国家高技术研究发展计划(2002AA205051)
- 作品数：24 被引量：144H指数：7
- 相关作者：裴雪涛白慈贤王健民王韫芳高磊更多>>
- 相关机构：军事医学科学院第二军医大学解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划上海市科学技术委员会基础研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉硬化闭塞症被引量：13
- 2006年
- 李伟娟俞芳刘阁玲王韫芳南雪项岫秀裴雪涛
- 关键词：糖尿病骨髓干细胞移植下肢动脉闭塞症
- 成体干细胞的可塑性及其在再生医学应用中的思索被引量：8
- 2003年
- 近年来, 随着对胚胎干细胞研究的不断深入, 以及在此基础上对成体干细胞生物学特性的逐步认识, 人们发现, 成体干细胞除了具有较强的自我更新和增殖、分化潜能外, 还具有可塑性. 成体干细胞可塑性现象的发现, 使得人们对于今后应用它们进行细胞再生治疗以替代因损伤或疾病导致的组织缺损而充满希望. 尽管成体干细胞可塑性的发生机制及其在再生医学中的应用等问题尚存争议, 对于这些基本问题的深入探索无疑会使成体干细胞在未来的细胞和组织工程中具有广阔的应用前景.
- 王韫芳裴雪涛
- 关键词：成体干细胞胚胎干细胞细胞工程
- Spindlin1编码的蛋白质定位于细胞核并使NIH3T3细胞发生恶性转化
- 2004年
- 研究了卵巢癌中高表达的新基因spindlin1的亚细胞定位及其对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,并探讨了人spindlin1基因的生物学功能 .采用脂质体转染法将构建的融合蛋白表达载体 pEGFP N1/pEGFP N1 spindlin1瞬时转染COS 7细胞 ,观察spindlin1基因的亚细胞定位 ;同时稳定转染NIH3T3细胞 ,经G4 18抗性筛选后 ,用RT PCR筛选并鉴定表达spindlin1的稳定细胞株 ;通过细胞增殖活性、流式细胞检测、软琼脂克隆形成、迁移实验及裸鼠成瘤等对转染细胞的生物学行为进行检测 .结果表明 ,spindlin1定位于胞核 ;并促进NIH3T3细胞的增殖 ,使其处于G2 /M期的细胞比例显著增加 ;同时证实过表达spindlin1的NIH3T3细胞不仅具明显的克隆形成及迁移能力 ,而且能使裸鼠成瘤 .由此我们得出结论 :spindlin1基因过表达可促使NIH3T3细胞发生恶性转化 ,提示spindlin1可能是一种与肿瘤形成相关的原癌基因 .
- 高艳红秦立篷张鹏陈琳袁红丰白慈贤闫舫岳文裴雪涛
- 关键词：细胞核成瘤性
- 小鼠间充质干细胞培养扩增后生物学特性研究被引量：16
- 2007年
- 本研究目的是分离富集小鼠骨髓间充质干细胞(mMSC),鉴定其生物学特性和多向分化潜能。取4-5周龄雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞,采用全骨髓贴壁法和单克隆培养法分离、纯化和扩增mMSC;分析细胞免疫表型、生长曲线、细胞周期;进行多向分化潜能鉴定;传代培养达30代后,进行成瘤性检测。结果表明:建立的小鼠间充质干细胞系在体外可连续传代培养达30代,细胞仍保持多向分化潜能,细胞高表达CD29、CD44、Sca-1、MHC-Ⅰ,中度表达CD13、CD90.2,不表达CD117、CD45、Flk-1、MHC-Ⅱ类抗原。mMSC体外能诱导分化成骨、脂肪、软骨细胞。结论:全骨髓贴壁法和集落培养法富集可获得mMSC,其在体外连续传代30代以上仍能维持生物学特性稳定,具有高度的增殖和多向分化潜能,无成瘤性。
- 解琳娜王健民邱慧颖高磊周虹龚胜兰
- 关键词：间充质干细胞骨髓细胞培养生物学特性
- 新基因人MOB cDNA的克隆与功能分析被引量：2
- 2004年
- 人MOB基因被认为是在脑组织中高表达的 5次跨膜而功能未知的膜蛋白 .从胎儿和成人肾脏消减杂交cDNA文库中获得了一条新的表达序列标签 (expressedsequencetag ,EST)序列 ,该序列对应于功能未知的MOB基因 .利用生物信息学分析工具和分子生物学技术 ,从胎儿肝脏中成功地克隆了人MOB基因cDNA序列 ,同时也获得了含有完整开放读码框的大鼠和鸡MOB的电子全长序列 .人MOB基因定位于 10q11 1～ 11 2之间 ,含有一个 12 4 2bp的开放阅读框 ,第 4 15位开始的ATG可能是翻译起始位点 .核酸序列相似性搜索发现 ,其他种属中存在与之高度相似的EST序列 ,如爪蟾 (79% )、羊 (87% )、猪 (94 % )、牛 (93% ) .蛋白质序列相似性搜索发现 ,人MOB与大鼠、小鼠和鸡MOB有 97%、 97%、 91%的相似性 ,与其他一些不同种属来源的假想蛋白有 4 5 %～ 73%的相似性 .不同物种之间MOB基因核酸和蛋白质序列的高度相似说明 ,MOB是进化上高度保守的蛋白质 .保守结构域分析发现 ,人、小鼠、大鼠和鸡MOB结构域组成完全一致 ,N端均与不育α基序(sterilealphamotif,SAM )结构域显著匹配 ,随后出现匹配显著性稍差的几个结构域 .核酸和蛋白质序列的保守性提示 ,除N端约 70个氨基酸组成SAM结构域外 。
- 袁红丰王冬梅李海民陈琳白慈贤岳文裴雪涛
- 关键词：脑组织膜蛋白表达序列标签CDNA序列
- 逆病毒介导EGFP基因转染人骨髓间充质干细胞的实验研究
- 2009年
- 目的探讨逆转录病毒介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染人骨髓间充质干细胞(hBM-MSC)的可行性。方法携带EGFP的重组逆转录病毒载体(EGFP-RV)转染体外培养扩增的hBM-MSC,嘌呤霉素筛选,获得表达EGFP的hBM-MSC/EGFP,以未转染的hBM-MSC为对照组,观察两组细胞的形态、生长特性、表面分子表达及向脂肪细胞、成骨细胞分化的潜能。结果EGFP-RV转染hBM-MSC后,获得稳定表达EGFP的hBM-MSC/EGFP;hBM-MSC/EGFP的细胞形态、生长特性、表面分子表达及向脂肪细胞、成骨细胞分化的潜能与未转染的hBM-MSC无差别。结论逆转录病毒介导的EGFP可作为人骨髓间充质干细胞的良好示踪剂。
- 马俐君杨建民周虹胡晓霞王健民
- 关键词：骨髓间充质干细胞增强型绿色荧光蛋白逆转录病毒载体
- HLA三维结构匹配预测脐带血移植后急性GVHD被引量：1
- 2004年
- 为探讨一种有效预测脐带血移植后急性移植物抗宿主疾病 (aGVHD)的方法 ,采用分子模拟技术对 2 5对已接受非亲缘脐带血移植并成功植入的血液病患者及其供者HLA A ,B ,DRB1分子的三维结构进行了模拟 ,并通过计算供受者不匹配的HLA分子间均方根差 (RMSD)及各差异位点的总RMSD ,将供受者之间不匹配HLA分子的结构差异转化为数字 ,根据量化差异分析预测非亲缘脐带血移植后aGVHD的发生和程度。 2 5名患者分为 3组 :第 1组为不发生aGVHD组 ,第 2组为aGVHDⅠ -Ⅱ组 ,第 3组为aGVHDⅢ -Ⅳ组。结果表明 :第 1组 8例 ,第 2组 13例 ,第 3组 4例。 3组供受者总RMSD值±标准差分别为 :0 .2 4± 0 .15 ,0 .2 5± 0 .14和 0 .4 7± 0 .2 2。第 3组的总RMSD值明显高于第 1和第 2组 (P <0 .0 5 )。结论 :采用HLA分子三维结构模拟匹配的方法 ,可以快速、简捷、准确地预测非亲缘脐带血移植后严重的aGVHD发生 ,为临床医生选择最佳脐血供者和避免严重的aGVHD的发生提供了理论依据 ,并对移植后免疫抑制药物的应用具有重要的指导意义。
- 旭日阎文瑛姜夕峰谢松梅朱娜孔繁华裴雪涛
- 关键词：HLA脐带血移植急性GVHD人类白细胞抗原
- 人伴肌动蛋白相关锚定蛋白基因cDNA的克隆与功能分析被引量：3
- 2003年
- 小鼠伴肌动蛋白相关锚定蛋白 (N RAP)是已知的与肌纤维生成有关的细胞骨架蛋白 ,但是 ,与此对应的人类N RAP基因的cDNA序列及其功能一直是未知的 .为了明确N RAP基因在人类中所起的作用 ,利用生物信息学分析工具和分子生物学技术 ,成功地克隆了人N RAP基因 .人N RAP基因cDNA序列含有一个 5 0 88bp的开放读码框 ,与小鼠N RAP基因有 86 %的相似性 .染色体定位分析表明 ,人N RAP基因定位于 10 q2 5～q2 6之间 ,编码区由 4 1个外显子组成 ,与HABP2和CASP7紧密连锁 .电子表达谱分析表明 ,肌肉、心脏、脑、脊髓和前列腺有人N RAP基因不同长度的cDNA序列 .人N RAP与小鼠N RAP蛋白质序列有 88%的相似性 ,与人Nebulin有约 6 3%的相似性 ,与小鼠Nebulin有约 5 9%的相似性 .结构域分析发现 ,N端为LIM结构域 ,从第170位氨基酸开始 ,连续出现 4 0个Nebulin相关重复序列 .RT PCR实验表明 ,人N RAP基因在成人脑、骨骼肌和心脏组织中都有表达 ,在骨髓中不表达 .亚细胞定位研究显示 ,人N RAP基因表达于胞浆 .基于序列相似性、结构域分析、表达谱分析和亚细胞定位研究 ,可以推测人N RAP与小鼠N RAP同属Nebulin家族 。
- 袁红丰王冬梅李海民陈琳王晓白慈贤岳文裴雪涛
- 关键词：CDNA克隆生物信息学LIM蛋白细胞骨架蛋白
- 抗坏血酸定向诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经细胞及其机理研究被引量：3
- 2003年
- 神经干细胞(NSCs)是神经系统发生的始祖细胞,具有自我更新和多向分化潜能.NSCs的研究不仅对阐明神经系统发育有重要意义,对神经系统疾病的治疗也提出了新的思路.研究NSCs定向分化的诱导因素和机制对NSCs的应用具有重要意义.本实验在体外神经干细胞培养鉴定和扩增的基础上,观察了抗坏血酸(从)对NSCs定向诱导分化作用,并探讨了分化过程中相关基因表达的变化和可能的信号传递途径.结果表明AA诱导能明显促进多巴胺能神经细胞特异性酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运子(DAT)mRNA和蛋白表达;NSCs表达Ptx3和较弱的Nurr1,不表达TH,DAT和Shh;诱导后Ptx3表达无变化,Nurr1,Shh,TH和DAT表达增强.Erk阻断剂PD98059能阻断AA对Nurr1,TH,DAT mRNA的作用.提示Nurr1参与AA定向诱导,从可能通过Erk1/2信号转导途径起作用.研究为获得足够的治疗帕金森氏病的多巴胺能神经元提供了新的思路,并对AA定向诱导的机制进行了初步研究,对更好地发挥NSCs移植治疗帕金森氏病具有重要意义.
- 郑敏王冬梅侯玲玲谢超李海民焦文仓白慈贤王亚平裴雪涛
- 关键词：神经干细胞多巴胺能神经细胞抗坏血酸分化帕金森氏病信号传递
- 间充质干细胞与人脐血CD34^＋细胞共移植对NOD／SCID小鼠造血重建的影响被引量：9
- 2008年
- 目的观察间充质干细胞（MSC）与不同比例脐血CD34^＋细胞共移植对NOD／SCID小鼠造血重建的影响，明确MSC与脐血CD34^＋细胞共移植的最适数量。方法给^60Coγ射线照射的雌性NOD／SCID小鼠共移植人MSC和不同比例的脐血CD34^＋细胞，观察共移植后42d内小鼠外周血白细胞和血小板变化，并于移植后42d处死小鼠，用流式细胞术检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量。结果与单纯脐血CD34^＋细胞移植相比较：①脐血CD34^＋细胞与1、5和10倍数量的MSC共移植时，可明显减轻外周血白细胞和血小板的下降幅度（P〈0．01），提前I周使白细胞和血小板恢复至正常水平（P〈O．05），三组间差异无统计学意义（P〉0．05）；②MSC与不同比例的脐血CD34^＋细胞共移植均可明显提高外周血、骨髓和脾脏造血细胞植入率，比例为10：1时，外周血、骨髓和脾脏中的人源细胞（huCD45^＋细胞）含量分别增加了（2．8±0．6）倍、（3．5±0．9）倍和（5．2±0．6）倍，增加倍数差异均有统计学意义（P〈0．01），达到了最佳的植入效果。结论脐血CD34^＋细胞与10倍数量的MSC共移植可达到最佳的促进造血重建作用。
- 马俐君胡晓霞周虹高磊解琳娜邱慧颖王健民
- 关键词：间充质干细胞NOD/SCID小鼠造血重建
