浙江省自然科学基金(LY12H16007)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：许健岳静李毅金丽丽卢德赵更多>>
- 相关机构：浙江中医药大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省教育厅科研计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 白藜芦醇对HeLa细胞蛋白质组影响的研究被引量：4
- 2013年
- [目的]应用双向电泳及质谱技术研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对宫颈癌HeLa细胞蛋白质组的影响。[方法]经磺基罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法筛选对宫颈癌HeLa细胞有效的白藜芦醇浓度,流式细胞仪检测有效白藜芦醇浓度对HeLa细胞周期和凋亡的影响。HeLa细胞经白藜芦醇处理后,提取细胞总蛋白,应用双向电泳技术建立蛋白质组图谱,筛选白藜芦醇处理前后差异在2倍以上的蛋白质作为差异蛋白,进行质谱鉴定和生物信息学分析。[结果]50μmol/L以上浓度白藜芦醇24小时对HeLa细胞的活性产生影响,将细胞阻滞在S期,诱导HeLa细胞的早期凋亡,并呈剂量依赖性。通过差异蛋白质组分析筛选出12个差异蛋白质,包括原肌球蛋白、细胞核糖核蛋白C、锌指蛋白、钙连接蛋白、微管蛋白β、热休克蛋白70、α烯醇化酶、丙酮酸激酶、雌激素受体β、氨基甲酰磷酸合成酶,HeLa细胞经白藜芦醇处理后这些蛋白表达量均增加。[结论]白藜芦醇可能通过参与调节细胞的转移分化、凋亡、能量代谢等过程而起到抗肿瘤作用。
- 李毅卢德赵金丽丽岳静许健
- 关键词：白藜芦醇HELA细胞蛋白质组流式细胞仪
- hIL-2与ZsGreen双基因共表达腺相关病毒的包装及鉴定
- 2014年
- [目的]包装并鉴定带有人白介素2(hIL-2)及ZsGreen的双基因共表达的重组5型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 5,rAAV5),为今后利用5型重组腺相关病毒载体进行胰腺癌基因治疗提供研究基础。[方法]以5型腺相关病毒包装系统(helper-free system)为模版,PCR法扩增pLVX-IRES-ZsGreen和PES-IL-2模板上的IRES-ZsGreen和IL-2基因,利用酶切位点插入重组腺相关病毒骨架质粒,获得重组质粒pAAVhIL-2-IRES-ZsGreen。经三质粒共转染AAV293细胞包装重组腺相关病毒rAAV5-hIL-2-IRES-ZsGreen。荧光显微镜下检测病毒包装效率,超速离心纯化、浓缩重组病毒,qPCR测定病毒的滴度。重组病毒转导细胞经荧光显微镜检测、外源基因经PCR检测证实病毒包装结果。[结果]5型重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-IL-2-IRES-ZsGreen经双酶切和测序鉴定,确定其序列正确。荧光显微镜下观察三质粒共转染AAV293细胞72h后,病毒包装效率达90%以上。5型重组病毒感染HEK 293细胞48h有荧光出现,重组病毒基因组成功扩增出外源基因IL-2,证明有感染力的重组病毒包装成功。[结论]成功包装带有hIL-2及ZsGreen标记的双基因共表达重组腺相关病毒,滴度达到2.62×1012。
- 陈如意岳静章旭君黄春琦张婷许健
- 关键词：绿色荧光蛋白胰腺癌
