湖南省卫生厅资助项目(B2005084)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：万艳平蔡恒玲李金丽蒋永林尹卫国更多>>
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- 发文基金：湖南省卫生厅资助项目湖南省自然科学基金更多>>
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- 乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因的真核表达载体,为探讨HBV X基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系提供实验依据。方法用PCR方法扩增含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列,对pcDNA3.1(+)载体及X基因PCR产物双酶切,用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HBV X基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx。用梭华-SofastTM基因转染试剂将其质粒转染THP-1巨噬细胞,细胞裂解液经SDS-PAGE及转硝酸纤维素膜后做Western blotting,鉴定目的蛋白。结果双酶切pcDNA3.1(+)-HBx后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为5.4 kb和465 bp片断,说明X亚克隆入pcDNA3.1(+),经序列测定其含有完整的X基因片段;Western blotting结果显示pcDNA3.1(+)-HBx能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx,并能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。
- 王静蒋永林李金丽蔡恒玲万艳平
- 关键词：X基因X蛋白真核表达
- 人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达载体pGADT7-E6的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建HPV16 E6基因的真核表达载体,为在酵母菌中表达以及进一步探讨HPV16E6基因与宫颈癌发生的关系奠定前期实验基础。方法用PCR扩增含EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的E6基因序列,双酶切pGADT7载体与E6基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶将二者连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建HPV16 E6基因的真核表达载体pGADT7-E6。结果双酶切pGADT7-E6后,琼脂糖凝胶电泳显示2个片段,分别在约500 bp与8.0 kb处。DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒含有477 bp的目的基因片段,读码框正确,无碱基错配和移码突变。结论成功构建了HPV16 E6基因真核表达载体pGADT7-E6。
- 周艺王鑫朱翠明蒋永林粟盛梅尹卫国万艳平
- 关键词：人乳头瘤病毒E6基因E6蛋白
- hDaxx即时高表达增强HBVX蛋白对HepG2凋亡的抑制作用被引量：1
- 2008年
- [目的]研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与hDaxx的相互作用及对HepG2细胞凋亡的影响。[方法]构建pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBx酵母表达载体,利用酵母双杂交系统检测HBx与hDaxx的相互作用。将HBV X基因转染HepG2细胞,建立稳定表达HBx的HepG2X细胞株;pcDNA3.1-hDaxx转染HepG2X,5-Fu诱导凋亡,流式细胞术检测凋亡。[结果]共转pG-BKT7-hDaxx和pGADT7-HBx酵母质粒的酵母菌能在SD/-Trp-Leu-His(三缺)和SD/-Trp-Leu-His-Ade(四缺)的平板上生长,且Western blot检测到hDaxx和HBx在同一株酵母菌中的表达;稳定转染HBV X基因的HepG2细胞组凋亡率明显低于HepG2细胞组(P<0.01);且转染pcD-NA3.1-hDaxx后,细胞凋亡率进一步降低,与pcDNA3.1-hDaxx没有剂量依赖关系。[结论]HBx与hDaxx在酵母细胞内存在相互作用;hDaxx的即时高表达可增强HBx对5-Fu诱导的HepG2凋亡作用,HBx可能通过与hDaxx相互作用而抑制HepG2凋亡。
- 李金丽万艳平朱翠明王鑫尹卫国蔡恒玲
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白HDAXX凋亡
