国家科技重大专项(2008zx10002-011)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王升启李英李丹丹王学军吴小桃更多>>
- 相关机构：安徽医科大学天津中医药大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人工microRNA抗乙型肝炎病毒效果初探被引量：4
- 2011年
- 目的:设计靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因保守区的人工microRNA(amiRNA),考察其对HBV基因表达的抑制作用。方法:比对HBV全基因组现有序列,选择保守区设计amiRNA,定向克隆到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体,将amiRNA载体与HBV复制载体pHBV1.31共转染HepG2细胞,72 h后收取细胞上清,ELISA检测HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)的含量,荧光定量PCR检测HBV DNA含量。结果:amiRNA可显著抑制细胞上清HBsAg、HBeAg和HBV DNA的水平。结论:amiRNA作为防治HBV感染的潜在有效手段之一值得进一步深入研究。
- 赵海峰李丹丹李英胡伟王学军王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒RNA干扰
- 抑制核转录因子PPARα的反义寡核苷酸的抗乙型肝炎病毒活性研究被引量：6
- 2011年
- 目的:研究靶向过氧化物酶体增殖活化受体α(PPARα)的寡核苷酸是否具有抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的活性作用。方法:反义寡核苷酸作用于能稳定表达HBV丹氏颗粒的HepG2.2.15细胞,ELISA检测细胞上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)的分泌;实时荧光定量PCR考察反义寡核苷酸对HBV DNA复制水平的影响;通过反转录PCR和Western印迹考察反义寡核苷酸作用于细胞后靶基因及靶蛋白的差异表达情况。结果:抑制PPARα表达的反义序列PPARα-2可剂量依赖且特异性地抑制肝癌细胞中HBsAg和HBeAg的表达,且显著降低细胞中PPARαmRNA水平和蛋白水平。结论:通过筛选初步确定了基于PPARα设计的反义寡核苷酸有较好的抗HBV活性,同时也验证确定了PPARα可能成为抗HBV药物的新型作用靶点。
- 吴小桃杨静王学军李丹丹李英鲁丹丹王升启
- 关键词：乙型肝炎病毒反义寡核苷酸
- 基于Avi-tag技术的人胚肾细胞内增强型绿色荧光蛋白的生物素化、纯化和检测方法被引量：1
- 2011年
- 目的:建立并优化基于Avi-tag标签技术的人胚肾细胞增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的定点生物素化标记、纯化和检测方法。方法:分别构建具有Avi-tag标签的eGFP真核表达载体plenti-Avi-eGFP和BirA酶真核过表达载体pQCXIH-BirA,将plenti-Avi-eGFP和pQCXIH-BirA共转染人胚肾293T细胞,12 h后观察Avi-tag标签对eGFP蛋白在细胞内定位的影响;48 h后裂解细胞,用链霉亲和素珠子纯化生物素标记的eGFP,SDS-PAGE观察eGFP纯化和富集情况,并优化基于Western印迹的生物素化eGFP检测方法。结果:Avi-tag标签对eGFP在细胞内的定位无影响,同时BirA酶在293T细胞内可将带Avi-tag标签的eGFP标记上生物素;生物素化的eGFP可特异性地被链霉亲和素珠子纯化和富集,纯度可达95%;Western印迹检测生物素化蛋白的最终条件为5%的BSA作为封闭液和终浓度为100 ng/mL的链霉亲和素-HRP。结论:建立了基于Avi-tag技术的人胚肾细胞内增强型绿色荧光蛋白的生物素化标记、纯化与检测方法,为该方法的广泛应用奠定了前期技术基础。
- 李丹丹李英吴小桃鲁云霞王学军王升启
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白人胚肾细胞
- 抗HBV反义寡核苷酸的筛选
- 2011年
- 目的筛选出对HBV有抑制作用的反义寡核苷酸(AS-ONs),为HBV的预防和治疗提供基础。方法合成5条与HBV互补的反义寡核苷酸,转染HepG2.2.15细胞,运用荧光定量PCR和酶联免疫法测定反义寡核苷酸对细胞培养液中HBVDNA和HBsAg、HBeAg的抑制作用。结果寡核苷酸序列Ⅰ(TAC CTC TTG TAG TGT AGT CCT)在HepG2.2.15细胞能抑制HB-sAg、HBeAg、HBV的DNA表达。结论靶向C基因区AS-ONs能够剂量依赖性地抑制HBV的复制,可能发展成为新型抗HBV药物。
- 陈玉钟芝茵吴小桃陈志武杨静王升启
- 关键词：乙肝病毒寡核苷酸药物
