山东省科技攻关计划(2004GGB14112)
- 作品数：3 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
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- 新生大鼠视网膜神经元的原代培养与观察被引量：4
- 2006年
- 目的：建立新生大鼠视网膜神经元体外培养的有效方法。方法：取出生后1～3d的Wistar大鼠视网膜，胰蛋白酶＋依地酸（EDTA）消化制成单细胞悬液，接种于置有包被多聚赖氨酸（poly-L-lysine）玻片的24孔培养板中培养，利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察；并以免疫细胞化学技术对视网膜神经元进行染色。结果：在多聚赖氨酸上培养的视网膜神经元生长良好，部分细胞伸出突起，且有些突起相互连接。免疫细胞化学染色显示，培养的细胞大多数抗神经丝蛋白（NF）抗体反应阳性。胰蛋白酶＋EDTA联合消化能使视网膜细胞很好得分离，获得视网膜单细胞悬液。结论：酶消化法原代培养视网膜神经元有较好的视网膜神经元生长率；胰蛋白酶＋EDTA联合消化较单独用胰蛋白酶消化效果好。
- 刘夫玲牛膺筠王建波曲虹张蕾
- 关键词：视网膜神经元细胞培养神经丝蛋白
- 缺氧对视网膜Müller细胞促红细胞生成素mRNA和蛋白表达的影响被引量：4
- 2006年
- 目的探讨缺氧条件下促红细胞生成素(EPO)mRNA及蛋白在体外培养的Müller细胞的表达情况。方法胰酶消化新生大鼠视网膜组织制成单细胞悬液,机械震荡、吹打法分离纯化视网膜Müller细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学方法对缺氧条件下视网膜Müller细胞EPO基因和蛋白的表达进行测定。结果成功获得视网膜Müller细胞,传代后95%以上的细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性。EPO蛋白的阳性染色位于视网膜Müller细胞的细胞浆及突起上。在正常的视网膜Müller细胞中仅见微弱的EPO mRNA和蛋白表达,而缺氧后表达明显上调,且呈时间依赖性。结论Müller细胞在缺氧条件下EPO mRNA和蛋白表达增强,EPO表达水平的升高可能是缺氧性视网膜病变的神经保护因素之一。
- 刘夫玲牛膺筠周占宇王建波赵宝春张蕾
- 关键词：红细胞生成素细胞低氧逆转录聚合酶链反应
- 促红细胞生成素预处理对视网膜神经元缺氧性损伤的保护作用被引量：9
- 2007年
- 目的研究缺氧对培养大鼠视网膜神经元的影响及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)预处理的保护作用。方法取体外原代培养3d的大鼠视网膜神经元,利用1mmol.L-1的连二亚硫酸钠消除培养基中的氧合并培养基质缺糖持续6h,导致神经元缺氧性损伤。采用免疫组化染色技术检测了EPO受体在原代培养视网膜神经元的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放率作为评价损伤的指标,TUNEL染色检测视网膜神经元的凋亡,并进行形态学观察。结果原代培养的大鼠视网膜神经元正常下可见EPOR的弱阳性表达,表达部位定位于神经元的胞体和突起,缺氧后EPOR的表达明显增加;神经元LDH释放率和凋亡百分率增加;在损伤前加入浓度2.5～40kU.L-1的rhEPO均可有效抑制LDH释放(P<0.05)。TUNEL结果显示rhEPO预处理能抑制神经元的凋亡,明显改善细胞缺氧性损伤的形态学变化。结论EPO预处理对神经元的缺氧损伤具有保护作用,且具有浓度和时间依赖性。
- 刘夫玲牛膺筠王红云赵颖曲虹
- 关键词：缺氧视网膜细胞培养
