国家重点基础研究发展计划(2007CB914700)
- 作品数：2 被引量：13H指数：1
- 相关作者：黄凤杰成玉陈天璐何品刚刘玉敏更多>>
- 相关机构：华东师范大学上海交通大学附属第六人民医院上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：理学生物学医药卫生更多>>
- 基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱的高通量血清代谢组学方法被引量：13
- 2013年
- 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-QTOFMS)联用技术,对血清前处理进行了考察和优化,并对液-质联用分析条件进行了优化,旨在建立用于血清中广谱小分子代谢物分析的高通量强耐用代谢组学方法,以期满足大批次生物样本数代谢组学研究的要求(样本数≥400个).通过考察不同有机溶剂沉淀蛋白对血清中蛋白的去除程度及38个代表性标准品化合物的提取效果,确定采用甲醇/乙腈(体积比1∶9)沉淀蛋白法.血清和有机溶剂的体积比不小于1∶4时,达到最佳的沉淀蛋白处理效果,符合大批量样本测试的要求;预先冷藏沉淀蛋白的有机溶剂,涡旋2 min,超声1 min,加入有机溶剂后冷冻静置10 min,可以进一步提高前处理沉淀蛋白和化合物提取的效果.通过对不同流动相体系和梯度条件的考察,对液-质联用分析条件进行了优化.方法学考察结果表明,本方法重现性、精密度及稳定性均良好.对重现性和48 h稳定性数据进行变异系数分析和主成分分析法的多维分析,证明本方法在代谢组学研究中的可重复性及所得数据的可靠性.本方法高通量强耐用,每天可测定100多个血清样本(13 min测定1个样本),适用于代谢组学研究,特别是大批次生物样本的代谢组学研究.
- 成玉刘玉敏黄凤杰陈天璐郑晓皎赵爱华何品刚贾伟
- 关键词：代谢组学
- 结肠癌蛋白质双向电泳技术的建立
- 2010年
- 目的:建立结肠癌13cm和24cm非线性分离系统的2-D图谱,分析比较两者的分辨率。方法:提取结肠癌总蛋白,用pH3-10非线性干胶条对样品进行等电聚焦分离,并分别使用13cm和24cm电泳系统进行双向电泳,考马斯亮蓝G250染色,图像分析,比较对比两组2-D图谱,量化分析两种系统的分辨率差异。结果:在等点电3-10,分子量20-170kD范围内分别分离得到蛋白质斑点873个(13cm电泳系统)和1349个(24cm电泳系统)。对于24cm电泳系统,1mg蛋白质上样量的电泳图谱清晰,分辨率较好。结论:成功建立了高分辨率、简便易控的结肠癌蛋白质组双向电泳技术平台。
- 马怡茗赵玫时岚罗清钟佳伶刘健王佳黄常志
- 关键词：蛋白质组学双向电泳结肠癌
