苏州市科技发展计划(SYS201046)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 含hNIS报告基因的乏氧调控重组质粒的构建及其功能鉴定
- 2011年
- 目的构建乏氧应答启动子调控的人钠/碘共同转运体(hNIS)报告基因重组质粒,为实体瘤微环境乏氧的实时监测提供研究基础。方法合成乏氧反应元件(HRE)的核苷酸片段,克隆入pGL3-promoter,构建为pGL3-promoter-5×HRE载体。然后将扩增的hNIS基因插入pGL3-promoter-5×HRE载体中,构建为pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒并进行测序验证。以DMSO处理组作为对照,CoCl_2处理HEK293细胞模拟乏氧;将经验证的pShuttle-NIS质粒转染HEK293乏氧细胞,同时将构建的pcDNA3.1-HIF-1α质粒和pShuttle-NIS质粒按照3:1比例转染HEK293细胞,转染空质粒pcDNA3.1和pShuttle-NIS质粒组作为对照。通过qRT-PCR法检测hNIS基因表达的变化。并用高锝酸盐(^(99m)TcO_4^-)处理双质粒共转染的HEK293细胞,洗脱游离^(99m)TcO_4^-后通过γ计数器采集细胞放射性计数,检测所表达NIS蛋白的功能。结果克隆的基因产物与预期一致,序列无碱基的突变。共转染HIF-1α质粒组及转染pShuttle-NIS的CoCl_2处理组,其hNIS mRNA的表达量显著高于转染空质粒及DMSO处理组(均P<0.01)。共转染HIF-1α质粒组细胞的^(99)TcO_4^-摄取率显著高于空质粒对照组(P<0.01)。结论 pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒转染后能介导细胞摄取^(99m)TcO_4^-,为微环境细胞乏氧的核素显像提供实验依据。
- 胡群超周俊东顾科吴锦昌
- 关键词：报告基因乏氧乏氧诱导因子-1Α
