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国家高技术研究发展计划(2002AA205051): 作品数：24 被引量：148H指数：8; 相关作者：裴雪涛白慈贤王健民王韫芳高磊更多>>; 相关机构：军事医学科学院第二军医大学解放军第307医院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划上海市科学技术委员会基础研究重点项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉硬化闭塞症被引量：14: 2006年; 李伟娟俞芳刘阁玲王韫芳南雪项岫秀裴雪涛; 关键词：糖尿病骨髓干细胞移植下肢动脉闭塞症

成体干细胞的可塑性及其在再生医学应用中的思索被引量：8: 2003年; 近年来, 随着对胚胎干细胞研究的不断深入, 以及在此基础上对成体干细胞生物学特性的逐步认识, 人们发现, 成体干细胞除了具有较强的自我更新和增殖、分化潜能外, 还具有可塑性. 成体干细胞可塑性现象的发现, 使得人们对于今后应用它们进行细胞再生治疗以替代因损伤或疾病导致的组织缺损而充满希望. 尽管成体干细胞可塑性的发生机制及其在再生医学中的应用等问题尚存争议, 对于这些基本问题的深入探索无疑会使成体干细胞在未来的细胞和组织工程中具有广阔的应用前景.; 王韫芳裴雪涛; 关键词：成体干细胞胚胎干细胞细胞工程

Spindlin1编码的蛋白质定位于细胞核并使NIH3T3细胞发生恶性转化被引量：1: 2004年; 研究了卵巢癌中高表达的新基因spindlin1的亚细胞定位及其对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,并探讨了人spindlin1基因的生物学功能 .采用脂质体转染法将构建的融合蛋白表达载体 pEGFP N1/pEGFP N1 spindlin1瞬时转染COS 7细胞 ,观察spindlin1基因的亚细胞定位 ;同时稳定转染NIH3T3细胞 ,经G4 18抗性筛选后 ,用RT PCR筛选并鉴定表达spindlin1的稳定细胞株 ;通过细胞增殖活性、流式细胞检测、软琼脂克隆形成、迁移实验及裸鼠成瘤等对转染细胞的生物学行为进行检测 .结果表明 ,spindlin1定位于胞核 ;并促进NIH3T3细胞的增殖 ,使其处于G2 /M期的细胞比例显著增加 ;同时证实过表达spindlin1的NIH3T3细胞不仅具明显的克隆形成及迁移能力 ,而且能使裸鼠成瘤 .由此我们得出结论 :spindlin1基因过表达可促使NIH3T3细胞发生恶性转化 ,提示spindlin1可能是一种与肿瘤形成相关的原癌基因 .; 高艳红秦立篷张鹏陈琳袁红丰白慈贤闫舫岳文裴雪涛; 关键词：细胞核成瘤性

骨髓间充质干细胞移植重建极重度放射损伤小鼠造血功能被引量：8: 2008年; 目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cell,mMSC)单独输注对重度放射损伤小鼠造血功能重建的影响。方法:将体外培养扩增的雄性C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞输注给受致死剂量全身照射(8 Gy)的雌性C57BL/6小鼠,检测移植后外周血象、骨髓有核细胞数、病理变化、粒-单核细胞系祖细胞集落(CFU-GM)计数及性染色体比例,以未输注MSCs的小鼠作对照。结果:对照组小鼠(n=6)在照射后20d内全部死于造血功能衰竭;MSCs组移植后血象明显下降,但2周后迅速恢复,28d时恢复到照射前的60 %左右,42d外周血象基本恢复。MSC促进骨髓有核细胞数及CFU-GM快速恢复,有利于骨髓组织学的明显恢复改善。移植后42 d ,仍可在受致死量照射的受体鼠内检测到供体MSC,但不能长期植入。结论:小鼠骨髓间充质干细胞单独输注可促进重度放射损伤小鼠的造血功能恢复,其植入时间长短可能与输注的细胞量有关。; 刘凡凤邱慧颖解琳娜章卫平郑晓丽高磊王健民; 关键词：骨髓间充质干细胞造血系统

骨髓间充质干细胞对小鼠急性移植物抗宿主病的预防及治疗作用被引量：1: 2010年; 目的观测小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）对急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防及治疗作用，并探讨其干预机制。方法建立以C57BL／6小鼠为供体、致死剂量照射的BALB／c小鼠为受体的aGVHD动物模型。将小鼠分成6组：PBS组（单纯放射组）、BM组（单纯输注骨髓）、GVHD组（输注骨髓＋脾细胞）、MSC—A组（输注骨髓＋脾细胞，并于移植当天输注1×10^5MSC）、MSC—B组（输注骨髓＋脾细胞，并于移植当天输注5×10^5MSC）、MSC—C组（输注骨髓＋脾细胞，并于＋7d输注1×10^5MSC），观测各组的生存状态；绿色荧光蛋白基因（Ad—EGFP）转染MSC，输入aGVHD模型小鼠，观察MSC在靶器官组织中的分布。结果①供体MSC可显著控制小鼠的GVHD症状，延长aGVHD小鼠的平均生存时间：PBS组为（13．5±2．6）d、GVHD组为（11．1±4．0）d，MSC—A组为（26．4±7．7）d、MSC—B组为（22．7±9．2）d，MSC—C组为（22．9±8．2）d，MSC各组与GVHD组比较差异均有统计学意义（P〈0．01），但MSC各组之间无明显差异（P=0．28）。病理评估显示MSC可明显减少小肠及脾脏组织中淋巴细胞的浸润，减轻损害。②MSC可明显减少aGVHD环境中Thl类炎性因子的分泌：GVHD、MSC—A、MSC—B、MSC—C各组＋14d外周血上清中IFN-γ的水平分别为（607．9±157．1）、（143．6±37．5）、（117．0±77．8）、（131．4±63．4）ng／L，各组TNF—α的水平分别为（52．31±17．95）、（6．02±3．99）、（5．21±0．28）、（22．39±18．21）ng／L；MSC不影响aGVHD环境中异基因T淋巴细胞的增殖，但促进其凋亡：GVHD、MSC—A、MSC—B、MSC—C各组的CD3^＋AnnexinV^＋PI^-细胞率分别为（10．3±6．6）％、（13．5±13．8）％、（19．7±6．0）％、（16．6±7．3）％，其中MSC—B组与GVHD组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。③Ad—EGFP成功高效转染MSC，输注入aGVHD模型鼠6d后; 包晓辰王健民章卫平周虹郑晓丽高磊; 关键词：间充质干细胞移植物抗宿主病细胞因子绿色荧光蛋白质类

小鼠间充质干细胞培养扩增后生物学特性研究被引量：16: 2007年; 本研究目的是分离富集小鼠骨髓间充质干细胞(mMSC),鉴定其生物学特性和多向分化潜能。取4-5周龄雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞,采用全骨髓贴壁法和单克隆培养法分离、纯化和扩增mMSC;分析细胞免疫表型、生长曲线、细胞周期;进行多向分化潜能鉴定;传代培养达30代后,进行成瘤性检测。结果表明:建立的小鼠间充质干细胞系在体外可连续传代培养达30代,细胞仍保持多向分化潜能,细胞高表达CD29、CD44、Sca-1、MHC-Ⅰ,中度表达CD13、CD90.2,不表达CD117、CD45、Flk-1、MHC-Ⅱ类抗原。mMSC体外能诱导分化成骨、脂肪、软骨细胞。结论:全骨髓贴壁法和集落培养法富集可获得mMSC,其在体外连续传代30代以上仍能维持生物学特性稳定,具有高度的增殖和多向分化潜能,无成瘤性。; 解琳娜王健民邱慧颖高磊周虹龚胜兰; 关键词：间充质干细胞骨髓细胞培养生物学特性

新基因人MOB cDNA的克隆与功能分析被引量：2: 2004年; 人MOB基因被认为是在脑组织中高表达的 5次跨膜而功能未知的膜蛋白 .从胎儿和成人肾脏消减杂交cDNA文库中获得了一条新的表达序列标签 (expressedsequencetag ,EST)序列 ,该序列对应于功能未知的MOB基因 .利用生物信息学分析工具和分子生物学技术 ,从胎儿肝脏中成功地克隆了人MOB基因cDNA序列 ,同时也获得了含有完整开放读码框的大鼠和鸡MOB的电子全长序列 .人MOB基因定位于 10q11 1～ 11 2之间 ,含有一个 12 4 2bp的开放阅读框 ,第 4 15位开始的ATG可能是翻译起始位点 .核酸序列相似性搜索发现 ,其他种属中存在与之高度相似的EST序列 ,如爪蟾 (79% )、羊 (87% )、猪 (94 % )、牛 (93% ) .蛋白质序列相似性搜索发现 ,人MOB与大鼠、小鼠和鸡MOB有 97%、 97%、 91%的相似性 ,与其他一些不同种属来源的假想蛋白有 4 5 %～ 73%的相似性 .不同物种之间MOB基因核酸和蛋白质序列的高度相似说明 ,MOB是进化上高度保守的蛋白质 .保守结构域分析发现 ,人、小鼠、大鼠和鸡MOB结构域组成完全一致 ,N端均与不育α基序(sterilealphamotif,SAM )结构域显著匹配 ,随后出现匹配显著性稍差的几个结构域 .核酸和蛋白质序列的保守性提示 ,除N端约 70个氨基酸组成SAM结构域外。; 袁红丰王冬梅李海民陈琳白慈贤岳文裴雪涛; 关键词：脑组织膜蛋白表达序列标签 CDNA序列

逆病毒介导EGFP基因转染人骨髓间充质干细胞的实验研究: 2009年; 目的探讨逆转录病毒介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染人骨髓间充质干细胞(hBM-MSC)的可行性。方法携带EGFP的重组逆转录病毒载体(EGFP-RV)转染体外培养扩增的hBM-MSC,嘌呤霉素筛选,获得表达EGFP的hBM-MSC/EGFP,以未转染的hBM-MSC为对照组,观察两组细胞的形态、生长特性、表面分子表达及向脂肪细胞、成骨细胞分化的潜能。结果EGFP-RV转染hBM-MSC后,获得稳定表达EGFP的hBM-MSC/EGFP;hBM-MSC/EGFP的细胞形态、生长特性、表面分子表达及向脂肪细胞、成骨细胞分化的潜能与未转染的hBM-MSC无差别。结论逆转录病毒介导的EGFP可作为人骨髓间充质干细胞的良好示踪剂。; 马俐君杨建民周虹胡晓霞王健民; 关键词：骨髓间充质干细胞增强型绿色荧光蛋白逆转录病毒载体

HLA三维结构匹配预测脐带血移植后急性GVHD被引量：1: 2004年; 为探讨一种有效预测脐带血移植后急性移植物抗宿主疾病 (aGVHD)的方法 ,采用分子模拟技术对 2 5对已接受非亲缘脐带血移植并成功植入的血液病患者及其供者HLA A ,B ,DRB1分子的三维结构进行了模拟 ,并通过计算供受者不匹配的HLA分子间均方根差 (RMSD)及各差异位点的总RMSD ,将供受者之间不匹配HLA分子的结构差异转化为数字 ,根据量化差异分析预测非亲缘脐带血移植后aGVHD的发生和程度。 2 5名患者分为 3组 :第 1组为不发生aGVHD组 ,第 2组为aGVHDⅠ -Ⅱ组 ,第 3组为aGVHDⅢ -Ⅳ组。结果表明 :第 1组 8例 ,第 2组 13例 ,第 3组 4例。 3组供受者总RMSD值±标准差分别为 :0 .2 4± 0 .15 ,0 .2 5± 0 .14和 0 .4 7± 0 .2 2。第 3组的总RMSD值明显高于第 1和第 2组 (P <0 .0 5 )。结论 :采用HLA分子三维结构模拟匹配的方法 ,可以快速、简捷、准确地预测非亲缘脐带血移植后严重的aGVHD发生 ,为临床医生选择最佳脐血供者和避免严重的aGVHD的发生提供了理论依据 ,并对移植后免疫抑制药物的应用具有重要的指导意义。; 旭日阎文瑛姜夕峰谢松梅朱娜孔繁华裴雪涛; 关键词：HLA 脐带血移植急性GVHD 人类白细胞抗原

人伴肌动蛋白相关锚定蛋白基因cDNA的克隆与功能分析被引量：3: 2003年; 小鼠伴肌动蛋白相关锚定蛋白 (N RAP)是已知的与肌纤维生成有关的细胞骨架蛋白 ,但是 ,与此对应的人类N RAP基因的cDNA序列及其功能一直是未知的 .为了明确N RAP基因在人类中所起的作用 ,利用生物信息学分析工具和分子生物学技术 ,成功地克隆了人N RAP基因 .人N RAP基因cDNA序列含有一个 5 0 88bp的开放读码框 ,与小鼠N RAP基因有 86 %的相似性 .染色体定位分析表明 ,人N RAP基因定位于 10 q2 5～q2 6之间 ,编码区由 4 1个外显子组成 ,与HABP2和CASP7紧密连锁 .电子表达谱分析表明 ,肌肉、心脏、脑、脊髓和前列腺有人N RAP基因不同长度的cDNA序列 .人N RAP与小鼠N RAP蛋白质序列有 88%的相似性 ,与人Nebulin有约 6 3%的相似性 ,与小鼠Nebulin有约 5 9%的相似性 .结构域分析发现 ,N端为LIM结构域 ,从第170位氨基酸开始 ,连续出现 4 0个Nebulin相关重复序列 .RT PCR实验表明 ,人N RAP基因在成人脑、骨骼肌和心脏组织中都有表达 ,在骨髓中不表达 .亚细胞定位研究显示 ,人N RAP基因表达于胞浆 .基于序列相似性、结构域分析、表达谱分析和亚细胞定位研究 ,可以推测人N RAP与小鼠N RAP同属Nebulin家族。; 袁红丰王冬梅李海民陈琳王晓白慈贤岳文裴雪涛; 关键词：CDNA 克隆生物信息学 LIM蛋白细胞骨架蛋白

国家高技术研究发展计划(2002AA205051)

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