黑龙江省科技攻关计划(GC06C502)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王海姜成刚周建华相文华华秋东更多>>
- 相关机构：东北农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技攻关计划项目黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人/猴免疫缺陷病毒SHIV衣壳蛋白p27的表达纯化及活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增p27gag基因,并克隆入pMD18-T载体,测序鉴定;将p27gag基因插入表达载体pET32aT7启动子下游,构成重组质粒pET32a-p27并使其在大肠杆菌BL21中高效表达,最后利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白,Western Blot检测活性。结果显示,融合蛋白p27经SDS-PAGE电泳观察可见45ku的明显条带,与预期分子质量大小一致且多以可溶形式表达,目的蛋白占菌体总蛋白的36.8%;经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达98%;经Western Blot试验检测,证明此融合蛋白p27能与SHIV阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原活性。该研究为进一步开发早期诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定了初步基础。
- 华秋东姜成刚王海相文华周建华陈维多
- 关键词：SHIVP27
