北京市自然科学基金(5072003)
- 作品数：7 被引量：49H指数：2
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- 相关领域：生物学文化科学医药卫生更多>>
- 实时荧光定量PCR技术的操作实践被引量：42
- 2011年
- 采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBRGreen I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验。介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性。
- 杨怡姝孙晓娜王小利沈思嗣李泽琳曾毅
- 关键词：荧光定量PCR熔解曲线
- 人APOBEC3G基因克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备
- 2008年
- 为了获得人APOBEC3G蛋白及其多克隆抗体,从H9细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得人APOBEC3G基因.将测序鉴定过的APOBEC3G基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在E.coli BL21(DE3)中高效表达,由于APOBEC3G蛋白C端融合了6×His标签,有助于对蛋白的纯化及鉴定.应用酶切技术、SDS-PAGE及Western Blot等方法确保基因片段的正确性和蛋白的特异性.纯化后的APOBEC3G蛋白用来免疫日本大耳白兔,用间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度,获得了纯度超过80%的APOBEC3G融合蛋白,抗APOBEC3G多克隆抗体滴度高达1:102 400.
- 李岚杨怡姝李泽琳曾毅
- 关键词：基因抗体纯化克隆
- 流式细胞术检测Vpr蛋白对细胞周期影响实验被引量：1
- 2010年
- 流式细胞术是生物学领域重要的检测技术。为实现实验教学与科研工作的紧密结合,该设计采用流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白阳性细胞比例和细胞周期分布,分析质粒转染的效率并研究蛋白的功能。通过2个经典的检测方案,使学生更好地理解和掌握流式细胞术的检测原理、操作步骤及结果分析方法。
- 王小利杨怡姝孙晓娜肖向茜沈思嗣
- 关键词：流式细胞术绿色荧光蛋白细胞周期
- 激光扫描共聚焦显微镜原位检测核酸及蛋白质的实验教学设计被引量：3
- 2011年
- 为实现实验教学与科研工作的紧密结合,该教学设计采用激光扫描共聚焦显微镜在细胞原位检测核酸和绿色荧光蛋白,分析融合蛋白的亚细胞定位。通过2个经典的检测方案,使学生更好地理解和掌握激光扫描共聚焦显微镜的检测原理、操作步骤及结果分析方法。
- 杨怡姝王小利沈思嗣肖向茜
- 关键词：激光扫描共聚焦显微镜绿色荧光蛋白碘化丙啶
- 新型内在抗病毒分子-Tetherin被引量：1
- 2010年
- 杨怡姝王小利李泽琳曾毅
- 关键词：TETHERIN人免疫缺陷病毒VPU
- TAR RNA结合蛋白在HIV-1感染中的作用
- 2010年
- TARRNA结合蛋白是细胞中双链RNA结合蛋白家族成员之一.它可以结合HIV-1TARRNA,并与Tat协同作用激活LTR表达,进而促进病毒的转录与翻译.TRBP也是将干扰素抗病毒通路与RNA干扰免疫通路相连的一种细胞蛋白.在干扰素诱生的PKR反应中,TRBP通过直接抑制PKR的自磷酸化、与PKR竞争通用的RNA底物或与PACT形成异源二聚体等机制抑制细胞内的PKR反应,从而降低了PKR介导的对病毒表达的抑制作用.TRBP与Dicer和Ago2等组成的RNA诱导沉默复合体,在RNA干扰中发挥着关键作用并调控随后的序列特异性降解.在HIV-1感染中,TRBP更倾向于促进病毒的表达与复制,因此TRBP也成为控制HIV-1感染的新靶点.
- 林晓燕杨怡姝曾毅
- 关键词：RNA干扰
- 反式激活应答元件RNA在HIV-1感染中的作用被引量：2
- 2010年
- 反式激活应答(transactivation response,TAR)元件RNA作为HIV-1中的一种非编码RNA,从转录与翻译水平负调控HIV-1的基因表达.同时HIV-1采取了相应的策略拮抗TAR RNA的负调控作用:病毒蛋白Tat或细胞蛋白TAR RNA结合蛋白(TRBP)结合TAR RNA后,分别在转录与翻译水平促进HIV-1的基因表达.此外,TAR编码的miRNA有助于保持HIV的潜伏感染及阻止细胞凋亡.TAR与其它蛋白间相互作用及其功能的研究对于深入了解HIV-1感染细胞后的调控机制,寻求新的抗HIV治疗靶点具有重要意义.
- 孙晓娜杨怡姝曾毅
- 关键词：微小RNA
