国家自然科学基金(30873032)
- 作品数:5 被引量:12H指数:3
- 相关作者:杜军江冠民方瑞王昊李玲玲更多>>
- 相关机构:中山大学广州医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 抗Nodal单克隆抗体的制备及夹心ELISA试剂盒的研制被引量:1
- 2012年
- 利用Nodal成熟肽为抗原免疫小鼠,取其脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法、融合细胞有限稀释法克隆筛选出阳性单克隆杂交瘤细胞株,接种至小鼠腹腔,培养后抽取腹水并用饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,从而获得抗Nodal单克隆抗体。该单克隆抗体经特异性验证实验后,与Nodal的多克隆抗体兔血清一道分别作为夹心ELISA检测试剂盒的上下层抗体使用,建立了以Nodal为抗原的夹心ELISA试剂盒的检测方法,并进行了对肿瘤细胞提取物、肿瘤小鼠血清的检测。该研究为该试剂盒在肿瘤诊断方面的应用奠定了基础。
- 严力韬张帆王昊权美玉杜军
- 关键词:NODAL单克隆抗体ELISA试剂盒
- 结直肠癌组织中成纤维细胞激活蛋白的表达及临床意义被引量:3
- 2012年
- 目的探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在结直肠癌组织中的表达及其与各病理学指标之间的关系。方法应用免疫组织化学染色法检测55例结直肠癌组织和50例正常结直肠组织中FAP的表达,观察阳性细胞在不同组织中的分布数量,结合肿瘤分期、有无淋巴结转移及不同浸润深度等病理学指标,评价FAP表达与结直肠癌病理特征的相关性。结果正常结直肠组织中几乎无FAP表达,少数癌细胞有微弱表达。FAP阳性细胞主要为结直肠癌间质组织中的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)。TNMⅢ~Ⅳ期标本中FAP阳性细胞为(40.1±15.9)个,多于Ⅰ-Ⅱ期的(18.3±7.7)个(P〈0.01);且阳性细胞数量与分期程度相关(r=0.544,P〈0.01)。淋巴结转移组中阳性细胞为(44.4±13.3)个,多于无淋巴结转移的(18.5±8.1)个(P〈0.01);且阳性细胞数量与有无淋巴结转移相关(r=0.793,P〈0.01)。不同浸润深度T2、T1和T4组标本中FAP阳性细胞数分别为(25.2±8.9)、(32.4±19.3)和(29.2±16.5)个(P〉0.05);阳性细胞数量与浸润深度无关(r=0.003,P〉0.05)。结论FAP在正常结直肠组织中无表达.而主要表达于结直肠癌组织中的CAFs中。FAP阳性细胞与结直肠癌的TNM分期及淋巴结转移相关。
- 崔博王绮雯方瑞杜军张继民
- 关键词:结直肠肿瘤成纤维细胞激活蛋白肿瘤相关成纤维细胞
- 利用TNF-α诱导建立结肠癌细胞HCT116体外侵袭模型
- 2012年
- 该研究利用TNF-α诱导建立肿瘤细胞体外侵袭模型,为进一步的研究提供基础。利用20 ng/mL TNF-α刺激结肠癌细胞HCT116 7 d后,使用流式细胞术检测HCT116细胞的CCR7和CXCR4受体表达量的变化,并利用Transwell小室检测TNF-α刺激对CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力的影响。实验结果显示,20 ng/mL TNF-α刺激7 d后的HCT116细胞的CCR7和CXCR4表达量均显著增加,侵袭能力也增强,且使CCL21、SDF-1介导的细胞迁移与侵袭能力显著增强。结果说明了本实验利用TNF-α诱导HCT116细胞,成功建立了HCT116的体外侵袭模型,为接下来的研究提供了细胞模型基础,也为进一步的药物筛选提供了基础。
- 由振源陈丹扬刘楚琪袁慧敏王红胜杜军
- 关键词:TNF-ΑCCR7CXCR4
- 小鼠成纤维细胞激活蛋白α二肽基肽酶核心序列原核表达与纯化及复性被引量:4
- 2009年
- 目的:构建小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化核心序列(FAPαc)的高效原核表达载体,进行该序列的原核表达、纯化和复性,为下一步高效抗体制作和以FAPα为靶标的抗肿瘤疫苗研发提供实验基础。方法:用PCR技术,从质粒pSecTag2/Hy-groB-FAPα中扩增出编码FAPα二肽基肽酶催化核心区域的基因片段,与原核表达载体pET28α(+)连接,在BL21(DE3)工程菌中实现重组蛋白His6-FAPαc的表达,并进行纯化和复性。结果:成功构建了小鼠来源的FAPα二肽基肽酶催化核心区域的原核表达质粒,通过对转化该质粒后的感受态细菌进行菌液PCR鉴定以及对该质粒进行BamHI和XhoI双酶切鉴定,鉴定结果与预期结果完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAPαc的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,表达产量占菌体总蛋白>70%;纯化了该融合蛋白,纯化后的蛋白纯度通过灰度分析>99%;对该融合蛋白进行了复性,复性后该融合蛋白由不溶的包涵体状态变为可溶的水溶状态。结论:成功表达、纯化和复性了FAPα二肽酶催化核心区域FAPαc,为深入开展FAPα的研究奠定基础。
- 江冠民刘鹏李小青王震衣艳梅杜军
- 关键词:复性
- 人源Nodal成熟肽的原核表达及多克隆抗体的制备被引量:4
- 2011年
- 目的:表达人Nodal成熟肽,免疫小鼠制备其多克隆抗体。方法:构建原核表达质粒pReceiver-hNodal,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His6-hNodal融合蛋白,融合蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后,回收融合蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。通过间接ELISA、Westernblot和免疫细胞化学染色和间接免疫荧光等方法检测抗体的效价和特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了与预期理论值大小相符的Mr约13 000的人Nodal成熟肽的融合蛋白,通过免疫小鼠制备的多克隆抗体效价高、特异性强。结论:成功制备了抗人Nodal成熟肽多克隆抗体,为进一步深入研究Nodal在肿瘤发生发展过程中的生物学功能奠定了基础。
- 李玲玲江冠民张革王昊方瑞杜军
- 关键词:原核表达纯化多克隆抗体