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国家自然科学基金(30973387)
作品数:
3
被引量:11
H指数:2
相关作者:
曲春枫
杜君
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刘立国
王黎明
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中国医学科学院肿瘤医院
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广州医科大学
作者
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曲春枫
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王黎明
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刘立国
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吴志远
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魏勇
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杜君
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表达乙型肝炎病毒抗原的种植性肝脏肿瘤动物模型的建立
2012年
目的构建持续稳定表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原的肿瘤细胞,建立持续表达HBV抗原的种植性肝脏肿瘤动物模型。方法以含有2倍体HBV的逆转录病毒载体质粒转染黑色素瘤细胞系B16,获得稳定表达HBV表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)的B16细胞(B16/HBV),分别按每只小鼠100、1000和5000个细胞接种到具有相同遗传背景的C57BL/6J小鼠肝脏被膜下,每组5只小鼠。注射后每周采血,进行血清HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗HBs)检测。采用小鼠腹部超声观测其成瘤情况,计算存活时间。对死亡小鼠肝脏进行病理分析,并检测肿瘤组织中HBsAg和HBcAg的表达。结果转染HBV病毒的肿瘤细胞B16/HBV传代20次以上后,细胞上清中有持续稳定的分泌型HBsAg表达,2×10^4个细胞在24h内的HBsAg表达量可达到110ng,并随时间延长而逐渐累积。未能检测到细胞上清中有HBeAg的表达。免疫组化结果显示,转染细胞中存在稳定的HBcAg表达,主要分布在细胞核中。每只小鼠注射100个B16/HBV细胞,小鼠肝脏成瘤率为80.0%;注射1000和5000个B16/HBV细胞,成瘤率为100%。注射后第4周,注射1000个B16/HBV细胞小鼠的腹部超声检测结果提示,肝脏内有异常回声,不均质回声面积为62.18min2。剖腹检查显示,在肝脏中所形成的肿瘤大体呈圆形,血运丰富,瘤组织质软,并有多个转移灶。在成瘤小鼠血清中,可检测到持续表达的HBsAg和抗HBs;所形成的肿瘤组织细胞中有均匀一致的HBsAg和HBcAg表达。结论HBV逆转录病毒载体质粒转染的B16/HBV细胞可稳定表达HBsAg和HBcAg。通过在肝脏被膜下注射B16/HBV细胞,建立了能持续分泌表达HBV抗原的种植性肝脏肿瘤小鼠模型。
汪颖
吴志远
任书荣
魏勇
张昆
曲春枫
关键词:
肝脏肿瘤
肿瘤种植
动物
肝炎
乙型
慢性乙肝病毒感染者进展为肝癌病程中血清循环免疫复合物的含量变化和意义
被引量:2
2011年
目的探讨人外周血清循环免疫复合物(CIC)的含量变化与肝癌发生的关系。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测20例临床病理确诊的肝癌和13例肝血管瘤患者术前血清中CIC的含量。采用ELISA法检测45例慢性乙肝病毒(HBV)感染最终进展为肝癌者以及与之匹配的45例慢性HBV感染未进展为肝癌者入组时、随访过程中和随访结束时血清中CIC和抗肝肾微粒体抗体(抗LKM-1)的含量,采用荧光定量PCR法检测这些患者入组时、随访过程中和随访结束时血清HBV—DNA的含量。结果20例临床手术后病理确诊的肝癌患者术前血清中CIC的含量为(5738±1485)mU/L,显著高于13例肝血管瘤患者[(2410±1080)mU/L;P〈0.001]。45例经过长期随访最终进展为肝癌的慢性HBV感染者血清CIC的含量随病程进展而逐渐升高,在肝癌临床诊断时达到最高,与其人组时相比,差异有统计学意义(P〈0.001);而对照组患者血清CIC的含量未见明显变化(P=0.118)。随访过程中,血清CIC的升高与肝癌累积发病率密切相关(HR=2.77,95%CI为1.47~5.22)。最终进展为肝癌的慢性HBV感染者在入组时、随访进程中和临床确诊为肝癌时的血清抗LKM-1和HBV-DNA含量均显著高于与之相匹配的对照组,并维持在较高水平。最终进展为肝癌的慢性HBV感染者血清CIC的含量与HBV-DNA的含量之间仅在肝癌临床诊断时存在相关性(r=0.344,P=0.026)。结论在慢性HBV感染进程中,血清CIC含量的逐渐升高可能是由慢性HBV感染进展为肝癌的重要转归指标之一。
杜君
田萍
陈陶阳
吴健雄
王金兵
魏勇
王黎明
刘立国
季万盛
曲春枫
关键词:
循环免疫复合物
肝肿瘤
乙型肝炎病毒
CCL20-CCR6-Th17轴与肝细胞癌血管浸润转移的关系
被引量:9
2015年
目的探讨CCL20-CCR6-Th17轴在肝细胞癌血管浸润转移中的作用。方法采用SYBRGreen实时定量PCR测定人肝细胞系L-02、肝细胞癌细胞系Hep3B、Huh7和HepG2中CCL20mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中CCL20蛋白的分泌,Transwell迁移实验检测肝细胞癌细胞系对人外周血单个核细胞的趋化作用。采用ELISA定量检测93例肝细胞癌患者(转移组51例,无转移组42例)术前外周血中白细胞介素10L(IL-1α)、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-23、γ-干扰素、肿瘤坏死因子α和CCL20的水平,采用SYBRGreenRT—PCR检测41例肝细胞癌癌组织及其相应的癌旁组织中CCL20和CCR6的表达水平,免疫组织化学染色检测肝细胞癌及其对应的癌旁组织和正常人供肝组织中CCL20的表达水平。结果人肝细胞癌细胞系中CCL20的表达水平高于正常肝细胞,对外周血表达CCR6的T细胞具有趋化作用。93例肝细胞癌患者血清中CCL20蛋白的表达水平为(38.2±28.4)pg/ml,高于肝血管瘤患者[(7.8±17.8)pg/ml,P〈0.01]。肝细胞癌患者血清中CCL20蛋白的表达水平与肿瘤直径呈正相关(r=0.32,P=0.0018)。41例肝细胞癌组织CCL20mRNA的表达水平高于癌旁组织(P〈0.05),CCL20蛋白主要在肝细胞癌细胞质中表达,某些浸润的免疫细胞也有一定程度表达。多因素分析结果显示,血清中IL-17和CCL20水平是影响肝细胞癌患者发生血管浸润转移的独立影响因素(均P〈0.05)。41例肝细胞癌患者癌组织及对应的癌旁组织中CCL20mRNA的表达水平与肝细胞癌发生血管浸润转移均无关(均P〉0.05)。在发生血管浸润转移患者的癌组织及其对应的癌旁组织中CCR6mRNA的表达水平分别为5.75(1.79,19.13)和7.99(4.49,19.54),均高于未发生血管浸润转移的患者[分别为1.69(0.76,2.87)和3.58(1.84,4.32)],差异均有�
畅秀丽
王黎明
臧梦雅
荣维淇
吴志远
刘立国
杜君
刘金宝
吴健雄
曲春枫
关键词:
肿瘤侵润
CCR6
TH17细胞
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