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基于LC-MS/MS技术的代谢组学分析方法研究: <正>代谢组学是近十年来发展起来的一门新兴学科,并已成为系统生物学的重要组成部分。它主要针对生物体系受外部刺激或扰动后所产生的内源性小分子代谢物的整体及其动态变化规律进行研究;并将确定该变化规律与生物过程的有机联系。近五...; 陈艳华; 文献传递

基于快速高分辨液相色谱串联质谱技术的代谢组学尿液分析方法的建立被引量：21: 2011年; 采用快速高分辨液相色谱(RRLC)分离系统与QTRAP型及QTOF型MS/MS仪联用技术,通过考察尿液样本前处理方法,优化液相色谱条件和质谱检测参数,建立了用于尿液中代谢物分析的RRLC-MS方法。采用本方法对尿液浓度下的20种代表性代谢物进行了检测,考察了方法的灵敏度和精密度,证明本方法适用于尿液代谢组学的研究。对穿插在检测序列中的生物质控样本的监测结果表明,本方法的可重复性及获得的数据的可靠性良好。本方法已成功地应用于乳腺癌和宫颈癌的尿液代谢组学研究以及可能生物标志物的检测。; 陈艳华张瑞萍宋咏梅董立佳詹启敏再帕尔.阿不力孜; 关键词：代谢组学

代谢组学血浆样品前处理及其快速高分辨液相色谱-质谱分析方法研究被引量：13: 2011年; 采用快速高分辨液相色谱-质谱联用技术,对代谢组学研究中血浆样品的前处理方法进行了考察及优化,建立了用于血浆中小分子代谢物分析的前处理方法。通过考察有机溶剂沉淀蛋白(不同溶剂系统)和固相萃取(Solid phase extraction,SPE)两种方法对血浆中蛋白质去除程度及16个代表性化合物的提取效果,确定采用乙腈沉淀蛋白法;进一步对乙腈沉淀蛋白法进行了细致的优化,确定使用3倍体积的冷藏乙腈慢速沉淀可以达到最佳的处理效果。对血浆中10种代表性化合物进行了方法学考察,结果表明,本方法重现性、精密度及样品冻融稳定性均良好。对穿插在检测序列中的生物质控样本检测结果进行主成分分析(Principal componentanalysis,PCA),证明本方法在代谢组学研究中的可重复性及获得的数据的可靠性良好,适用于代谢组学研究。; 徐婧田亚平陈艳华张瑞萍杨芬宋咏梅再帕尔·阿不力孜; 关键词：代谢组学

基于RRLC-MS／MS方法的恶性肿瘤代谢组学研究被引量：1: 2009年; 采用基于LC—MS／MS技术的代谢组学方法，寻找恶性肿瘤患者尿液中的内源性小分子生物标志物，是具有前沿性和实用性的研究课题。LC-MS／MS技术具有高灵敏度，可以对尿液中微量代谢物进行定性与定量分析，并寻找与鉴定出新的内源性小分子生物标志物，可最终建立诊断指标。同时，将化学计量学方法用于大量、多维的谱学数据分析，充分挖掘数据中的潜在信息和内在联系，有利于发现小分子生物标志物，并将其与生物体的生物学特性和临床特征进行关联，力求阐明其生物学意义。本研究思路如Scheme 1所示。; 陈艳华张瑞萍宋咏梅詹启敏再帕尔·阿不力孜; 关键词：代谢组学恶性肿瘤 LC-MS/MS 分子生物标志物化学计量学方法 SCHEME

拟南芥LFR原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备被引量：5: 2008年; 拟南芥中有一类含ARM结构域的蛋白质,研究表明它们中的一些在植物的生长发育和激素应答等方面发挥着重要的作用.在拟南芥突变体筛选中,获得了一个推测编码蛋白含ARM重复序列的新基因突变体lfr(leaf and flower relatedmutant),它在叶子和花的发育过程中表现出较明显的表型.为进一步研究该基因编码蛋白的生物学功能及其分子作用机制,构建了pGEX-2TGST∶LFR融合蛋白重组表达载体,将重组质粒转化到工程菌中诱导表达菌体蛋白,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果表明,融合重组蛋白成功获得了高效表达,分子质量在77ku左右.重组蛋白经谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签蛋白亲和层析法纯化,SDS-PAGE制备胶割胶富集,电洗脱法纯化后得到纯度较高的抗原.经对新西兰兔进行5次免疫,获得了多克隆抗血清.采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化,结果得到只识别LFR重组蛋白的抗血清.进一步提取拟南芥野生型及突变体的核蛋白,经蛋白质印迹检测,结果显示,在分子质量50ku左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗血清可以与拟南芥LFR蛋白特异性结合.; 高宁王志娟曾博崔素娟; 关键词：拟南芥原核表达多克隆抗体

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全球变化研究国家重大科学研究计划(2006CB910600)