国家自然科学基金(81100518)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 相关作者：李治国张浩军沈宏杨方焦亮更多>>
- 相关机构：中日友好医院华北理工大学河北联合大学更多>>
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- 3种糖尿病肾病动物模型的共同差异基因筛选
- 2020年
- 目的糖尿病肾病动物模型是研究糖尿病肾病发病机制及药物治疗的一种重要手段。利用生物信息学技术分析BKS db/db、BKS eNOS^-/^-db/db和DBA-STZ3种糖尿病肾病小鼠模型肾中共同易感基因及通路,以期发现导致糖尿病肾病新的、重要的基因及通路,为糖尿病肾病发病机制研究提供新的思路。方法在GEO数据库中下载GSE33744数据集,用R语言limma包分别分析3种糖尿病肾病动物模型差异基因,取交集获得在所有模型中均差异表达的基因,对这些共同差异基因进行GO和KEGG以及PPI网络分析,筛选关键基因及通路。结果144基因在3种糖尿病肾病动物模型中均差异表达,GO分析发现这些差异基因在细胞膜、细胞外区富集;在先天免疫反应、氧化还原过程、免疫系统过程等生物过程中富集;在氧化还原酶活性、碳水化合物结合、血红素结合等分子功能中富集。KEGG析提示差异基因在PPAR信号通路、花生四烯酸代谢、丁酸代谢和昼夜节律等信号途径中富集。PPI网络分析发现,Cd68、Ccl6、Fcer1g、Tyrobp、Clec4n、Lyz2、Ms4a6d、Ly86、Ctss、Cfp和Mpeg1可能是糖尿病肾病发生的关键基因。结论一些基因和信号通路在多个糖尿病动物模型肾中均发生改变,提示这些基因和通路在糖尿病肾病发病过程中起到重要作用。
- 何海兰刘乐凯张浩军柳锐莲李宝嘉李治国
- 关键词：糖尿病肾病生物信息学差异表达基因
- 四氢生物蝶呤代谢紊乱导致血管内皮功能障碍分子机制的研究进展被引量：1
- 2013年
- 研究发现，许多疾病（高血压、糖尿病、肾脏疾病等）中均存在血管内皮功能障碍，而血管内皮功能的异常在这些疾病的发生发展中起到重要作用[1]。四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin，BH4）是内皮细胞一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）的必需辅因子。
- 吴磊李晓强曹凤宏李治国
- 关键词：生物蝶呤血管内皮5-羟色胺苯丙氨酸
- 敲低QDPR基因慢病毒构建及其干涉NRK-52E细胞效果研究被引量：2
- 2014年
- 目的构建醌型二氢生物碟呤还原酶(quinonoid dihydropteridine reductase,QDPR)敲低慢病毒模型,检测其对肾小管上皮NRK-52E细胞QDPR基因的敲低情况。方法设计合成QDPR的干涉shRNA序列,并重组入GP2慢病毒载体质粒,测序检验重组质粒是否转入该序列。三质粒共转染获得干涉慢病毒,将其感染NRK-52E细胞,新霉素筛选抗性细胞,用实时定量PCR、western blot和QDPR酶活性测量检测干涉效果。结果重组入GP2的序列与设计序列一致,病毒转染NRK-52E细胞使其获得了新霉素抗性,QDPR基因表达、蛋白含量及酶活性显著降低。结论本研究合成的QDPR基因敲低慢病毒能使NRK-52E细胞QDPR基因的mRNA转录、蛋白浓度及活性降低,为后续QDPR基因在糖尿病肾病中的作用研究提供了模型。
- 蒲志杰张景义孙耀东杨振邦杨向君何海兰刘业强孟令宇沈宏杨方李治国
- 关键词：慢病毒糖尿病肾病肾小管上皮细胞
- 四氢生物蝶呤代谢紊乱导致一氧化氮合酶解耦联的分子机制被引量：2
- 2013年
- 一氧化氮合酶(NOS)合成的一氧化氮(NO)是调节血管舒张功能的重要因子。四氢生物蝶呤(BH4)是NOS的重要辅助因子。BH4在体内的稳定性由从头合成、补救合成、氧化消耗及再循环所决定。当BH4/NOS的比例失调,可导致NOS催化L-精氨酸的作用解耦联,NOS催化产物由NO变为超氧阴离子(O2-)。O2-能与NO反应生成氧化性很强的氧亚硝基(ONOO-),ONOO-能迅速氧化BH4,加剧NOS的解耦联。NOS解耦联是高血压病、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病中内皮细胞功能障碍的重要原因,因而通过纠正NOS解耦联可有效改善内皮细胞功能,有望为保护血管内皮功能提供有效途径。
- 焦亮邓乃刚门秀丽李治国
- 关键词：四氢生物蝶呤一氧化氮超氧阴离子
- QDPR基因表达变化对高糖环境下NRK-52 E细胞氧化应激的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨醌型二氢生物喋呤还原酶（ quinoid dihydropteridine reductase, QDPR）表达变化对高糖环境下肾小管上皮细胞系 NRK-52E氧化应激的影响。方法利用慢病毒技术构建过表达及敲低QDPR基因的NRK-52E模型及其对照组,分别给予5.4 mmol/L及30 mmol/L葡萄糖培养基模拟正常及高糖环境,用流式细胞术dihydroethidium法检测各组细胞超氧阴离子（ O-2）含量。 Western印迹法检测超氧化物歧化酶1（superoxide dismutase 1, SOD1）在各组表达水平。结果高糖环境下,过表达QDPR基因组与空载对照组相比细胞O-2含量降低（P〈0.01）,SOD1表达下调（P〈0.01）。低表达QDPR基因组与随机序列对照组相比O-2含量升高（P〈0.05）,SOD1表达无明显变化。结论高糖环境下,QDPR基因高表达能降低NRK-52E细胞氧化应激,沉默QDPR基因能增加NRK-52E细胞氧化应激。 QDPR基因可能通过影响氧化应激而影响糖尿病肾病的发生发展。
- 孟令宇吴雪静蒲志杰杨向君张小路赵沙沙张景义张浩军李治国
- 关键词：氧化应激肾小管上皮细胞
- QDPR基因表达水平对肾小管上皮细胞系NRK-52E细胞DHFR表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的 OLETF大鼠醌式二氢生物喋呤还原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)存在K93T点突变,QDPR催化醌型二氢生物喋呤还原成四氢生物喋呤(tetrahydrobiopterin,BH4);二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)能将二氢喋呤还原成BH4,提示生物喋呤代谢与叶酸代谢通路之间有串扰。文中通过研究QDPR基因表达水平对肾小管上皮NRK-52E细胞DHFR表达的影响,探讨QDPR基因在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用机制。方法 Western blot检测高糖环境下NRK-52E细胞及OLETF大鼠DHFR蛋白表达情况。利用慢病毒技术感染NRK-52E细胞,制作空载过表达、过表达QDPR敲低随机序列对照和敲低QDPR模型。每组再分别给予5.4 mmol/L正常糖培养基和30 mmol/L高糖培养基培养细胞72 h,模拟DN模型。实验分组:NRK-52E对照组、NRK-52E高糖组、空载过表达病毒对照组、空载过表达病毒高糖组、QDPR基因过表达组、QDPR基因过表达高糖组、敲低随机序列对照组、敲低随机序列高糖组、QDPR基因敲低组、QDPR基因敲低高糖组。观察高糖环境QDPR基因的表达情况对DHFR蛋白表达水平的影响。结果 NRK-52E高糖组DHFR蛋白含量(0.33±0.16)低于NRK-52E对照组(0.64±0.05),差异有统计学意义(P<0.05);OLETF大鼠DHFR蛋白的表达水平(1.03±0.12)明显低于LETO大鼠的表达水平(1.56±0.16),差异有统计学意义(P<0.01)。与空载过表达病毒高糖组(0.63±0.08)相比,QDPR基因过表达高糖组DHFR蛋白含量(0.12±0.09)降低,差异有统计学意义(P<0.01);与敲低随机序列对照组(0.52±0.08)相比,QDPR基因敲低高糖组DHFR表达量(0.62±0.27)差异无统计学意义(P>0.05)。结论DHFR蛋白在DN的发生发展中可能起到重要作用,QDPR基因过表达使DHFR蛋白表达含量下降,QDPR基因过表达通过下调DHFR蛋白的表达水平进而影响DN的发展。
- 杨向君蒲志杰孟令宇马艳红何海兰熊浩吴雪静张浩军李治国
- 关键词：二氢叶酸还原酶肾小管上皮细胞
- 糖尿病肾病模型中UCH-L1蛋白表达变化的研究被引量：11
- 2012年
- 目的研究泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)蛋白在糖尿病肾病(DN)模型中的表达变化。方法原代培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予30mmol/L葡萄糖(高糖组)、5.4mmol/L葡萄糖(正常对照组),在0、8、16、72h采用MTT法动态观察两组细胞增殖情况,Western boltting检测UCH-L1蛋白表达情况。采用自发性2型DN模型OLETF大鼠,每4周一次动态监测血糖及24h尿蛋白定量,于36周时处死大鼠,观察肾组织病理改变并采用Western boltting分析肾皮质中UCH-L1的表达。结果高糖环境能抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖。与正常对照组相比,高糖组系膜细胞UCH-L1蛋白表达在8、72h时点明显降低,16h时点明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照LETO大鼠相比,OLETF大鼠血糖、24h尿蛋白定量均逐渐增高,36周时肾脏发生了DN的早期病理改变,且肾皮质中UCH-L1蛋白表达降低(P<0.01)。结论 UCH-L1蛋白表达在DN模型中以降低为主。蛋白降解途径失调可能在DN的发生、发展起到一定作用。
- 李治国张浩军焦亮王红盼杨方沈宏李平
- 关键词：糖尿病肾病肾小球系膜细胞
- QDPR基因表达变化对高糖环境下NRK-52E细胞α-actinin表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探讨醌型二氢生物喋呤还原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)基因改变对高糖环境下肾小管上皮细胞系NRK-52Eα-辅肌动蛋白(α-actinin)的影响及其在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)中的可能作用机制。方法 Western-blot检测DN动物(OLETF大鼠)以及对照LETO大鼠肾皮质的α-actinin蛋白含量。构建过表达及敲低QDPR基因的NRK-52E及其对照模型,分别给予正常糖(5.4mmol/L)和高糖(30mmol/L)培养基培养72h,Western-blot检测α-actinin在细胞模型各组的表达水平。结果 OLETF大鼠肾皮质内α-actinin含量降低[(0.86±0.32)vs(0.31±0.22),P<0.01];NRK-52E高糖组的α-actinin含量降低[(0.80±0.13)vs(0.44±0.10),P<0.05];与空载过表达病毒对照组(0.66±0.04)比,空载过表达病毒对照高糖组(0.42±0.06)及QDPR基因过表达组(0.49±0.06)的α-actinin蛋白表达含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与QDPR基因过表达组相比,QDPR基因过表达高糖组的α-actinin含量降低[(0.49±0.06)vs(0.21±0.02),P<0.05];与空载过表达病毒对照高糖组比,QDPR基因过表达高糖组的α-actinin含量降低[(0.42±0.06)vs(0.21±0.02),P<0.05];与敲低随机序列对照组比,敲低随机序列对照高糖组的α-actinin降低[(0.93±0.09)vs(0.69±0.08),P<0.05];敲低QDPR基因不影响α-actinin蛋白表达量。结论α-actinin在DN模型中含量减少,QDPR基因可能通过α-actinin影响DN的发生、发展。
- 刘业强吴雪静刘瑞娟蒲志杰何海兰张浩军李治国
- 关键词：肾小管上皮细胞
