆转录病毒介导的RNAi技术沉默EC9706细胞中N-cadherin的表达,观察该细胞体外侵袭能力的变化。结果:正常食管粘膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中E-cadherin的阳性率依次降低,分别为95.2%、71.0%、40.3%;N-cadherin的阳性率依次升高,分别为29.0%、61.3%、75.8%。E-cadherin的阴性率及N-cadherin的阳性率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05),二者在食管鳞癌组织中的表达呈负相关关系(r=-0.534,P<0.05)。稳定干扰后的EC9706细胞中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均下调。Transwell小室体外侵袭实验结果显示,正常对照组的穿膜细胞数为123.4±8.2,而干扰载体组的穿膜细胞数则为49.6±6.8(P<0.05)。结论:食管鳞癌组织中E-cadherin的低表达和N-cadherin的高表达与食管鳞癌的发生、浸润及转移密切相关;RNAi沉默N-cadherin基因表达可以使EC9706细胞的体外侵袭能力降低。
- 李克王鑫何炜林娜樊青霞
- 关键词：鳞状细胞癌N-CADHERINEC9706细胞
- RNAi沉默N-cadherin表达对EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨RNAi沉默N-cadherin表达对人食管鳞状细胞癌EC9706细胞体内生物学行为的影响。方法:通过逆转录病毒介导的RNAi技术将N-cadherin基因的RNA干扰载体pMSCVneo/N-cadherin质粒及对照质粒pEGFP-MSCVneo质粒分别转染至人食管癌细胞系EC9706,运用G418进行抗性克隆的筛选和扩增,进而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706(分别命名为干扰载体组和空载体组),将正常对照组、空载体组和干扰载体组EC9706细胞通过皮下注射的方式接种于裸鼠背部肩胛区,比较各组裸鼠成瘤期、成瘤大小、瘤体终重量及终体积等情况。运用免疫组织化学方法和Western blotting方法检测3组裸鼠移植瘤组织中E-cadherin、N-cad-herin和MMP-9蛋白的表达情况。TUNEL法检测3组裸鼠移植瘤组织中细胞的凋亡水平。结果:(1)与正常对照组和空载体组相比较,干扰载体组裸鼠移植瘤的生长速率、成瘤大小、瘤体终重量和终体积明显降低(P<0.05)。(2)与正常对照组和空载体组相比,干扰载体组裸鼠移植瘤组织中N-cadherin和MMP-9的蛋白表达均下调(P<0.05),而E-cadherin的蛋白表达则无明显变化(P>0.05)。(3)与正常对照组(51.55±4.68)和空载体组(54.17±5.26)相比,干扰载体组(106.81±6.47)裸鼠移植瘤组织中凋亡的阳性细胞数明显增加(P<0.05)。结论:RNAi沉默N-cadherin表达可明显抑制EC9706细胞裸鼠体内移植瘤的生长,其作用机制可能是通过下调MMP-9的表达,降低细胞对细胞外基质的降解能力,进而降低EC9706细胞的体内侵袭力。RNAi沉默N-cadher-in表达具有体内抑制食管鳞状细胞癌细胞生长的作用。N-cadherin可望成为抗食管鳞状细胞癌治疗的潜在分子靶点。
- 李克刘莺刘文静侯新芳何素英王居峰
- 关键词：食管肿瘤RNA干扰肿瘤侵袭
- S100A4在食管鳞癌上皮间质转化过程中的作用及其分子机制被引量：3
- 2015年
- 目的探讨钙结合蛋白S100A4在食管鳞癌上皮间质转化（EMT）过程中的作用及其可能的分子机制。方法化学合成靶向S100A4的3对siRNA序列瞬时转染EC9706细胞，同时以转染阴性对照siRNA、脂质体和空白EC9706细胞作为对照，荧光定量RT—PCR和Westernblot法检测其抑制效率。将抑制效果最佳的S100A4siRNA2以相同条件转染食管癌EC9706细胞，同时以转染阴性对照siRNA、脂质体和空白EC9706细胞作为对照；然后在转染S100A4siRNA2的EC9706细胞中转染snarl真核表达载体，并以S100A4siRNA2组、snail真核表达载体组和空白组为对照，分别采用荧光定量RT—PCR和Westernblot法检测E—cadherin、vimentin和snail的表达，倒置显微镜观察各组EC9706细胞形态变化，Boydenchamber和划痕实验检测各组EC9706细胞侵袭迁移能力的变化，CCK-8法检测各组EC9706细胞增殖能力的变化。结果S100A4siRNA2组S100A4mRNA和蛋白的相对表达量分别为0．417±0．041和0．337±0．039，穿膜细胞数为（61．608±8．937）个，划痕愈合距离为（0．216±0．064）mm，A值为0．623±0．084，E—cadherinmRNA和蛋白的相对表达量分别为0．619±0．032和0．495±0．034，vimentin mRNA和蛋白的相对表达量分别为0．514±0．032和0．427±0．028，snailmRNA和蛋白的相对表达量分别为0．573±0．029和0．429±0．041，与脂质体组、阴性对照组和空白组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。S100A4siRNA2作用于EC9706细胞24h后，细胞形态向上皮细胞形态转变，呈去梭形化趋势。S100A4siRNA2＋snail真核表达载体组的穿膜细胞数和划痕愈合距离分别为（69．382±9．666）个和（0．274±0．029）mm，A值为0．823±0．101，snailmRNA和蛋白的相对表达量分别为0．704±0．037和0．625±0．031，vimentinmRNA和蛋白的相对表达量分别为0．712±0．046和0．609±0．038，高于S100A4siRNA2组（均P〈0．05）；S100A4siRNA2＋snail真核�
- 刘剑王志红王留兴樊青霞
- 关键词：食管肿瘤S100A4上皮间质转化
- Stathmin基因在食管鳞癌中的表达及生物学意义被引量：16
- 2010年
- 目的探讨Stathmin基因在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其与ESCC发生、发展的关系。方法应用原位杂交和免疫组织化学法检测3株食管鳞癌细胞EC9706、Eca109和EC-1及75例食管鳞癌组织、25例癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中StathminmRNA和蛋白的表达,并分析Stathmin基因表达与临床病理特征的关系。结果 StathminmRNA和蛋白在3株食管鳞癌细胞EC9706、Eca109和EC-1中均呈高表达,阳性表达率>80%。在75例食管鳞癌组织标本中,StathminmRNA和蛋白的阳性表达率分别为82.7%和81.3%,与癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织比较有显著性差异(χ2=19.204、25.03,均P<0.01)。StathminmRNA和蛋白在食管鳞癌组织中的表达呈正相关(r=0.413,P=0.000)。不同分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度和TNM分级的食管鳞癌组织之间StathminmRNA和蛋白表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论食管鳞癌细胞株及组织中StathminmRNA及蛋白高表达,与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期显著相关,Stathmin可能与食管鳞癌发生发展有关。Stathmin对ESCC的早期诊断及预后判断均有重要意义。Stathmin有望成为理想的生物治疗靶点。
- 王峰王留兴何伟朱利楠赵培荣樊青霞
- 关键词：食管鳞癌STATHMIN原位杂交免疫组化
- RNA干扰沉默神经型钙黏素基因对人食管癌细胞系EC9706侵袭能力的影响
- 2009年
- 目的探讨RNAi沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的影响。方法将N-cadherin基因的RNA干扰载体pMSCVneo/N-cadherin质粒通过脂质体转染法转染人食管癌细胞系EC9706,运用G418进行抗性克隆的筛选和扩增,进而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,通过RT-PCR和Western blot检测稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平的变化,同时检测转染前后食管癌细胞系EC9706中MMP-9基因表达水平的变化,并通过Transwell小室体外侵袭实验检测转染前后人食管癌细胞系EC9706体外侵袭能力的变化。结果通过G418加压筛选法得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706,RT-PCR和Westernblot检测结果显示,稳定转染后的人食管癌细胞系EC9706中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均下调,同时MMP-9基因的mRNA表达水平也随之下调;Transwell小室体外侵袭实验结果显示,伴随着N-cadherin和MMP-9表达水平的下调,人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力也降低(P<0.05)。结论RNA干扰沉默神经型钙黏素基因可以使人食管癌细胞系EC9706的体外侵袭能力降低。
- 何炜李克王鑫林娜樊青霞
- 关键词：食管鳞癌RNA干扰N-CADHERINEC9706
- 上调stathmin基因表达对食管鳞癌EC9706细胞的作用被引量：4
- 2010年
- 目的 构建stathmin基因真核表达载体,研究上调stathmin基因表达对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用RT-PCR扩增stathmin cDNA,克隆至pcDNA3.1（＋）真核表达载体.重组载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染细胞株.显微镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞stathmin蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成,流式细胞仪分析细胞周期,裸鼠移植瘤实验研究转染细胞的成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pcDNA3.1（＋）载体,获得pcDNA3.1-stathmin重组表达载体.Western印迹法证实重组载体上调EC9706细胞stathmin蛋白表达,差异有统计学意义（P＜0.01）.与对照组细胞比较,pcDNA3.1-stathmin转染细胞形态变大、多核、有丝分裂障碍;pcDNA3.1-stathmin转染细胞倍增时间延长（25～28 h）、增殖活性降低、细胞克隆形成率下降（34.5%±6.9%）,细胞分裂阻滞于G2/M期（21.7%±3.4%）,裸鼠体内致瘤性降低,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.结论 重组质粒pcDNA3.1-stathmin上调stathmin基因表达能够抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖和致瘤性,stathmin可能成为食管鳞癌患者治疗的理想靶点.
- 王峰王留兴何炜李克王瑞林赵培荣樊青霞
- 关键词：食管肿瘤STATHMIN基因EC9706细胞
