浙江省自然科学基金(LY12C10001)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：周丽萍余勤刘伟胡韶君刘丽珍更多>>
- 相关机构：浙江中医药大学浙江大学医学院附属第一医院台州职业技术学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技厅新苗人才计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- G—CSF、AMD3100对大鼠间充质干细胞增殖、迁移和黏附能力影响的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨粒细胞集落刺激因子（G—CSF）、AMD3100对大鼠间充质干细胞（MSCs）增殖、迁移和黏附的影响。方法采用MTT比色法、Transwell迁移法和黏附试验分别检测体外G—CSF、AMD3100对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力的影响。结果在G—CSF质量浓度为200μg／L、AMD3100质量浓度为0．5mg／L时MSCs增殖能力最强；在G-CSF质量浓度为200μg／L、AMD3100质量浓度为0mg／L时MSCs迁移能力最强；在G-CSF质量浓度为200μg／L、AMD3100质量浓度为0．5mg／L时MSCs黏附能力最强。结论体外G—CSF对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力呈促进作用，而AMD3100呈抑制作用。
- 董晖余勤刘丽珍王艳宣晓波王标单威周丽萍刘伟
- 关键词：粒细胞集落刺激因子AMD3100间充质干细胞增殖
- HIF-1α对间充质干细胞SDF-1/CXCR4的调控作用研究被引量：1
- 2014年
- [目的]探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对间充质干细胞基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的调控作用。[方法]贴壁法培养ICR小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs);采用RNA干扰技术用SuperFectinTMⅡ转染HIF-1αsiRNA于MSCs;实验分为五组:常氧组、缺氧组、转染Control siRNA组、转染HIF-1αsiRNA常氧培养组、转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组;RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA表达水平;Western blotting检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4蛋白表达水平。[结果]同常氧组比较,缺氧组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平提高(P<0.05);同转染Control siRNA组比较,转染HIF-1αsiRNA常氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);同缺氧组比较,转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。[结论]缺氧可使MSCs的HIF-1α、SDF-1α、CXCR4的表达提高,常氧与缺氧条件下抑制HIF-1α的表达可使SDF-1α、CXCR4的表达降低,HIF-1α在间充质干细胞中对SDF-1/CXCR4有调控作用。
- 周丽萍余勤刘丽珍刘伟胡韶君
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α间充质干细胞基质细胞衍生因子-1ΑCXC趋化因子受体4
- MMP-9促进间充质干细胞穿越血脑屏障的作用研究被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）开放血脑屏障（BBB）,促进大鼠间充质干细胞（rMSCs）穿越BBB的作用.方法 构建体外BBB模型,运用Transwell细胞迁移率实验明确MMP-9对体外BBB模型的穿透效果.体内实验：4周龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组、MMP-9处理组及MMP-9抑制剂（TIMP-1）干预组;HE染色观察各实验组不同时间点（0.5、1、3、7、14d）的大脑皮质病理变化和检测其脑含水量,EB值法检测BBB通透性;同时采用Western Blot测定大鼠皮质中MMP-9蛋白表达和免疫组织化学法测定大脑皮质内5-溴-2-脱氧嘧啶（Brdu）标记rMSCs阳性细胞数量.结果 Transwell细胞迁移率实验显示,缺氧状态下各组穿过小室的rMSCs数量均明显高于常氧,差异有统计学意义（P＜0.01）;MMP-9处理组穿过小室的rMSCs数量明显高于阴性对照组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01）.体内实验结果表明：与HIBD组相比,MMP-9处理组脑含水量、BBB通透性增加程度均有所提高;TIMP-1干预组的相应指标均有所降低.大鼠皮质中MMP-9蛋白表达水平具有时间依赖性,MMP-9处理组1～3 d时含量达到最高,明显高于HIBD组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）,之后表达开始回落,但仍有稳定表达.MMP-9处理组穿越BBB的Brdu阳性细胞数比HIBD组多,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）.结论 大鼠缺氧缺血后MMP-9表达升高,可介导开放BBB,促进rMSCs穿越BBB.
- 周丽萍余勤林洁胡韶君
- 关键词：间充质干细胞基质金属蛋白酶-9血脑屏障
- HIF-1α基因慢病毒载体的构建和鉴定
- 2012年
- [目的]构建带有大鼠HIF-1α基因的慢病毒表达载体,并进行病毒颗粒的包装与对293T的转染。[方法]从pEGFP-N1-HIF-1α载体中扩增出HIF-1α基因片段,将目的基因与pLenti6.3-MCS-RES2-EGFP载体连接,获得慢病毒表达载体pLenti6.3-HIF-1α-IRES2-EGFP,并用磷酸钙转染法将其与慢病毒包装系统共同转染到293T细胞内进行病毒包装,48h后收集上清液并过滤,按不同感染复数感染293T细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达来测定病毒滴度和感染效率。[结果]构建了共表达HIF-1α基因和EGFP基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-HIF-1α-IRES2-EGFP,经PCR及测序结果证实,并对其成功包装出慢病毒,病毒滴度为4×106TU/ml。[结论]成功构建出HIF-1α基因重组慢病毒载体pLenti6.3-HIF-1α-IRES2-EGFP并能有效的包装出慢病毒。
- 王标余勤周丽萍付珊朱振洪单威刘伟胡韶君
- 关键词：HIF-1Α慢病毒载体293T细胞
