广东省自然科学基金(04011381)
- 作品数：13 被引量：28H指数：5
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- 广东省湛江市农村人群肠道蠕虫感染调查被引量：5
- 2007年
- 目的了解湛江市农村人群肠道蠕虫感染现状。方法随机采集村民新鲜粪便,用直接涂片法及饱和盐水浮聚法检查虫卵,用盐酸左旋咪唑驱虫法检查感染钩虫种类。结果粪检190人,虫卵阳性78人,总感染率为41.1%。检出3种肠道蠕虫卵,其中钩虫感染率25.8%,蛔虫感染率12.1%,鞭虫感染率10.5%,有2种或3种虫卵阳性率为6.8%;不同地点各虫感染率不同;钩虫以50～70岁人群感染率较高,蛔虫、鞭虫以20岁以下人群常见;女性的钩虫感染率明显高于男性。药物驱虫后检获有十二指肠钩虫成虫、美洲钩虫成虫及雄性蛔虫,其中,十二指肠钩虫占钩虫比例87.4%,美洲钩虫占钩虫比例12.6%。结论湛江市农村人群感染蛔虫、鞭虫及钩虫常见,其中以钩虫感染最为严重。钩虫感染率较高与旱作生产生活方式密切相关。十二指肠钩虫在该地钩虫流行中占了重要地位。
- 彭礼飞何天文郑冼华何庆丰梁晓东
- 关键词：肠道蠕虫
- 十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7的原核表达、纯化及抗凝活性鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7并鉴定抗凝活性。方法运用RT-PCR扩增十二指肠钩虫抗凝蛋白AduNAP7成熟蛋白及其组成肽段AduNAP7A、AduNAP7B的编码序列;将编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a及pICET32,构建重组表达质粒;成功构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;用镍亲和层析一步纯化融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白;先后用几丁质亲和层析及镍亲和层析两个步骤纯化自切割后带6×his-tag的目的蛋白;用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测纯化表达产物的体外抗凝活性。结果获得AduNAP7、AduNAP7A及AduNAP7B的编码序列并成功构建了原核表达重组质粒;AduNAP7、AduNAP7A及Adu-NAP7B均在大肠中得到了高效可溶表达,纯化产物具有一定抗凝活性,它们延长aPTT比延长PT更有效。AduNAP7B的抗凝活性显著强于AduNAP7及AduNAP7A。结论AduNAP7具有较强抗凝活性,但显著弱于AcAP5、AcaNAP7及AcAPc2。AduNAP7的抗凝效应可能利于钩虫在人体内的吸血寄生生活,其抗凝作用机制有待进一步研究。
- 彭礼飞邓莉杨陈胡晶晶甘伟琼吴亚敏付汉维
- 关键词：十二指肠钩虫原核表达纯化抗凝活性
- Trx-NAP 5融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性检测被引量：2
- 2007年
- 目的:用大肠杆菌表达获得重组线虫抗凝血肽5(rNAP 5),为研究开发NAP5的功能与应用提供原料来源。方法:将扩增的NAP5基因经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与表达载体pET-32a连接。构建好的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,分别经IPTG和乳糖诱导表达,并探讨诱导表达条件,分析表达产物的可溶性情况。表达产物经镍亲和纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝活性。结果:成功构建了pET-32a/NAP5表达载体,IPTG和乳糖均能诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地可溶性表达。优化条件下每升LB培养基可获可溶性目的融合蛋白量达65.3mg。纯化的蛋白能明显延长PT及aPTT,7.0mg/L的蛋白平均约延长5.09倍aPTT,2.55倍PT。结论:在大肠杆菌中成功表达了具有很好生物活性的Trx-NAP5融合蛋白,为研究开发NAP5的功能与应用奠定了基础。
- 吴亚敏邓莉彭礼飞杨陈胡晶晶付汉维
- 关键词：融合蛋白大肠杆菌
- 十二指肠钩虫天冬氨酸蛋白酶抑制剂的克隆与表达被引量：1
- 2009年
- 目的克隆并表达十二指肠钩虫天冬氨酸蛋白酶抑制剂(Ad-API-1)。方法根据犬钩虫及锡兰钩虫API保守序列设计引物,RT-PCR扩增获得Ad-API-1完整阅读框序列,并将Ad-API-1成熟肽编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a,以构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,用Ni亲和层析进行纯化。结果成功克隆获得Ad-API-1完整阅读框序列;构建了pET32a/Ad-API-1重组质粒,Ad-API-1在大肠杆菌中得到了高效表达。结论成功克隆并表达Ad-API-1,为进一步研究Ad-API-1的功能,探讨其作为血清学诊断抗原或保护性疫苗奠定了基础。
- 张振林邓莉杨陈彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫克隆
- 犬钩虫C型凝集素AcaCTL-1基因的克隆及表达被引量：1
- 2010年
- 目的分离鉴定犬钩虫C型凝集素AcaCTL-1基因,并在大肠埃希菌中表达。方法根据EST序列设计引物,用RT-PCR及3′(RACE技术扩增获得AcaCTL-1全长cDNA序列,并对其进行初步生物信息学分析;将AcaCTL-1成熟肽编码序列克隆、连接到表达载体pET32a,构建重组质粒pET32a/AcaCTL-1;在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE分析表达情况,Ni亲和层析纯化可溶性蛋白。结果成功克隆了AcaCTL-1全长cDNA序列,其最大开放阅读框由525 bp组成,预测编码174个氨基酸残基组成的蛋白,含17个氨基酸组成的信号肽,为C型凝集素家族蛋白成员;构建pET32a/AcaCTL-1重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达。表达产物多以包涵体形式存在,小部分为可溶性蛋白。结论成功克隆并表达了犬钩虫C型凝集素AcaCTL-1基因,为进一步了解AcaCTL-1的功能奠定了基础。
- 邓莉金娴何庆丰许琴英吴亚敏彭礼飞
- 关键词：C型凝集素克隆
- 十二指肠钩虫脂肪酸与视黄醇结合蛋白(Ad-FAR-1)基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2007年
- 目的克隆十二指肠钩虫脂肪酸与视黄醇结合蛋白(Ad-FAR-1)基因并在大肠杆菌中表达。方法运用3′RACE及RT-PCR技术分别扩增Ad-FAR-1 cDNA部分片段,获得序列经拼接后利用在线BLAST程序检索GenBank中相似的核酸序列及推导的氨基酸序列;设计引物,将Ad-FAR-1成熟肽编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆到Ad-FAR-1全长cDNA序列并构建了pET32a/Ad-FAR-1原核表达重组质粒,Ad-FAR-1融合蛋白在大肠中得到了高效表达。结论成功获得并表达了十二指肠钩虫脂肪酸与视黄醇结合蛋白(Ad-FAR-1)基因,为进一步研究该蛋白的特性与功能奠定了基础。
- 彭礼飞胡晶晶邓莉杨陈甘伟琼吴亚敏付汉维
- 关键词：十二指肠钩虫原核表达
- 线虫抗凝血蛋白AcaNAP7基因克隆、表达及抗凝活性鉴定被引量：10
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达犬钩虫线虫抗凝血蛋白NAP7(AcaNAP7)成熟蛋白,并鉴定表达产物的抗凝活性。方法根据AcaNAP7的核苷酸序列设计引物,从克隆质粒pUCm-T/AcaNAP7中扩增编码AcaNAP7成熟蛋白的基因;扩增产物经双酶切定向克隆到原核表达载体PET-32a中;构建的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达;表达产物经镍琼脂糖凝胶FF纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化的部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝血活性。结果克隆了编码AcaNAP7成熟蛋白的基因并构建了重组表达质粒pET-32a/AcaNAP7;在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达了融合有硫氧还蛋白(Trx)的目的蛋白,产物主要以可溶形式存在;镍琼脂糖凝胶亲和纯化获得了纯度高达92%的目的蛋白;纯化产物能明显延长PT及aPTT,其延长PT比延长aPTT更有效。结论在大肠杆菌中成功表达了AcaNAP7融合蛋白,表达产物具有抗凝活性。该实验为进一步研究AcaNAP7的功能及应用奠定了基础。
- 彭礼飞杨陈王会兰吴亚敏邓莉吴铁胡晶晶
- 关键词：克隆抗凝活性
- 犬钩虫抗凝肽AcaNAP8的原核表达及其抗凝活性被引量：2
- 2010年
- 目的在大肠杆菌中重组表达犬钩虫抗凝肽AcaNAP8基因,并检测表达产物抗凝活性。方法设计引物,将AcaNAP8成熟肽编码序列克隆、连接到原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒;成功构建的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况;诱导表达的重组蛋白用Ni亲和层析进行纯化;用凝血酶原时间(PT)和活化的部分凝血活酶时间(aPTT)检测重组产物体外抗凝活性。结果成功构建了pET32a/AcaNAP8原核表达重组质粒,在大肠杆菌中成功表达并获得了重组AcaNAP8,表达产物能明显延长PT及aPTT。结论在大肠杆菌中成功表达了AcaNAP8融合蛋白,表达产物具有显著抗凝活性。该实验为进一步探讨AcaNAP8的作用机制及应用奠定了基础。
- 殷环邓莉王会兰吴亚敏彭礼飞
- 关键词：活性
- 十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物Ad-TIMPL-1基因克隆及其原核表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物(TIMPL)Ad-TIMPL-1基因并进行原核表达。方法分别用3’RACE及RT-PCR技术从十二指肠钩虫成虫cDNA中扩增编码Ad-TIMPL-1的cDNA3’末端及5’末端序列;序列经拼接后进行初步生物信息学分析;将Ad-TIMPL-1成熟肽编码序列克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒;重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆获得了编码Ad-TIMPL-1的全长cDNA序列并登记到GenBank(accession no.EF495071);Ad-TIMPL-1完整阅读框为396bp,编码132个氨基酸残基组成的蛋白,含16个氨基酸残基组成的信号肽;成功构建了原核表达重组质粒pET-32a/Ad-TIMPL-1,并在大肠杆菌中得到了表达。结论本研究首先从十二指肠钩虫中克隆到了Ad-TIMPL-1基因并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 邓莉邵正许琴英胡晶晶彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂克隆原核表达
- 一种独特的fⅦa/TF抑制剂:线虫抗凝血蛋白c2被引量：7
- 2006年
- 线虫抗凝血蛋白c2(NAPc2)是从犬钩虫中分离出来的一种蛋白,它通过结合于fXa的催化活性中心以外的部位而进一步特异性抑制fVⅡa/TF复合物。在国外,rNAPc2正作为一种新型抗凝药运用于临床试验中,它抗凝效果明显,半衰期长(>50 h),副作用小。此外,它还可能在治疗D IC、肿瘤等疾病方面具有潜在应用价值。本文就NAPc2的结构与功能、作用机制和临床应用研究进展做一综述并展望其应用前景。
- 王会兰彭礼飞
