国家自然科学基金(30873023)
- 作品数：11 被引量：44H指数：5
- 相关作者：周彩存鞠立霞唐亮况鹏严令华更多>>
- 相关机构：上海市肺科医院同济大学附属上海市肺科医院同济大学附属肺科医院更多>>
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- 人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的比较蛋白质组学研究被引量：3
- 2012年
- 目的:比较人肺癌细胞株A549和顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A549/DDP中的蛋白表达差异。方法:DDP诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP。应用蛋白质组学技术分离鉴定A549和A549/DDP细胞中差异表达的蛋白质,通过real-timePCR、蛋白质印迹法和免疫细胞化学法对部分差异蛋白进行验证;应用生物学信息检索分析差异蛋白的功能。结果:A549和A549/DDP细胞中有8个蛋白质点的表达差异>5倍,分别为POTE、FH(fumarate hydratase)、PDE(phosphodiesterase)、AKR1C1(aldo-keto reductase family1,memberC1)、DDH2(dihydrodiol dehydrogenase 2)、S100A10、prefoldin subunit2和核内转运蛋白,这些蛋白与细胞代谢、凋亡、增殖、解毒和信号转导等有关。Real-timePCR、蛋白质印迹法和免疫细胞化学法验证结果与蛋白质组学研究结果一致。结论:鉴定得到的A549和A549/DDP细胞中的差异蛋白为研究肺癌细胞DDP耐药提供新依据。
- 况鹏李雪飞李冰王永生李嘉瑜周彩存
- 关键词：蛋白质组学药物耐受性顺铂
- 整合素β1表达下调对非小细胞肺癌细胞迁移和黏附能力的影响被引量：5
- 2010年
- 目的:构建整合素β1基因特异的RNA干扰质粒,探讨抑制整合素β1蛋白表达对非小细胞肺癌(non-small cell lungcarcinoma,NSCLC)细胞生物学行为的影响。方法:根据GenBank数据库提供的整合素β1基因核苷酸序列,选择设计1条能转录短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,命名为17-2;同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为N。将设计序列与pUC19质粒载体连接,转化感受态大肠埃希菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒。2种重组质粒分别转染NSCLC耐药细胞株PC-9/AB2细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定转染株。荧光显微镜、实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测整合素β1 mRNA及蛋白表达水平。细胞划痕实验和黏附实验比较整合素β1对细胞迁移和黏附能力的影响。结果:G418筛选出稳定转染2种质粒的PC-9/AB2细胞,荧光显微镜下可见满视野带绿色荧光的细胞,转染17-2组细胞中整合素β1的mRNA及蛋白表达水平明显低于转染N组细胞及母细胞PC-9/AB2。划痕实验和黏附实验表明,整合素β1抑制可以使细胞迁移和黏附能力明显降低。结论:成功构建针对整合素β1基因的特异性shRNA真核表达载体,转染NSCLC细胞后可抑制整合素β1蛋白表达。整合素β1表达抑制后细胞迁移和黏附能力明显降低。
- 鞠立霞周彩存
- 关键词：整合素类细胞运动
- 多西他赛联合吉非替尼治疗晚期肺癌患者的临床研究被引量：5
- 2018年
- 目的探讨晚期肺癌患者应用多西他赛联合吉非替尼治疗的临床疗效及对患者生活质量的影响。方法选取在我院接受治疗的100例晚期肺癌患者,随机分成对照组和研究组。对照组患者采用吉非替尼单药治疗,研究组患者在对照组的基础上联合多西他赛治疗。观察两组患者的临床疗效、干预前后KPS和QOL评分、不良反应发生情况及CK-MB和射血分数变化。结果研究组临床疗效明显优于对照组(P<0.05);干预前,研究组KPS和QOL评分与对照组无明显差异(P>0.05);干预后,研究组KPS和QOL评分均明显优于对照组(P<0.05);研究组不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05);研究组CK-MB和射血分数变化明显高于对照组(P<0.05)。结论采用多西他赛联合吉非替尼治疗晚期肺癌,可显著改善患者的临床疗效、延长生存期,值得临床推广使用。
- 汪婷李宏王慧芳向贵盛盼
- 关键词：多西他赛吉非替尼晚期肺癌临床疗效
- 紫杉醇序贯吉非替尼对三维培养非小细胞肺癌细胞的抑制作用及其机制
- 2012年
- 目的:探讨序贯或联合吉非替尼(gefitinib,G)和紫杉醇(paclitaxel,P)对三维细胞模型中非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)的抑制作用及其机制。方法:采用超低黏附表面细胞培养板培养人NSCLC细胞株A427、Calu-3,使其形成三维细胞模型;分别采用磺酸罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)、Cell Titer-Blue法检测紫杉醇序贯吉非替尼(P-G)、吉非替尼序贯紫杉醇(G-P)及紫杉醇联合吉非替尼(P+G)处理对贴壁和三维培养细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测细胞中EGFR和Akt总蛋白及其磷酸化的水平。结果:单层细胞培养时,P-G、G-P和P+G处理后,A427细胞的存活率分别为(39.5±0.07)%、(57.7±0.03)%和(53.7±0.05)%,Calu-3细胞的存活率分别为(23.9±0.02)%、(58.2±0.05)%和(48.8±0.07)%,以P-G的抑制作用最强(P<0.05);三维细胞模型中,P-G、G-P和P+G处理后,A427细胞的存活率分别为(19.9±2.89)%、(43.2±8.64)%和(36.6±9.79)%,Calu-3细胞的存活率分别为(10.2±0.76)%、(50.0±3.45)%和(31.4±6.15)%,也以P-G的抑制作用最强(P<0.05);而且,P-G对这两细胞的抑制作用,三维培养细胞显著强于单层培养细胞(P<0.05)。P-G治疗可提高subG1期细胞比例,并诱导细胞阻滞在G1期;P-G治疗可明显下调三维培养细胞中磷酸化Akt和磷酸化EGFR的水平。结论:三维细胞模型中,P-G较P+G或G-P对NSCLC细胞的增殖有更强的抑制作用,可能与细胞周期阻滞和磷酸化Akt、EGFR水平下调有关。
- 鞠立霞周彩存
- 关键词：非小细胞肺癌紫杉醇吉非替尼
- 利用蛋白组学研究肿瘤耐药相关蛋白
- 2011年
- 肿瘤耐药是当前肿瘤治疗的主要障碍。近年来,包括药物外排增强、药物亚细胞水平分布改变、药物亲和力改变、细胞解毒和修复功能加强及肿瘤细胞抗凋亡能力增强等肿瘤耐药相关生物学机制的研究已取得很大进展,这些生物学机制共同构建成一个复杂的网络系统,详尽阐明这一多因子的网络能够更好地预测肿瘤患者对治疗的应答及制定肿瘤患者的个体化治疗。应用蛋白质组学技术已在肿瘤细胞系和组织中鉴定出大量新的耐药相关性因子和蛋白表达标记物。本文就比较蛋白质组学研究方法在不同肿瘤细胞中所发现的耐药相关蛋白及机制进行综述与分析。
- 况鹏李雪飞周彩存
- 关键词：肿瘤化疗耐药机制耐药相关蛋白蛋白组学
- 吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9／AB2相关耐药机制研究被引量：12
- 2010年
- 目的 探讨吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9/AB2的相关耐药机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞株PC9并采用N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱变和药物筛选建立吉非替尼获得性耐药细胞株PC9/AB2,四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测PC9和PC9/AB2细胞对吉非替尼的敏感性,流式细胞仪检测吉非替尼对PC9和PC9/AB2细胞凋亡的影响,抽提基因组DNA,对上皮细胞生长因子受体（EGFR）基因19～21外显子进行聚合酶链反应（PCR）扩增及测序,采用Western blot法检测PC9和PC9/AB2细胞中c-MET和整合素β1蛋白的表达水平.细胞黏附试验和细胞划痕试验检测PC9和PC9/AB2细胞的黏附及迁移能力.结果 （1）MTT和凋亡检测结果表明,PC9/AB2细胞株的半数致死浓度（IC50）为（24.2±5.5）μmol/L,野生型PC9细胞的IC50为（0.04±O.01）μmol/L,与PC9细胞相比,PC9/AB2细胞对吉非替尼的耐受性提高了576倍;在同等剂量的吉非替尼作用下,PC9细胞的凋亡率为38.5%,而PC9/AB2细胞的凋亡率为2.2%.（2）基因测序结果证明,PC9和PC9/AB2细胞均存在19外显子15 bp的碱基缺失,但未发生T790M突变.（3）Western blot检测结果显示,PC9和PC9/AB2细胞中的c-MET蛋白表达水平无明显差异,而整合素β1蛋白表达水平PC9/AB2细胞较PC9细胞升高了2.5倍.（4）细胞黏附试验和划痕实验结果表明,PC9/AB2细胞的黏附和迁移能力均明显高于PC9细胞.结论 整合素β1水平升高及其相关的肿瘤细胞黏附、迁移能力的提高可能与非小细胞肺癌PC9/AB2细胞株EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药相关.
- 鞠立霞周彩存唐亮赵印敏杨晓君粟波孟淑燕李玮严令华丁永梅
- 关键词：抗药性
- 整合素β_1信号通路参与非小细胞肺癌吉非替尼获得性耐药被引量：3
- 2012年
- 目的探讨整合素β1及其下游信号转导通路在非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用。方法以人肺腺癌细胞株PC-9和吉非替尼耐药株PC-9/G作为研究对象,免疫印迹分析检测整合素β1、Akt、磷酸化Akt蛋白的表达;用MTT法检测吉非替尼和(或)磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059对细胞增殖的影响;用AnnexinⅤ/PI试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。结果吉非替尼耐药株PC-9/G高表达整合素β1,RNA干扰抑制整合素β1表达能够抑制PC-9/G细胞的生长和促进凋亡。PC-9/G细胞中吉非替尼对Akt磷酸化的抑制作用弱于PC-9细胞,RNA干扰抑制整合素β1表达后Akt的磷酸化水平降低。ERK抑制剂PD98059不能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性,PI3K抑制剂LY294002能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性。结论整合素β1过表达可以通过PI3K途径激活下游信号分子,这可能是一种重要的EGFR-TKI耐药机制。
- 邓沁芳徐建芳粟波赵印敏周彩存
- 关键词：肿瘤抗药性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂整合素
- 整合素β1表达上调对肺癌细胞迁移和粘附能力的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:构建整合素β1的全基因表达载体,并探讨上调整合素β1蛋白表达对肺癌细胞生物学行为的影响。方法:根据GenBank数据库提供的整合素β1基因核苷酸序列,构建整合素β1的全基因表达载体,同时将空载体pCDNA3.1作为阴性对照。将载体转入感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组载体。2种重组载体转染非小细胞肺癌细胞株PC-9细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。荧光显微镜、Real-timeRT-PCR、Western blot检测整合素β1的基因及蛋白水平的表达情况。细胞划痕试验和粘附试验比较整合素β1对细胞迁移、粘附能力的影响。结果:G418筛选出稳定转染整合素β1全基因表达载体和空载体的细胞,分别命名为PC-9/D6和PC-9/PCD。荧光显微镜见满视野带绿色荧光的细胞,PC-9/D6细胞整合素β1的mRNA、蛋白表达明显高于对照的PC-9/PCD细胞及母细胞PC-9。划痕试验和粘附试验表明整合素β1过表达的细胞株的迁移和粘附能力明显提高。结论:成功转染并筛选出整合素β1过表达细胞株,整合素β1过表达的细胞株的迁移和粘附能力明显升高。
- 鞠立霞周彩存李伟严令华唐亮
- 关键词：整合素Β1过表达肺癌迁移粘附
- 人肺腺癌吉非替尼耐药细胞株中微小RNA的表达谱被引量：8
- 2012年
- 目的:分析人肺腺癌吉非替尼耐药细胞株PC9/AB2与亲本细胞株PC9中微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的差异。方法:应用Agilent human miRNA芯片分别检测PC9/AB2细胞与PC9细胞miRNA的表达谱,随后采用Agilent Feature Extraction软件分析并筛选差异表达的miRNA,应用生物信息软件预测筛选出的差异表达miRNA的潜在靶基因。应用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)验证芯片检测结果。结果:与PC9细胞比较,PC9/AB2细胞中有36个miRNA表达上调>2倍,有24个miRNA表达下调>2倍。RFQ-PCR验证了芯片的结果。软件预测发现,16个miRNA有潜在靶基因,其中11个miRNA的靶基因>100个。结论:筛选获得的差异表达miRNA可能通过调控其靶基因而参与人肺腺癌细胞对吉非替尼的耐药。
- 王永生张颉陈墨李冰况鹏李嘉瑜任胜祥唐亮周彩存
- 关键词：微RNAS微阵列分析吉非替尼
- 非小细胞肺癌驱动突变基因的研究进展被引量：1
- 2013年
- 肿瘤相关分子标记物的发现,导致靶向治疗药物迅速发展。我们对近期在非小细胞肺癌中发现的可能影响靶向治疗的相关分子标记物,即所谓的驱动突变基因进行综合分析。期待依据肿瘤个体基因情况而决定的靶向治疗,可使患者在一定程度上获得更大治疗收益。
- 刘璐周彩存
- 关键词：非小细胞肺肿瘤
