“十五”国家科技攻关计划(2004BA719A04)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：李金明黄杰王露楠邓巍王忠芳更多>>
- 相关机构：北京医院更多>>
- 发文基金：首都医学发展科研基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用MS2噬菌体包膜蛋白与RNA的特异性相互作用构建临床检测用病毒样颗粒被引量：2
- 2007年
- MS2噬菌体是单链正链RNA病毒，为26nm长的20面体，共有3569个核苷酸，包含有3个基因，编码成熟酶蛋白、包膜蛋白、复制酶蛋白和裂解蛋白等4种蛋白质分子。噬菌体由180个包膜蛋白单体、一分子成熟酶蛋白和一分子基因组RNA组成。在MS2噬菌体包膜蛋白的研究中发现包膜蛋白与噬菌体复制酶5’端由19个碱基（19mer）组成的茎环结构RNA序列有特异性相互作用，这种作用可引发噬菌体外壳的组装，同时，将噬菌体基因组RNA包装到包膜内。国外研究人员发现在包装位点后引入非噬菌体基因序列也可以引发包装。本研究拟利用MS2包膜蛋白与RNA的相互作用来观察RNA序列对包装的影响以及基于两者相互作用构建病毒样颗粒在临床分子检测中的应用。
- 黄杰王忠芳杨昌梅李金明
- 关键词：MS2噬菌体正链RNA病毒包膜蛋白病毒样颗粒相互作用
- 含内质控的新型检测HIV-1感染的双特异性探针实时荧光RT-PCR方法的建立被引量：5
- 2007年
- 目的以包含内标 RNA 的病毒样颗粒作为内质控,建立一种新型的检测 HIV-1感染的包含双特异探针实时荧光 RT-PCR 方法(Dual-specificity probe real-time reverse transcriptase-PCR,DSPrtRT-PCR),提高HIV-1RNA 的检出率。方法采用针对 HIV-1基因组保守区域内两个不同区域的两条不同的荧光探针和两组引物,建立检测 HIV-1RNA 的实时荧光 RT-PCR 方法,并构建了内含HIV-1内标 RNA 的病毒样颗粒,将其作为本方法的内部假阴性质控,考察了所建立方法的检测灵敏度和特异性。比较了单探针和双探针检测方法在 HIV-1亚型检测能力、检测灵敏度和临床样本的检测适用性。结果所建立方法的灵敏度为125 U/ml;在检测 HIV-1阴性样本时具有100%的特异性。和单探针方法比较,双特异探针方法在HIV-1亚型检测中能检测到M族的所有亚型以及 O 族;检测灵敏度和单探针方法比较无统计学意义;在对60份临床样本的检测中,单探针方法只能检出39份,而双探针方法能检出50份(10份检测阴性的样本用 COBAS 检测证明为阴性)。结论本研究建立的 HIV-1 RNA 的 DSPrtRT-PCR 具有很高的检测灵敏度以及 HIV-1多亚型的检测能力。在对临床样本的检测中证明具有很好的临床适用性。
- 黄杰李金明王露楠邓巍
- 关键词：HIV-1核酸探针
