工业生物技术教育部重点实验室基金(KLIB-KF200505)
- 作品数：4 被引量：22H指数：2
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- 甾短杆菌胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中的表达被引量：13
- 2008年
- 为了实现胆固醇氧化酶在大肠杆菌中的表达,将甾短杆菌Brevibacteriumsp.DGCDC-82胆固醇氧化酶基因用PCR的方法去掉信号肽序列,连接到质粒pTrc99a,通过筛选得到了表达胆固醇氧化酶的重组菌JM109/pTrc99a-COD。经IPTG诱导后表达出相对分子质量约为5.5×104的蛋白质。分别考察了诱导温度、时间、IPTG浓度等因素对重组菌表达的胆固醇氧化酶的影响。在优化条件下,该胆固醇氧化酶的酶活可以达到700 U/L。酶学特性分析表明其反应的最适pH为7.5,最适温度为40℃。
- 张玲霍惠芝沈微杨海麟邬敏辰王武
- 关键词：BREVIBACTERIUM胆固醇氧化酶原核表达信号肽
- 信号肽对短杆菌胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中表达的影响被引量：2
- 2009年
- 从Brevibacterium sp.DGCDC-82染色体DNA中扩增出含信号肽序列的胆固醇氧化酶结构基因,插入大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-COD(s+)。以pET28a-COD(s+)为底物,扩增出不合信号肽的胆固醇氧化酶结构基因,构建成重组质粒pET28a-COD(s-)。两种重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)通过IPTG诱导均获得活性表达,SDS-PAGE分析,目的产物表达量都占到了细胞总蛋白的50%以上,Brevibacterium sp.DGCDC-82胆固醇氧化酶的信号肽对重组酶的空间构象和表达量并没有太大的影响。
- 张玲杨海麟王龙刚沈微邬敏辰王武
- 关键词：信号肽BREVIBACTERIUM胆固醇氧化酶原核表达
- 一种胆固醇氧化酶高产菌株筛选方法的建立被引量：1
- 2008年
- 用亚硝基胍(1mg/mL)与超声波(200W,50kHz)复合诱变的方法,对产胆固醇氧化酶短杆菌Brevibacterium sp.DGCDC-82进行诱变处理,得到一株桔红色突变株其产胆固醇氧化酶能力提高140%,酶活达到1.24U/mL,又用同样的方法对桔红色突变株进行回复突变处理,得到一株白色回复突变株和一株淡粉色回复突变株,两株回复突变株产胆固醇氧化酶的能力又明显下降,酶活分别为0.17U/mL和0.69U/mL。说明短杆菌Brevibacterium sp.产胆固醇氧化酶能力与其产红色素成正相关偶联关系,这种相关性模型的建立可以作为以后诱变或定向进化研究的筛子。
- 霍惠芝张玲孙艳杨海麟王武
- 关键词：红色素复合诱变回复突变
- 微生物胆固醇氧化酶的研究进展被引量：7
- 2009年
- 微生物来源的胆固醇氧化酶在医疗诊断、食品加工、生化制药、抗虫基因工程等方面具有良好的应用价值,引起了国内外学者的广泛关注,并开展了大量的研究工作。本文就胆固醇氧化酶的种类、酶学性质、结构、功能、应用及近年来基因工程等方面的研究进展作一综述。
- 张玲杨海麟孙燕霍惠芝王武
- 关键词：胆固醇氧化酶酶学性质基因工程
