国家自然科学基金(30973348)
- 作品数：11 被引量：30H指数：4
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- 生长因子在脂肪组织工程血管化中的研究被引量：2
- 2010年
- 组织工程利用种子细胞和支架材料构建新的组织和器官以达到修复缺损组织的目的,工程化组织存活的关键是尽快实现血管化。目前主要有2种方法来建立血管化的脂肪组织:一种是利用直接和(或)间接促进血管生成的生长因子来刺激内源性血管生成反应,另一种是在体内外建立支架结构来模拟缺损组织或器官的血管网结构,从而尽早为工程化组织提供充分的血供。本文就促血管生长因子及其血管化构建方法在脂肪组织工程血管化中的应用作一综述。
- 孔子任杨晓娟田卫东
- 关键词：血管化脂肪组织工程
- 富血小板血浆对颗粒脂肪移植的影响被引量：10
- 2013年
- 背景:较高的远期吸收率极大地影响了脂肪移植在临床的广泛应用。富血小板血浆中含有丰富的促进组织修复与再生的生长因子。目的:观察富血小板血浆对颗粒脂肪移植效果的影响,并初步探索其作用机制。方法:将10只6周龄的裸鼠随机选择左侧或右侧背部皮下组织作为富血小板血浆组(0.5mL人颗粒脂肪+0.1mL富血小板血浆)受区,另外一侧作为对照组(0.5mL人颗粒脂肪+0.1mL磷酸盐缓冲液)受区。于植入后10,90d各选择5只裸鼠,处死后取出移植物进行大体形态观察、体积测定及组织学检测。此外,体外实验中,从人离体脂肪组织中分离培养脂肪干细胞,分别通过Cell Counting Kit-8和Real Time-PCR检测富血小板血浆对脂肪干细胞体外增殖和成脂分化的影响。结果与结论:比较植入后10,90d所得的移植物发现,富血小板血浆组存活体积明显多于对照组(P<0.05),组织学上也含有更多的正常脂肪细胞(P<0.05)及微血管数目(P<0.05)。体外实验中,富血小板血浆显著促进了脂肪干细胞的增殖,同时在其诱导的脂肪干细胞中检测到成脂分化相关基因表达升高。说明富血小板血浆能够提高脂肪移植的成活,这可能与富血小板血浆促进脂肪干细胞的增殖及成脂分化以及促进移植脂肪组织的血管化密切相关。
- 李锋李昆李杰田卫东
- 关键词：细胞移植富血小板血浆脂肪干细胞血管新生成脂分化
- 脂肪组织血管基质成分在组织工程化脂肪构建中的应用被引量：5
- 2016年
- 脂肪组织血管基质成分(SVF)中含有脂肪干细胞并可提供一定的生长因子,在脂肪组织工程化构建领域相对于单独应用脂肪干细胞更具明显优势,近年来得到了广泛的应用。本文就SVF的组成和优势,SVF的具体提取方法和影响因素,SVF用于构建组织工程化脂肪中支架材料的选择,SVF包含的构建组织工程化脂肪的生长因子和将SVF用于构建组织工程化脂肪时应考虑到局部微环境的作用,SVF复合脂肪组织构建组织工程化脂肪,SVF复合富血小板血浆或富血小板血纤蛋白构建组织工程化脂肪的方法,以SVF构建组织工程化脂肪存在的问题等作一综述,旨在帮助临床构建出可用于治疗的存活率高并发症少的组织工程化脂肪,以推动整形外科的发展。
- 黄皎于湄田卫东
- 关键词：脂肪干细胞脂肪移植
- 脂肪分泌物对脂肪间充质干细胞的诱导研究被引量：2
- 2012年
- 目的研究脂肪分泌物对脂肪间充质干细胞(ADSCs)的诱导作用,探讨脂肪再生机制。方法利用组织块贴壁法和细胞流式技术分离、鉴定ADSCs,收集含有脂肪分泌物的培养基(CM)作为条件培养基并用来诱导ADSCs(CM诱导组),化学培养基诱导组作为阳性对照组,用普通培养基组作为空白对照组,通过细胞形态学观察脂滴的形成和Real-time PCR技术在基因水平上对其可靠性进行体外验证。用可溶性明胶海绵作为ADSCs的支架来研究脂肪分泌物在体内对ADSCs的诱导作用,并作HE切片观察。结果流式细胞术证实所培养的细胞为ADSCs。在体外实验中,CM诱导4d时,CM诱导组中的ADSCs胞浆内出现了明显的脂滴,Real-time PCR显示,与空白对照组比较,相关的成脂基因mRNA表达量也明显增加(P<0.05);体内实验HE染色结果可以观察到CM诱导组中有明显的血管化生成。结论脂肪组织分泌物中可能含有能诱导ADSCs分化形成成熟脂肪细胞以及血管化的目标因子。
- 廖菊容李杰黄科李锋李昆郭维华于湄郭聪田卫东
- 关键词：脂肪干细胞分泌蛋白明胶海绵成熟脂肪细胞
- 大鼠β-catenin miRNA表达载体的构建及在脂肪干细胞中沉默效果的检测
- 2014年
- 目的构建具有沉默大鼠脂肪干细胞β-catenin表达的miRNA(miR)表达载体。方法通过酶切法将合成的miR表达载体寡聚核苷酸引物与质粒pSWH相连,形成pSWH-miR;PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)开放阅读框,插入经双酶切处理的pSWH-miR形成pSWH-EGFP-miR。β-catenin miR表达质粒瞬时转染SD大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells derived from rats,rADSCs),72h后提取细胞全蛋白,Western blot检测β-catenin的表达情况。结果针对大鼠β-catenin的不同位点,一共构建了5个miRNA表达载体(miR-780、miR-796、miR-1467、miR-1948、miR-1960),其中miR-780、miR-796对β-catenin沉默效果最好(P<0.05),miR-1960的沉默效果次之(P<0.05),miR-1467、miR-1948不具有沉默效果(P<0.05)。结论 miR-780、miR-796能够有效沉默SD大鼠脂肪干细胞中β-catenin的表达。
- 黄海森刘爽于湄罗小昕郭维华田卫东
- 关键词：脂肪干细胞Β-CATENINMIRNA
- 脂肪干细胞复合富血小板血浆对脂肪颗粒移植的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨运用组织工程技术构建的组织工程脂肪对颗粒脂肪移植的影响。方法通过酶消化法获取脂肪干细胞(ASCs),采用两步离心法制备富血小板血浆(PRP),运用组织工程技术构建组织工程脂肪。根据移植物的组成不同分为ASCs+PRP+脂肪颗粒、PRP+脂肪颗粒、ASCs+脂肪颗粒及对照组(PBS+脂肪颗粒),分别移植入裸鼠皮下,并于移植后10d、30d、60d及90d取出移植物,进行大体观察及体积测量,镜下观察组织结构变化。结果 90d后ASCs+PRP+脂肪颗粒组移植物质地柔软、颜色淡黄,较其它组别更接近于正常的脂肪组织,且具有更多的存活体积(P<0.05)及更好的组织学形态。结论运用ASCs与PRP复合脂肪颗粒能够成功构建组织工程脂肪,是一种新的安全有效的修复颌面部及全身软组织缺损方法,具有较高的应用前景。
- 李昆李锋郭丽娟李杰黄科郭维华田卫东
- 关键词：脂肪移植富血小板血浆脂肪干细胞
- 小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达
- 2010年
- 目的构建小鼠增强型绿色荧光蛋白(EGFP)-过氧化物酶体增长因子活化受体(PPAR)γ2基因的腺病毒重组体,并检测其在感染病毒的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达。方法从pcDNAflagPPARγ质粒上切取目的片段PPARγ2,克隆入pEGFP-C1和pEGFP-N1,以pEGFP-C1-PPARγ2为模板通过PCR技术获得EGFP-PPARγ2基因,酶切DC315质粒,获得DC315-EGFP-PPARγ2质粒,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP-PPARγ2,酶切鉴定证实构建成功。转染HEK293细胞并检测其体外表达情况,经HEK293细胞扩增后,测定病毒滴度,转染小鼠BMSC,72h后鉴定其成脂分化情况。结果将pEGFP-C1-PPARγ2和pEGFP-N1-PPARγ2通过脂质体转染入HEK293细胞后,在倒置相差显微镜下观察,前者在细胞核内有较强的绿色荧光,后者的荧光强度则极低。对重组腺病毒进行酶切和PCR鉴定,证实含小鼠EGFP-PPARγ2的Ad5腺病毒载体构建成功。在倒置相差显微镜下观察到BMSC细胞核内有绿色荧光。结论成功构建含小鼠EGFP-PPARγ2的重组Ad5腺病毒载体,为基因辅助的脂肪组织工程技术、抗肿瘤研究等提供了安全有效的转基因载体。
- 廖丽姿肖金刚杨苗苗孔子任孙钦策田卫东
- 关键词：重组腺病毒骨髓间充质干细胞
- 脂肪组织分泌物中蛋白浓度对诱导脂肪干细胞成脂的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察胎牛血清(FBS)对体外培养获取的脂肪组织分泌物(ATE)诱导大鼠脂肪干细胞(ADSCs)成脂能力有无影响,并探讨ATE中不同蛋白浓度对诱导大鼠ADSCs成脂、细胞增殖和迁移能力的影响。方法培养大鼠ADSCs并传代,对ADSCs成骨和成神经诱导,采用茜素红染色和神经丝蛋白(NF)免疫荧光检测鉴定。含有FBS和无FBS的培养基对脂肪组织块进行培养并收集ATE,对第4代ADSCs进行诱导,第7d时油红染色鉴定并计算成脂率;收集无FBS培养基获取的ATE,分为不同蛋白质量浓度组(100μg/mL、250μg/mL、500μg/mL组),对第4代ADSCs进行成脂诱导,观察各组成脂率;并观察不同蛋白质量浓度组对ADSCs细胞增殖和迁移的影响。结果培养的ADSCs成骨和成神经诱导后茜素红染色和NF免疫荧光染色阳性;获取ATE时添加或不添加FBS,在第3d时均能诱导ADSCs成脂,第7d时的成脂率差异无统计学意义;ATE 500μg/mL组较100μg/mL、250μg/mL组成脂率高(P均<0.05),细胞培养2d后,3个不同蛋白质量浓度组均抑制细胞增殖,不同蛋白质量浓度间细胞抑制率差异无统计学意义(P均>0.05);ATE中不同蛋白质量浓度对细胞的迁移无影响。结论无FBS的培养基获取的ATE,短期内对ADSCs成脂能力没有影响;ATE蛋白浓度与ADSCs成脂率有关。
- 李婷李勇田卫东郭维华于湄李晓东
- 关键词：脂肪干细胞
- 外源性NO对脂肪干细胞成软骨分化的影响被引量：4
- 2015年
- 目的通过观察不同浓度外源性一氧化氮(nitric oxide,NO)供体硝普钠(SNP)对脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖状况及相关基因表达的影响,探讨外源性NO在ADSCs成软骨分化中的作用。方法获取并培养ADSCs,分别进行成骨和成脂诱导,采用茜素红染色和油红O染色进行多向分化鉴定。NO检测试剂盒检测ADSCs成软骨分化过程中NO的变化;采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测不同浓度SNP(0.25mmol/L、1.00mmol/L、4.00mmol/L)下ADSCs的增殖情况。以Real time-PCR(RT-PCR)方法检测ADSCs在不同浓度SNP下,表达转化生长因子-β1(TGF-β1)以及成软骨分化特异基因——信号传导蛋白Smad3、Ⅱ胶原蛋白(Col-Ⅱα1)基因的变化。结果培养的细胞经成骨和成脂诱导后茜素红染色和油红O染色呈阳性;ADSCs成软骨分化过程中,培养上清液中NO浓度始终比对照组高(P<0.05);与对照组相比,低浓度SNP(0.25mmol/L、1.00mmol/L)对ADSCs的增殖无明显影响(P>0.05),高浓度SNP(4.00mmol/L)抑制ADSCs增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现SNP能抑制ADSCs自身TGF-β1mRNA的表达,同时抑制Smad3mRNA和Col-Ⅱα1mRNA的表达。结论在ADSCs成软骨分化过程中,外源性NO可以通过抑制ADSCs自身产生TGF-β1,并且抑制TGF-β下游信号通路,从而抑制成软骨分化。
- 刘爽黄海森于湄罗小昕郭维华田卫东
- 关键词：外源性一氧化氮脂肪干细胞成软骨分化TGF-Β1
- 悬浮法与贴壁法提取脂肪组织分泌促成脂因子比较被引量：1
- 2015年
- 目的 优化体外获取脂肪组织浸提液的提取方法,比较不同方法提取浸提液的成脂作用。方法 通过贴壁法和悬浮法培养脂肪组织获得浸提液,过滤、冷冻超离心浓缩浸提液,通过BCA试剂盒检测两种方式得到的浸提液分泌因子（secretory factors from adipose tissue explants,SFAE）蛋白总量及蛋白因子得率。等量蛋白成脂诱导第3代（P3）脂肪干细胞,诱导第7~13d,显微镜下观察及进行油红染色,鉴定成脂情况。结果 贴壁法和悬浮法4次提取浸提液中蛋白含量的差异无统计学意义。但悬浮培养法4次重复实验蛋白因子得率更为稳定,贴壁法每次蛋白因子得率数据相差很大,每克脂肪组织获得分泌蛋白的量最小时为7.3mg,最大可得到12.4mg,而悬浮得到的蛋白因子几乎都趋近于8.7mg。并且贴壁培养法与悬浮培养法相比,获取等量的SFAE需要T75培养瓶更多（10个）,且需手工铺匀,贴壁后才能加入培养基,而悬浮培养法仅需悬浮培养瓶1个,加入脂肪组织后即可进行培养。两种方法得到的浸提液都具有促成脂效果,在等量蛋白诱导下的成脂效果差异无统计学意义。结论悬浮和贴壁培养法得到的浸提液具有相同的促成脂能力,但是悬浮培养获得的浸提液更加省时省力且蛋白因子得率稳定,为后续研究和鉴定在SFAE中准确找到成脂因子奠定基础。
- 赵学勇张岩于湄田卫东
- 关键词：脂肪组织
