云南省自然科学基金(2005C0002R)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 相关作者：苏恒刘丽娟薛元明合湫严新民更多>>
- 相关机构：云南省第一人民医院昆明医学院昆明医科大学更多>>
- 发文基金：云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目云南省自然科学基金更多>>
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- 简便快捷的小鼠胰岛分离纯化方法研究
- 2012年
- 目的探讨小鼠胰岛分离与纯化的方法.方法采用多点注射灌注胶原酶法消化胰腺,不连续密度梯度离心联合人工挑取的方法分离、纯化胰岛.双硫腙特异性染色后计算胰岛产量及纯度.葡萄糖刺激后测定培养上清液胰岛素水平检测胰岛功能.结果 (1)每只小鼠采用上述分离、纯化法平均得到(114±15)个胰岛,平均纯度为(77.12±3.23)%,胰岛细胞存活率>90%;(2)分离、纯化的胰岛培养上清液中胰岛素水平在无糖、低糖(2.8 mmol/L)和高糖(22.2 mmol/L)刺激下分别为(23.80±3.52)mIU/L、(67.57±4.04)mIU/L和(164.32±10.75)mIU/L,各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).两两比较,低糖组的胰岛素水平为无糖组的2.84倍(P<0.05),高糖组的胰岛素水平为低糖组的2.43倍(P<0.05),高糖组的胰岛素水平为无糖组的6.90倍(P<0.05).结论采用多点注射灌注胶原酶法消化胰腺,不连续密度梯度离心联合人工挑取的方法分离、纯化的小鼠胰岛产量及纯度较高,形态完整,不同浓度葡萄糖刺激后胰岛素分泌反应良好,是一种简便、快捷的小鼠胰岛分离方法.
- 合湫苏恒李超沈涛严新民薛元明
- 关键词：多点注射分离纯化
- 白细胞介素1β和干扰素γ对小鼠胰岛素瘤βTC-6细胞胰岛素分泌功能的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨炎性细胞因子白细胞介素1β（IL-1β）、干扰素γ（IFN-γ）对小鼠胰岛β细胞株βTC-6胰岛素分泌功能的影响。方法将βTC-6细胞培养于高糖DMEM培养基，48h后换用无糖KRBH缓冲液培养30min，分别于含0、1．38、5．50和11．10mmol／L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60min，放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素水平（GSIS）。在BTC-6细胞中分别加入不同浓度的IL-1β（0．15、1．50μg／L）和（或）IFN-γ（10、100U／m1），24h后换用无糖KRBH缓冲液培养30min，在含1．38mmol／L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60min，放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素水平。多组间数据比较采用单因素方差分析，两组间数据比较采用t检验。结果βTC-6细胞在1．38mmol／L葡萄糖刺激时胰岛素分泌达高峰，与无葡萄糖刺激时相比差异有统计学意义[（151±14）对（120±4）mU／L，t=-4．215，P=0．006]；5．50、11．10mmol／L葡萄糖刺激时胰岛素分泌较1．38mmol／L葡萄糖刺激时明显下降（均P〈0．05）。与单纯1．38mmol／L葡萄糖刺激组相比，IL-1β（0．15μg／L）组[（85．53±5．06）mU／L对（103．11±0．27）mU／L，t=4．897，P=0．039]、IL-1β（1．50μg／L）组[（62．62±0．64）mU／L对（103．11±0．27）mU／L，t=212．66，P〈0．001]葡萄糖刺激下胰岛素分泌水平显著下降，下降程度与IL-1β的剂量呈正相关；与单纯葡萄糖刺激组相比，IFN-γ（100U／m1）组葡萄糖刺激下胰岛素分泌显著下降[（73．2±1．6）对（105．2±1．8）mU／L，t=19．52，P：0．003]；与IL-1β（0．15μg／L）组及IFN-γ（100U／m1）组相比，IL-1β联合IFN-γ组葡萄糖刺激下胰岛素分泌显著下降（F=77．38，P〈0．001）。结论IL-1β和IFN-γ对13TC-6细胞的胰岛素分泌功能有抑制作用，且两者间具有协同效应。
- 苏恒刘丽娟徐艳严新明薛元明
- 关键词：胰岛素白细胞介素1Β干扰素Γ小鼠
- 丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与胰岛β细胞凋亡的关系
- 2011年
- 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路是真核细胞转导细胞外信号到细胞内的四大信号系统之一,包括细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基末端激酶、p38MAPK和细胞外信号调节蛋白激酶5通路,参与了细胞增殖、分化、转化及凋亡.胰岛β细胞凋亡在糖尿病的病理生理机制中发挥重要作用,多种细胞因子及应激刺激都可通过一条或多条MAPK信号转导通路诱导胰岛β细胞凋亡.探索MAPK信号转导通路在胰岛β细胞凋亡中的作用,可为预防和治疗糖尿病提供新的理论基础.
- 刘丽娟苏恒
- 关键词：丝裂原活化蛋白激酶胰岛Β细胞细胞凋亡糖尿病
- 细胞外调节蛋白激酶1/2在小鼠胰岛瘤βTC-6细胞胰岛素分泌功能中的作用探讨被引量：2
- 2015年
- 目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2信号转导通路在βTC-6细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)反应中的作用。方法采用不同浓度葡萄糖刺激βTC-6细胞,放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素浓度,Western blot检测细胞裂解物ERK1/2磷酸化水平。采用MEK抑制剂PD98059处理βTC-6细胞,放射免疫法检测葡萄糖刺激后上清液中胰岛素浓度,Western blot检测葡萄糖刺激后ERK1/2磷酸化水平。结果βTC-6细胞在1.38mmol/L葡萄糖刺激时,胰岛素分泌和ERK1/2磷酸化水平达高峰。PD98059可抑制葡萄糖刺激下ERK1/2磷酸化及胰岛素分泌,作用与剂量呈正相关。结论ERK1/2信号转导通路可能在βTC-6细胞GSIS中发挥作用。
- 刘丽娟合湫合湫苏恒薛元明
