国家自然科学基金(30873014)
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 相关作者：段连宁罗渊陆承荣王喆向培德更多>>
- 相关机构：空军总医院第四军医大学河北北方学院更多>>
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- 小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,为研究移植前诱导免疫耐受或移植后输注供者细胞促进植入提供研究平台。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,移植前1 d予450 cGy全身照射(TBI)后,随机分为2组,实验组移植0 d输注C57BL/6雄性小鼠骨髓有核细胞5×107/只,对照组不予移植。然后监测受鼠造血恢复、检测供鼠性别决定基因(SRY)判断植入情况,以及外周血供者细胞尤其CD3+细胞嵌合状态,同时观察小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生情况。结果对照组小鼠均存活,仅表现轻度aGVHD,血象移植后30 d内基本恢复正常水平。实验组小鼠SRY基因在移植后+14 d、+30 d、+60 d时检测PCR结果均阳性,供鼠外周血淋巴细胞、单核细胞、粒细胞嵌合率在移植后14 d分别为23.8%、36.9%%、19.4%;30 d分别为49.9%、53.2%、54.4%;60 d分别为67.6%、51.6%、56.9%,其中CD3+细胞嵌合率分别为4.4%、21.2%、54.4%。结论 450 cGyTBI的非清髓性预处理方案,可以诱导受鼠免疫耐受、供者骨髓细胞植入,嵌合率处于中低水平混合嵌合状态。
- 李凤段连宁王喆罗渊陆承荣向培德纪树荃
- 关键词：非清髓性预处理单倍体骨髓移植动物模型
- 白血病细胞系NK细胞配体表达及其对NK-92细胞杀伤敏感性的研究被引量：3
- 2012年
- 目的:检测白血病细胞系NK配体表达情况以及对NK-92细胞的敏感性,探讨NK配体表达与NK杀伤敏感性的关系。方法:通过半定量RT-PCR的方法,以β-actin为内参基因,分别检测U937、CEM、KG-1a、HL-60、NB4、Reh和LCL等7种细胞表面MICA、MICB、ULBP1、PVR、Nectin-2、LFA-3、LLT-1、HLA-E、HLA-F和HLA-G等10种NK配体的表达情况。通过流式细胞术,用CFSE和PI双染法,检测NK-92细胞对以上7种白血病细胞系的杀伤效应。结果:根据NK-92细胞对靶细胞的杀伤效应强弱,将以上7种白血病细胞系分成NK敏感组(U937,CEM,KG-1a)、中度敏感组(HL-60、NB4)和不敏感组(Reh,LcL)三组。NK配体PVR和HLA-F在组间的差异具有统计学意义(P值分别为0.017和0.016),不敏感组的PVR转录水平最低而HLA-F水平最高,其他配体间则无显著性差别。结论:本研究初步表明PVR和HLA-F是人为干预肿瘤细胞耐受NK细胞的两个靶点分子。
- 罗渊索塔林李燕葛淑静周洪哲唐捷段连宁
- 关键词：白血病自然杀伤细胞受体
- 实时定量PCR检测急性白血病细胞系自然杀伤细胞配体的表达被引量：2
- 2013年
- 目的利用实时定量PCR方法检测急性白血病细胞系的NK配体表达，探讨不同来源白血病的NK配体差异表达规律。方法通过实时定量PCR方法，以p—actin为内参基因，分别检测急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞系（CEM、JurkatT、Reh）和急性髓系白血病（AML）细胞系（HL-60、KG-1a、NtM）表面23种NK配体（MICA、MICB、ULBP-1、ULBP-2、ULBP-3、ULBP-4、HLA—E、HLA—G、CD48、NBTA、HLA—F、LLT-1、PVR、Nectin2、CD72、CD80、ICAM-1、LFA-3、CRACC、Fas、DR4、DR5、TNFRl）的表达情况，利用独立样本t检验进行组问比较。结果有4种NK配体的表达水平在ALL组和AML组间差异具有统计学意义。其中，ULBP-2ALL组（CEM细胞：1，JurkatT细胞：0．617，Reh细胞：0．246）高于AML组（HL-60细胞：0．000，KG-1a细胞：0．003，NB4细胞：0．000）（P=0．047），CD48、PVR（PVR一1、PVR一2）和DR4AML组（HL-60细胞分别为13．987、4．403、i0．334、8．71I，KG—la细胞分别为5．387、2．900、7．315、4．512，NB4细胞分别为7．763、3．248、7．049、6．127）高于ALL组（CEM细胞均为1，JurkatT细胞分别为2．035、1．553、3．888、0．449，Reh细胞分别为1．559、0．000、0．000、1．304）（P=0．044、0．014、0．014、0．011），而其余配体表达水平组间差异无统计学意义。结论ULBP-2、CD48、PVR和DR4可能是ALL和AML的差异表达基因，为应用基于NK细胞的过继免疫治疗打下基础。
- 罗渊段连宁陆承荣蔡庆王喆鲍荣凤向培德
- 关键词：白血病
- 白血病细胞系K562可以诱导外周血NK细胞凋亡被引量：1
- 2012年
- 目的探讨红白血病细胞系K562对自然杀伤细胞(NK cells)诱导凋亡的作用。方法利用MACS免疫磁珠阴性分选纯化健康志愿者外周血NK细胞,用重组人白介素-2(rhIL-2)和干细胞培养液培养、观察NK细胞。把NK细胞与人红白血病细胞系K562按不同效靶比例和作用时间混合培养,用PE-AnnexinV/7-AAD凋亡试剂盒检测这两种细胞各自的凋亡情況。结果免疫磁珠分选后NK细胞纯度为(93.99±4.22)%;K562细胞诱导NK细胞凋亡作用时,在相同效靶比情况下,随着共培养时间的延长,NK细胞凋亡率显著增高;在相同培养时间的情况下,随着效靶比降低,NK细胞凋亡率逐渐升高,杀伤活性逐渐减低。结论红白血病细胞系K562可以诱导活化的NK细胞凋亡,这有可能是肿瘤细胞发生免疫逃逸的机制之一。
- 曹燕段连宁陆承荣罗渊向培德颜述葛淑静张艳君
- 关键词：NK细胞细胞凋亡免疫逃逸白血病
- 非清髓单倍体相合骨髓移植后自然杀伤细胞参与急性移植物抗宿主病的免疫病理学研究
- 2014年
- 目的研究自然杀伤(natural killer,NK)细胞在非清髓单倍体相合骨髓移植中参与急性移植物抗宿主病(acute graft vs host disease,aGVHD)过程的免疫病理。方法本实验建立了以C57BL/6小鼠为供鼠、CB6F1小鼠为受鼠的急性移植物抗宿主病模型。观察小鼠发生aGVHD的症状体征,流式细胞术检测小鼠移植后嵌合率及NK细胞活化受体NKp46表达强度,免疫荧光染色观察aGVHD靶器官部位NK细胞分布。结果移植鼠aGVHD发生率80%,移植+15 d达到完全嵌合,移植+25 d左右小鼠出现体质量减轻、耸毛、弓背等典型aGVHD症状。发生aGVHD小鼠外周血NK细胞NKp46表达强度低于未发生aGVHD小鼠,受鼠肝汇管区有供鼠源NK细胞浸润。结论在非清髓单倍体相合骨髓移植中NK细胞参与了肝处移植物抗宿主病的病理反应,NK细胞活化受体NKp46表达强弱与aGVHD的发生相关,NKp46表达强度可能为aGVHD诊断提供依据。
- 雷英英段连宁罗渊郭广进许鹏飞陆承荣王喆向培德
- 关键词：急性移植物抗宿主病自然杀伤细胞
- 自然杀伤细胞活化性受体的研究进展被引量：4
- 2010年
- 自然杀伤细胞（NK）是机体固有免疫系统的重要效应细胞,其不仅能杀死病毒感染细胞和肿瘤细胞,还参与调节固有免疫应答和适应性免疫应答.NK细胞对靶细胞的杀伤效应取决于NK细胞抑制性受体和活化性受体与其配体相互作用的整合,而NK细胞不杀伤正常组织是因为抑制性受体对HLA-Ⅰ类分子的优势识别.NK细胞抑制性受体研究比较成熟,近几年NK细胞活化性受体研究进展很快.
- 葛淑静段连宁
- 关键词：自然杀伤细胞活化性受体配体
- NK-92细胞的研究和应用进展被引量：1
- 2010年
- 罗渊段连宁
- 关键词：NK-92细胞过继免疫治疗肿瘤细胞系肿瘤生物治疗原代肿瘤细胞CIK细胞
- H2AX参与白血病细胞诱导NK细胞凋亡的研究被引量：1
- 2018年
- 目的初步探讨H2AX磷酸化水平是否参与白血病细胞系诱导自然杀伤(NK)细胞凋亡。方法体外培养NK92细胞,利用Fas激活性抗体CH11作用于NK92细胞,用流式细胞术检测NK92细胞的凋亡情况;检测NK92细胞凋亡的同时用流式细胞学技术检测H2AX磷酸化的水平。结果随着CH11浓度(0、2.5、5、10、20μg/ml)的升高,NK92细胞凋亡现象明显增加,并呈剂量依赖性,表明NK细胞凋亡随着CH11浓度的升高而增加;同时H2AX的磷酸化水平也随CH11浓度(0、5、10、40、80μg/ml)逐步增高,并呈剂量依赖性,提示H2AX的磷酸化作用参与细胞凋亡过程,并且随浓度的增加而增加。结论 H2AX的磷酸化作用参与白血病细胞诱导NK细胞的凋亡过程。
- 乔婷婷罗渊陆承荣段连宁
- 关键词：NK细胞细胞凋亡白血病
- 造血干细胞移植后供者淋巴细胞输注研究进展被引量：5
- 2010年
- 供者淋巴细胞输注(DLI)是有效的过继免疫治疗措施,在造血干细胞移植(HSCT)前输注有利于诱发并清除受者同种异体反应T细胞预防排斥的作用。在HSCT后输注有促进植入和抗白血病复发的作用。特别是在非清髓性-HSCT后行DLI可在低移植相关并发症基础上增强移植物抗白血病(GVL)效应。
- 王喆段连宁
- 关键词：供者淋巴细胞输注异基因造血干细胞移植过继免疫治疗
- 移植前输注供体细胞的小鼠单倍体相合骨髓移植实验被引量：2
- 2011年
- 目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,探讨移植前输注供体细胞的造血干细胞植入效果。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前3d经尾静脉输注供鼠脾细胞或骨髓细胞3×107,输注细胞后24h和48h分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015g/d,移植前1d予450cGy全身照射(TBI),移植当天输注供鼠骨髓有核细胞5×107/只。监测受鼠白细胞恢复、Y染色体性别决定基因(SRY)以及外周血供鼠CD3+细胞嵌合状态。结果单纯给予TBI小鼠均存活,且移植后30d白细胞恢复正常,TBI+骨髓细胞移植(TBI+BMT)组移植后14、30、60d时外周血SRY基因PCR检测结果均阳性,60d供体CD3+细胞嵌合率达54.4%。移植前输注供体脾细胞组嵌合率最高,移植后60d达93.5%±4.8%,优于移植前输注供体骨髓细胞组(P<0.05)。结论 450cGy TBI的非清髓性预处理可以成功建立非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,移植前输注供体脾细胞可促进造血干细胞植入。
- 李凤段连宁王喆罗渊向培德郭广进陆承荣纪树荃
- 关键词：非清髓性造血干细胞移植小鼠
