河南省科技攻关计划(2008A180020)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：张红玲张二辉姚伦广文祯中冯娟更多>>
- 相关机构：河南师范大学河南农业大学南阳师范学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 零背景转座技术高效构建重组家蚕杆状病毒表达系统被引量：2
- 2009年
- 【目的】获得零转座背景的基于家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)Bac-to-Bac系统,为高效经济构建重组BmNPV在家蚕体内表达目标蛋白提供新系统。【方法】利用R6Kγ作为复制子构建新的条件复制型杆状病毒转移载体pRADM,同时封闭BmNPV-Bacmid(Bm Bacmid)宿主菌(Escherichia coli BmDH10 Bac)的Tn7转座受体位点attTn7,获得新的封闭型宿主菌E.coli BmDH10 Bac△Tn7。【结果】由于pRADM无法在宿主菌E.coliBmDH10Bac中复制,封闭了attTn7位点的宿主菌也不能再和BmBacmid竞争与转移载体的重组,显著提高了转座效率。封闭宿主菌的attTn7位点,能使转座效率提高近4倍,使用条件复制型转座载体pRADM时,转座效率提高近10倍。而用pRADM转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7时,转座阳性率为100%。避免了获得重组病毒DNA的鉴定程序,缩短了获得重组蛋白所需时间。用携带红色荧光蛋白基因DsRed的重组质粒pRADM-Red转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7,获得重组BmBacmid转染BmN细胞,红色荧光蛋白在细胞中得到高效表达。【结论】结果表明pRADM和E.coli BmDH10 Bac△Tn7是一种零背景高效构建重组BmNPV的新系统。
- 姚伦广张红玲冯娟张二辉文祯中
